ВОЗБУДИТЕЛЬ МИКОПЛАЗМОЗА 1 История открытия Года жизни

ВОЗБУДИТЕЛЬ МИКОПЛАЗМОЗА

1. История открытия Года жизни: 1822 — 1895 Луи Пастер

Пастер решил заняться изучением микробов, в том числе и бактерий. Возможно, предположил он, многие из этих безобидных на вид существ, проникая в организм людей и животных, вызывают заразные болезни, несут страдания и смерть. И эта догадка подтвердилась в его опытах. Всю свою дальнейшую жизнь Пастер посвятил изучению микроорганизмов, вызывающих заразные болезни, и поискам средств борьбы с ними.

2. Систематика Историческая справка Это случилось, когда Пастеру было почти 35 лет. Французских виноделов постигла беда. Они обратились к Пастеру с просьбой установить, почему в чанах, где происходило брожение виноградного сока, вдруг вместо спирта начала получаться мутная жидкость. Исследовав эту жидкость под микроскопом, Пастер увидел в ней вместо крошечных дрожжевых грибков, которые вызывают брожение сахара, превращая его в спирт, какие-то живые существа, имеющие вид палочек. И Пастер понял, что именно эти живые палочки, т. е. бактерии, — коварные истребители дрожжей — несут разорение виноделам.

Микоплазмы принадлежат к: Классу Mollicutes Порядку Mycoplasmatales Семейству Mycoplasmataceae

Это мелкие бактерии размером 100 -150 нм, иногда 200 -700 нм, не образующие спор, неподвижные грамотроцательные. В первые на них обратил внимание Л. Пастер при изучении возбудителя плевропневмонии крупного рогатого скота, однако не мог в то время выделить его в чистой культуре на обычных питательных средах и обнаружить в световом микроскопе.

Имеют разнообразную форму: кокковидную, нитевидную, колбовидную.

Лабораторная диагностика микоплазмоза

Микоплазмы обнаружены в почв, сточных водах, на различных субстратах, в организме животных и человека. Имеются патогенные и непатогенные виды. К патогенным для человека микоплазмам отнесена Mycoplasma pneumoniae, к условнно-патогенным - M. hominis и Т – группа микоплазм.

Эпизоотологическое значение От кошек выделено несколько видов микоплазм, наиболее часто встречаются Micoplasma felis и М. gatae. Инфекция распространена как в больших колониях кошек, так и среди животных домашнего содержания, причем микроорганизм выделен и от больных, и от здоровых кошек.

При конъюнктивите и болезнях верхних дыхательных путей патогенная роль отводится Micoplasma felis. Вне всяких сомнений, этот микроорганизм может иметь значение как вторичный патогенный агент, но его роль первичного агента очень сомнительна.

Носители инфекции

Симптомами заболеваний, обусловленных М. felis, являются одно- или двухсторонний конъюнктивит с гиперемией от средней до сильной всей конъюнктивы глаза и третьего века. В начале болезни наблюдаются серозные выделения из глаз, которые с усилением болезни переходят в слизисто-гнойные. В основном симптомы исчезают через 7 -10 дней.

Эпидемиологическое значение Микоплазма – возбудитель микоплазмоза – существует в более, чем в сотне разновидностей. Однако опасными для человека являются только четыре вида микоплазмы: mycoplasma genitalium , mycoplasma hominis , ureaplasma urealiticum и mycoplasma pneumonia.

Микоплазма является обычной причиной у человека

Микоплазмоз может вызвать преждевременные роды, раннее отхождение околоплодных вод, лихорадку во время родов и в послеродовой период у матерей, развитие воспаления лёгких, менингит у детей, морфологические изменения в сперматозоидах

У мужчин- поражаются уретра, парауретральные ходы, семенные пузырьки, яички, придатки яичек, предстательная железа, мочевой пузырь; у женщин -уретра, парауретральные ходы, влагалище, малые и большие вестибулярные железы, шейка и тело матки, маточные трубы, яичники, брюшина малого таза.

3. Морфология Клетки весьма полиморфны (шаровидные, кольцевидные, коккобацилярные, нитевидные, ветвистые, в виде элементарных телец). В поздней фазе роста образуются цепочки кокковидных телец.

Микоплазмы не имеют клеточной стенки, покрыты трехслойной цитоплазматической мембраной толщиной 7, 5 – 10 нм. В цитоплазме содержатся ДНК и РНК, рибосомы и другие клеточные компоненты.

