Хроматографические методы анализа План лекции 1. Общие понятия хроматографии. Достоинства и недостатки метода. 2. Классификация хроматографических методов 3. Характеристика хроматографического пика 4. Параметры удерживания 5. Приемы количественного определения в хроматографии 6. Мера эффективности колонки 7. Параметры разделения Ст. преподаватель кафедры фармацевтической химии Жеребцова Е. Ю.
Хроматография Метод разделения или анализа смеси веществ, основанный на: • различной сорбции компонентов анализируемой смеси определенным сорбентом • различии в скоростях их перемещения в системе, состоящей из несмешивающихся и движущихся друг относительно друга фаз • распределении компонентов между двумя фазами – подвижной и неподвижной. Неподвижная фаза Твердое вещество (сорбент) или пленка жидкости, нанесенная на твердый носитель Подвижная фаза Жидкость или газ, протекающий через неподвижную фазу
Хроматография – динамичный процесс Многократное повторение актов сорбции и десорбции Большая эффективность методов Возможности хроматографии: 1. Разделение смесей 2. Идентификация компонентов смеси 3. Определение количественного содержания компонентов
Классификация хроматографических методов. Существует более 50 хроматографических методов и вариантов. 1. 2. 3. 4. 5. По агрегатному состоянию подвижной и неподвижной фазы Геометрическая форма неподвижной фазы Преобладающий механизм разделения Цель проведения Способ получения хроматограмм
По агрегатному состоянию подвижной и неподвижной фазы. жидкостная газовая Газотвердофаз ная Газожидкостная Жидкостьжидкостна я Жидкостьтвердофазн ая Жидкостьгелевая Геометрическая форма неподвижной фазы колоночная капиллярная плоскостная
В зависимости от преобладающего механизма разделения Вид хроматографии Преобладающий механизм разделения адсорбционная Различная веществ адсорбируемость разделяемых адсорбционно. Образование (в подвижной фазе или на комплексообразовательная поверхности неподвижной фазы) различных по устойчивости комплексных соединений афинная Различная способность разделяемых веществ к биоспецифическим воздействиям ионообменная Различная способность разделяемых веществ к ионному обмену осадочная Образование осадков, различающихся по растворимости распределительная Различная растворимость разделяемых веществ в подвижной фазе или в подвижной и неподвижной фазах эксклюзионная Различия в размерах и форме молекул разделяемых веществ
Цель проведения технологическая информационная Способ получения хроматограмм Элюентная (проявительна я) вытеснительная фронтальная
Хроматографические параметры Внутренняя хроматограмма Внешняя хроматограмма Элюат – подвижная фаза, выходящая из колонки и содержащая разделенные компоненты Основные характеристики внешней хроматограммы получают при элюентом хроматографировании
Характеристики хроматографического пика Часть хроматограммы, соответствующая выходу из колонки элюента вместе с компонентом разделяемой смеси называют пиком
Характеристики удерживания (используются для идентификации веществ) 1. Время удерживания t. R 2. Исправленное время удерживания t′R 3. Объем удерживания VR и исправленный объем удерживания V′R 4. Коэффициент распределения D
Основное уравнение хроматографии. Коэффициент емкости колонки
Характеристики, используемые для количественного разделения веществ. В качестве аналитического сигнала используют высоту и площадь пика, которые пропорциональны содержанию вещества в хроматографической зоне
Приемы количественного определения в хроматографии
Внутренний стандарт – специально добавляемое к анализируемой пробе в точно измеренном количестве вещество, свойства которого близки к свойствам анализируемого вещества. Требования, предъявляемые к внутреннему стандарту: 1. Не должно химически взаимодействовать с компонентами смеси, с подвижной и неподвижной фазой. 2. Должно отсутствовать в анализируемой смеси. 3. Давать пик, находящийся на хроматограмме в непосредственной близости от пиков определяемых веществ, но не накладывающийся на них и на пики других соединений.
Мера эффективности колонки Теория теоретических тарелок: 1. Каждая хроматографическая колонка состоит из некоторого числа теоретических тарелок. На каждой тарелке происходит дин элементарный акт сорбции-десорбции. 2. На каждой тарелке происходит мгновенное установление равновесия между веществом, находящимся в подвижной и неподвижной фазе. 3. Переход вещества с тарелки на тарелку происходит дискретно - при попадании на тарелку новой порции элюента равновесие нарушается, и часть вещества мгновенно переносится на следующую тарелку. 4. На любой тарелке в любой момент времени количество сорбируемых частиц вещества больше числа частиц растворителя.
Чем меньше Н и больше N, тем эффективнее хроматографическое разделение При увеличении времени удерживания ширина пика увеличивается
Характеристики эффективности разделения компонентов смеси. Коэффициент разделения. Если α = 1, то разделение невозможно Разрешение
Скачать презентацию Хроматографические методы анализа План лекции 1 Общие понятия
хроматография.pptx