Зоонозные инфекции Микробиологическая диагностика ЧУМА Чума

Зоонозные инфекции Микробиологическая диагностика

ЧУМА • Чума – острое инфекционное заболевание с природной очаговостью, характеризующееся тяжелой интоксикацией, лихорадкой, поражением лимфатической системы с образованием бубонов, склонностью к генерализации инфекции с развитием септицемии, пневмонии, вовлечением других органов и высокой летальностью.

Таксономическое положение возбудителя чумы • Семейство Enterobacteriaceae • Род Yersinia • Вид Yersinia pestis – Y. pestis

Морфологические свойства Y. pestis • Короткие палочки овоидной формы (1, 5 х0, 5 мкм) • Грамотрицательные • Биполярно окрашиваются (по Леффлеру или Романовскому-Гимзе) • Неподвижые, имеют нежную капсулу • Спор не образуют

Y. pestis, окраска по Леффлеру (метиленовым синим)

Факторы патогенности Y. pestis • Адгезии – пили, структуры наружной мембраны • Инвазивные – фибринолизин, нейраминидаза, пестицин, аминопептидаза • Антифагоцитарные – капсула, р. Н 6 антиген, V- и W-антигены, супердисмутаза • Токсины – эндотоксин, «мышиный токсин»

Эпидемиология чумы Основные источники инфекции – 1) Грызуны, пути передачи: • – трансмиссивный через укусы инфицированных блох • - контактный • - алиментарный 2) Люди, больные легочной формой чумы, путь передачи: • - воздушно-капельный

Эпидемиология чумы

Клинические формы чумы • Кожная, бубонная, кожно-бубонная • Первично-септическая, вторичносептическая • Первично-легочная, вторичнолегочная • Кишечная форма (очень редко)

Микробиологическая диагностика чумы • Исследуемый материал: пунктат из бубонов и карбункулов, отделяемое язв, мокрота и слизь из ротоглотки, кровь • Методы лабораторной диагностики: • - Микроскопический (бактериоскопический) • Бактериологический • Серологический • Биологический • Молекулярно-генетический

МБД чумы • Проводится в специализированных режимных лабораториях для работы с возбудителями особо опасных инфекций

Бактериологический метод

Колонии Y. pestis

Идентификация чистой культуры Y. pestis • Идентификация провидится по следующим свойствам: • - морфологическим • - культуральным • - биохимическим • - серологическим • - чувствительности к чумному бактериофагу • - патогенности для животным

Серологические реакции в диагностике чумы • Применяют для выявления антигенов Y. pestis в исследуемом материале используют реакции - ИФА, РНАТ, РОНГА, ИФА, МИФ. • Антитела в сыворотке крови выявляют в РНГА и ИФА для установления ретроспективного диагноза, а также при обследовании грызунов и природных очагах чумы

Молекулярно-генетический метод - ПЦР • Результат ПЦР получают через 5 -6 часов. • При положительном результате – наличии специфической ДНК чумного микроба – подтверждает предварительный диагноз чумы. • Окончательное подтверждение чумной этиологии болезни делается только при выделении чистой культуры Y. pestis и ее идентификации.

Биологический метод диагностики чумы • Проводят одновременно с другими методами на морских свинках и/или белых мышах. Животным вводят исследуемый материал внутрибрюшинно, подкожно или накожно. • Животные погибают на 3 -7 день после заражения. • Из крови и внутренних органов деляют мазки-отпечатки и выделяюь чистую культуру, которую идентифицируют

• СИБИРСКАЯ ЯЗВА

Лабораторная диагностика сибирской язвы • Сибирская язва – острая зоонозная инфекция, протекающая с тяжелой интоксикацией, серозно-геморрагическим воспалением кожи и лимфоузлов, вовлечением внутренних органов, развитием сепсиса. • Преобладает кожная форма. Значительно реже встречаются легочная и кишечная формы.

Таксономическое положение возбудителя сибирской язвы • Семейство Bacillaceae • Род Bacillus • Вид Bacillus anthracis - B. anthracis

Морфологические свойства B. anthracis • Крупные неподвижные палочки (6 -10 х1 -2 мкм), располагаются цепочками. • Во внешней среде образуют центрально расположенную эндоспору. • В организме образуют полипептидную капсулу. • Грамположительные

Вегетативные клетки B. anthracis

B. аnthracis в электронном микроскопе

Споры B. anthracis - окраска простым методом и по Ожешки

B. аnthracis в органах (окраска по Граму) - видна капсула

Факторы патогенности B. anthracis • Капсула – обладает адгезивными и антифагоцитарными свойствами • Комплексный токсин - состоит из протективного антигена, некротического и отечного факторов

Кожная форма – сибиреязвенный карбункул

Лабораторная диагностика сибирской язвы • Материал для исследования зависит от клинической формы заболевания: отделяемое везикул, карбункулов, язв, струпы, кровь, мокрота, испражнения, пунктат лимфоузлов и др. • • Применяемые методы исследования: - бактериоскопический - бактериологический - серологический - биологический - ПЦР - кожно-аллергический

МБД сибирской язвы проводится в специализированных режимных лабораториях • Бактериоскопический метод – готовят мазки, окрашивают по Граму – видны крупные грамположительные палочки, окруженные капсулой палочки,

Метод иммунофлюоресценции – экспресс-метод

Бактериологический метод

Идентификация чистой культуры B. anthracis • • • Изучают следующие свойства: - морфологические - культуральные - биохимические - тест «жемчужного ожерелья» - чувствительность к сибиреязвенному бактериофагу • - вирулентность для мышей, морских свинок, кроликов