Микоплазмы граммотрицательны, окрашиваются медленно. Содержание Г + Ц в ДНК нуклеотида 23 -40 %.

4. Тинкториальные свойства. Перипневмония к р с Из исследуемого материала готовят мазки, окрашивают по методу Романовского – Гимзы или Грама. Краску Романовского – Гимзы разводят дистиллированной водой в соотношении 1: 10 и препараты окрашивают в течении 24 часов при комнатной температуры.

Клетки микоплазм обнаруживают в форме кокков дисков, гроздевидных скоплений, тонких разветвлённых нитей.

Инфекционная плевропневмония коз Мазки-опечатки фиксируют этанолом 1520 мин, окрашивают при комнатной температуре в течении 24 часов краской Романовского-Гимзы. Разведенной дистиллированной водой в соотношении 1: 10, после чего промывают и микроскопируют.

В положительных случаях обнаруживают мелкие полиморфные образования кокковидной формы, кольцевидной, нитевидной форм розового цвета. В мазках, окрашенных по Граму, наблюдают грамотрицательную окрашенную аморфную массу.

Инкубационный период с момента заражения от 1 до 3 недель.

5. Культивирование Большинство видов факультативные анаэробы. Для их роста необходимы белки, стеролы, фосфолипиды, муцины, а также пуриновые пиридиновые основания. На плотных средах растут в виде характерных колоний с уплотнённым, врастающим в среду центром и нежным ажурным краем.

Через 3 -5 дней инкубации они иногда становятся крупными (1, 5 -2 мкм), но чаще трудно различимы невооруженным глазом. На кровяном агаре вокруг колоний наблюдается серая зона гемолиза. Выращивают микоплазмы при температуре 36 -37 С, на средах с p. H 7, 0, содержащих сыворотку.

Формы микоплазм

Добавление к питательной среде холестерола или других стеролов, экстрактов дрожжей ускоряет рост микоплазм. Они могут культивироваться в средах, не содержащих сыворотки, но в присутствии 0, 02% гемоглобина и 0, 01% цистеина. Микоплазмы хорошо размножаются в хорион-аллантоисе куриного зародыша.

Схема деления микоплазм

6. Биохимические свойства. Ферментативные свойства. Процессы метаболизма у микоплазм весьма вариабельны. Протеолитическими свойствами не обладают, хотя и описано несколько видов разжижающих желатин и свертывающих сыворотку; большая часть штаммов ферментирует глюкозу, некоторые из них образуют аргиназу, фосфатазу.

7. Устойчивость. Большинство штаммов погибает при температуре 45 -55 С в течении 15 мин. Микоплазмы очень чувствительны ко всем дезинфицирующим веществам, к высушиванию, ультразвуку, и другим физическим воздействия, устойчивы к пенициллину, ампициллину, метициллину, чувствительны к эритромицину и другим макролидам.

8. Патогенность. Микоплазмы вызывают плевропневмонию у крс (M. mycoides); некоторые варианты этой бактерии являются возбудителем плевропневмонии у коз. Микоплазмы обнаруживали при воспалительных процессах у овец, коз, свиней, грызунов и птиц. M. hominis вариант 1 непатогенен для мышей, вариант 2 при подкожном заражении вызывает у них локализованные абсцессы.

Обнаружения микоплазм

9. Патогенез. Патогенные микоплазмы поражают органы дыхания, сердечно-сосудистую, мочеполовую и центральную нервную системы. M. pneumoniae, выделена из мокроты больных людей. Ранее её считали вирусом. Вызывает острые респираторные заболевания (риниты, бронхиты, бронхиолиты, иногда круп) и очаговые (атипичные) пневмонии.

M. hominis встречается при плевропневмонии, воспалительных процессах гениталий, неспецефических уретритах, простатитах, негонококковых артритах, трихомонадоподобных поражениях, эндокардитах, септических и других заболеваниях. Эта микоплазма хорошо распространена среди людей и животных, но её выявление представляет большие трудности; она обладает условной патогенностью и вызывает заболевания у человека при резком снижении его общей резистентности.

Т – группа микоплазм наиболее часто выделяется от больных при негонококковых уретритах и у здоровых лиц, контактировавших с больными.

10. Антигенная структура. Антигенное многообразие близких штаммов микоплазм свидетельствует о высокой скорости фенотипической изменчивости и пластичности этих микроорганизмов. Фенотипическая пластичность - это способность одного генотипа обеспечивать альтернативные варианты морфологии, физиологических состояний или поведения в ответ на изменяющиеся условия окружающей среды. Антигенное многообразие, или вариабельность поверхностных антигенов, является одним из проявлений фенотипической пластичности микроорганизмов.

