Занятие 18 Методика бактериологических исследований
Питательная среда — вещество или смесь веществ, применяемая для культивирования макро- и микроорганизмов. Существует множество стандартных биологических питательных сред.
Требования, предъявляемые к средам: 1)быть питательными, то есть содержать в легко усвояемом виде все вещества, необходимые для удовлетворения пищевых и энергетических потребностей. 2)иметь оптимальную концентрацию водородных ионов — р. Н. 3)Для большинства патогенных бактерий оптимальна слабощелочная среда (p. H 7, 2 -7, 4). 4)Чтобы во время роста микроорганизмов кислые или щелочные продукты их жизнедеятельности не изменили p. H, среды должны обладать буферностью, то есть содержать вещества, нейтрализующие продукты обмена.
5)быть изотоничными для микробной клетки; то есть осмотическое давление в среде должно быть таким же, как внутри клетки. Для большинства микроорганизмов оптимальная среда, соответствующая 0, 5 % раствору натрия хлорида. 6)быть стерильными, так как посторонние микробы препятствуют росту изучаемого микроба, определению его свойств и изменяют свойства среды. 7)плотные среды должны быть влажными и иметь оптимальную для микроорганизмов консистенцию. 8)быть по возможности унифицированным, то есть содержать постоянное количество отдельных ингредиентов. 9)Желательно, чтобы среды были прозрачными — удобнее следить за ростом культур, легче заметить загрязнение среды посторонними микроорганизмами.
Классификация сред По исходным компонентам: натуральные среды — готовят из продуктов животного и растительного происхождения (мясо, костная и рыбная мука, кормовые дрожжи, сгустки крови и др. ) синтетические среды — готовят из определённых химически чистых органических и неорганических соединений, взятых в точно указанных концентрациях и растворённых в дважды дистиллированной воде. полусинтетические – в такую среду вносят известные соединения как явно необходимые; а также добавляют небольшое количество дрожжевого или кукурузного экстракта (или любого другого природного продукта) для обеспечения неизвестных потребностей роста.
По консистенции(степени плотности): Жидкие питательные среды получают при растворении в воде определенного необходимого набора питательных веществ, макро- и микроэлементов. Среды в твердом состоянии в форме плотных гелей. Приготовление твердых питательных сред достигается добавлением к жидким средам определенных уплотнителей, в качестве которых могут выступать агар, желатин, силикагель, каррагенан. Полужидкие среды содержат гелеобразующее вещество в низкой (0, 3 - 0, 7%) концентрации и имеют мягкую желеподобную консистенцию. Сыпучие среды представляют собой массу в той или иной степени измельченного и увлажненного сырья (обычно, растительного).
По составу: простые: мясопептонный бульон(МПБ), мясопептонный агар(МПА), , питательный желатин, сложные — готовят прибавляя к простым средам кровь, сыворотку, углеводы и другие вещества.
По назначению: основные — служат для культивирования большинства патогенных микробов. МПБ, МПА, бульон и агар Хоттингера, пептонная вода. специальные — служат для выделения и выращивания микроорганизмов, не растущих на простых средах. элективные (избирательные) — служат для выделения определённого вида микробов, росту которых они благоприятствуют, задерживая или подавляя рост сопутствующих микроорганизмов. дифференциально-диагностические — позволяют отличить один вид микробов от другого по ферментативной активности. консервирующие — предназначены для первичного посева и транспортировки исследуемого материала.
Этапы приготовления: варка: среды варят на открытом огне, водяной бане, автоклаве или варочных котлах. установление p. H: ориентировочно производят с помощью индикаторной бумаги, для точного определения пользуются потенциометром или компаратором. осветление производят, если при варке среды мутнеют или темнеют. Для этого используют белок куриного яйца или сыворотку крови. фильтрация жидких и расплавленных желатиновых сред производят через влажный бумажный или матерчатый фильтры. Фильтрация агаровых сред затруднена — они быстро застывают. Обычно их фильтруют через ватно-марлевый фильтр.
разливают среды не более чем на ¾ емкости, так как при стерилизации могут намокнуть пробки и среды утратят стерильность. стерилизация: режим стерилизации зависит от состава среды и указан в её рецепте. Контроль: для контроля стерильности среды ставят на 2 суток в термостат, после чего их просматривают. химический контроль окончательно устанавливает p. H, содержание общего и амминого азота, пептона, хлоридов. для биологического контроля несколько образцов среды засевают специально подобранными культурами, и по их росту судят о питательных свойствах среды.
МЕТОД ПОСЕВОВ При посеве проводят петлей по поверхности среды линии, оставляя при этом клетки бактерий на среде. После посева чашки закрывают и переворачивают их вверх дном. Надписи на чашках делают со стороны дна, а на пробирках - в верхней части.
Идентификация бактерий А Б А. Стрептококки (микроскопия препарата). Б. Характерный для гемолитического стрептококка бетагемолиз на кровяном агаре. Идентификацию выделенных бактериальных культур проводят путем изучения морфологии бактерий, их культуральных, биохимических и других признаков, присущих каждому виду.
Культуральная дифференцировка микроорганизмов: по величине — крупные (диаметр более 4 — 5 мм), средние (2— 4 мм) и малые (1— 2 мм) по форме — круглые, розеткообразные, листовидные и т. д. по цвету, зависящему от пигмента — белого, ярко-синего, красного цветов и т. д. по консистенции — сухие, влажные, сочные, слизистые.
по поверхности — гладкие, морщинистые, исчерченные, плоские, выпуклые, плосковыпуклые, вдавленные по краю — с ровными, волнистыми, бахромчатыми краями по структуре — могут иметь аморфную, зернистую, волокнистую внутреннюю структуру в чистой культуре, выращенной на скошенном питательном агаре, характер роста может быть сухим, влажным, ползучим, складчатым, пигментированным.
Скачать презентацию Занятие 18 Методика бактериологических исследований Питательная среда
Занятие 18.pptx