Серологический метод диагностики • Выявление сибиреязвенного антигена непосредственно в патологическом материале с помощью РОНГА, ИФА, МИФ, реакции термопреципитации по Асколи • Специфические антитела в испытуемых сыворотках выявляют для ретроспективной диагностики (при кожной форме заболевания) в РНГА, ИФА

ПЦР в диагностике сибирской язвы и оборудование для постановки ПЦР • ПЦР является чувствительным экспресс-методом, позволяющем в течение нескольких часов выявить наличие ДНК B. anthracis в исследуемом материале, взятом у больного даже во время лечения антибиотиками или в объектах внешней среды

Аппарат для ПЦРдиагностики

ПЦР-индикатор для полевых условий

• Бруцеллез

Бруцеллез • Бруцеллез – зоонозное инфекционноаллергическое заболевание, характеризующееся длительной лихорадкой, преимущественным поражением опорно-двигательного аппарата, поражением сердечнососудистой, нервной, мочеполовой и других систем, часто имеет затяжное, хроническое, рецидивирующее течение.

Таксономическое положение возбудителей бруцеллеза • Род Brucella • Виды B. melitensis – наиболее патогенный вид • B. abortus • B. suis • B. canis

Свойства бруцелл • Морфологические – мелкие неподвижные грамотрицательные коккобактерии (0, 3 х2, 5 мкм), не образуют спор, некоторые штаммы образуют капсулу.

Чистая культура бруцелл, окраска по Граму

Бруцеллы в электронном микроскопе

Микробиологическая диагностика бруцеллеза • Исследуемый материал: кровь, моча, костный мозг, суставная жидкость ликвор, желчь, пунктат лимфоузлов, грудное молоко. • • Методы исследования: - бактериологический - серологический - кожно-аллергическая проба Бюрне

Культуральные свойства бруцелл • Для культивирования бруцелл применяют печеночные среды. Рост замедленный в виде мелких блестящих выпуклых серовато -белых колонийс

Идентификация чистой культуры • • У чистой культуры изучаются следующие свойства: - морфологические - тинкториальные (окраска по способу Козловского) - серологические - потребность в СО 2 - образование Н 2 S - бактериостатическое действие анилиновых красителей тионина и фуксина - чувствительность к диагностическим бактериофагам и др.

Развернутая реакция агглютинации Райта • Реакция высоко специфическая. Высокие титры отмечаются через 1 -2 месяца после начала заболевания и сохраняются до 3 -5 лет после перенесенного заболевания. • Диагностический титр 1: 200

Кожно-аллергическая проба Бюрне • Проба специфична и очень чувствительна, положительной становится на 3 -4 неделе от начала болезни и сохраняется длительно (иногда до нескольких лет). Положительна также после вакцинации.

• Лептоспироз

Лептоспироз • Лептоспироз – острая зоонозная инфекция, характеризующаяся лихорадкой, интоксикацией, явлениями капилляротоксикоза и преимущественным поражением печени (часто с развитием желтухи), почек и нервной системы.

Таксономическое положение лептоспир • Семейство Leptospiraceae • Род Leptospira • Вид Leptospira interrogans разделен на 32 серогруппы • Наибольшее значение в в структуре заболеваемости людей имеют серогруппы - Icterohaemorragia, Pomona, Grippotyphosa, Canicola, Herdomatis и др.

Морфология лептоспир • Прокариоты спиралевидной формы (6 -14 х0, 1 -0, 2 мкм), имеют около 20 мелких завитков, тесно прилегающих друг к другу. Один или оба конца лептоспиры могут быть загнуты в виде крючка, образуя С- или S-образную структуру. • Тело спирохеты состоит из осевой нити (двух тесно спаянных фибрилл) вокруг которой винтообразно закручен цитоплазматический цилиндр, ограниченный грамотрицательной клеточной стенкой.

Лептоспиры в препарате по Бурри и в темном поле

Фазы течения лептоспироза • 1. Инкубационный период – около 10 дней • 2. Генерализация инфекции (начало заболевания, продолжительность 2 -5 дней). Лептоспиры в большом количество из мест первичного размножения проникают в кровь. • 3. Высшая степень токсемии и органных нарушений (продолжительность 20 -28 дней). В сыворотке появляются специфические Ig. M, затем Ig. G. • 4. Фаза нестерильного иммунитета (более 1 месяца). Лептоспиры могут сохраняться в межклеточных пространствах почечной ткани, выводятся с мочой. Клинические проявления угасают. • 5. Формирование стерильного типоспецифического иммунитета. Восстанавливаются нарушенные функции органов.

Микробиологическая диагностика лептоспироза • Материал для исследования зависит от фазы заболевания. • Кровь – 2 -я фаза • Ликвор – 3 -я фаза • Моча - 3 -4 фазы • Сыворотка крови – начиная с 2 -3 недели заболевания

Методы лабораторного исследования лептоспироза • Бактериоскопический – приготовленные микропрепараты исследуют в темном поле зрения и в окрашенном виде (методом серебрения или по Романовскому-Гимзе). • Бактериологический- посевы исследуют периодически в темном поле зрения, выделенную чистую культуру идентифицируют в РА с помощью типовых агглютинирующих сывороток, определяют серогруппу и серовар. • Биологический – используют молодых кроликов или хомяков, животные погибают через 10 -14 дней, в пораженных органах много лептоспир. • Серологический – с парными сыворотками больного ставят реакцию агглютинации-лизиса, а также РНГА, РСК. • ПЦР-диагностика.

Чистая культура лептоспир