У возбудителей семейства микоплазм к настоящему времени установлены многие антигенные свойства. У них, в частности, обнаружена способность продуцировать агглютинины, преципитины, комплементосвязывающие антитела, гемагглютинины, гемолизины. Показано, что антигенная структуру микоплазм очень сложная, остается пока достаточно не изученной. Дело в том, что морфологически микоплазмы не отличимы друг от друга, хотя и открыты некоторые различия в быстроте роста, в морфологии колоний и клеточных элементов. Они несут также непостоянные патогенные свойства. Поэтому идентификация патогенов осуществляется комплексно. В этой связи учитываются все биологические свойства патогенов, но основное слово остается за специфическими серологическими реакциями.

Иммунитет. После плевропневмонии у КРС, овец, коз остается стойкий и продолжительный иммунитет. При заболеваниях человека иммунитет не изучен. Вероятно, он связан с общей резистентностью организма человека, а также с выработкой ингибиторов роста микоплазм, агглютининов, преципитинов, комплементсвязывающих антител.

Диагностика.

Так выглядит под электронным микроскопом микоплазма, прикрепившаяся к клетке человеческого организма. M. genitalium содержат сократительные белки, позволяющие им активно пердвигаться по поверхности клеток хозяина. ТЭМ, х120. 000

Микоплазма вызывающая венерическое заболевание

>бактериологический метод – выращивание культур микробов (микоплазм) >серологический метод – определение специфических антител против микоплазм >полимеразная цепная реакция (ПЦР) – определение ДНК микоплазм > определение антигенов микоплазм методом иммуноферментного анализа (ИФА) и иммунофлюоресценции (ПИФ) – определение микоплазм при помощи специальных окрашенных антител >метод генетических зондов – определение микоплазм при помощи специфических фрагментов ДНК

Уреоплазма и микоплазма сходны

Бактериологическая диагностика Включает в себя обнаружение возбудителя в исходном материале методом световой микроскопии и биопробы, выделение чистой культуры посевом на питательные среды и идентификацию возбудителя по культурально-морфологическим, ферментативным, серологическим и патогенным свойствам.

Бактериоскопия При жизненной диагностике используют бронхиальную слизь, секрет молочной железы, мочу, а для посмертной (от животных, убитых с диагностической целью - в начале болезни или не позднее 2 -3 часов после гибели) – асептично полученный плевральный эксудат, медиастинальные, бронхиальные лимфоузлы, пораженные участки легких.

Материал помещают в стерильную посуду и пересылают в лабораторию нарочным в термосе со льдом или в замороженном виде.

Микоплазмоз в сыворотке крови

Респираторный микоплазмоз

Окраска по методу ГРАМА На фиксированный мазок помещают полоску фильтровальной бумаги, пропитанную спиртовым раствором генциан кристалл- или метилвиолета (бумажки по Синеву), наносят на неё несколько капель дистиллированной воды ля увлажнения, выдерживают 1 -2 мин, бумажку удаляют. Препарат, не промывая, обрабатывают раствором Люголя 1 -2 мин; раствор сливают. Затем наносят 96% -й этанол на 30 -45 с. После чего препарат тщательно промывают водой и окрашивают фуксином Пфейффера 1 -2 мин. Вновь промывают водой, подсушивают фильтровальной бумагой и микроскопируют.

Микроскопическая картина: бактерии, окрашенные в тёмнофиолетовый цвет , относятся к грамположительным, или фирмикутам, в красный цвет – к грамотрицательным, грациликутам.

Метод Романовского – Гимзы Препарат, фиксированный в этаноле или жидкости Никифорова, кладут мазком вниз в чашку Петри с подставками (деревянные или стеклянные палочки). Под препарат наливают краску Романовского – Гимзы (15 -20 капель краски на 10 мл дистиллированной воды). Выдерживают 15 -20 мин. Препарат промывают водой, подсушивают.

Микроскопическая картина: Капсула розовая, клетка тёмносиняя.

Посевы на питательных средах Для получения культуры возбудителя исследуемый материал высеивают плотные и жидкие питательные среды. Микоплазмы прихотливы к условиям культивирования, поэтому в питательные среды добавляют дрожжевой экстракт, сыворотку крови, витамины, углеводы.

Выделение чистой культуры и биохимические свойства

Среда Мартена Представляет собой кислотный гидролизат фарша из свежих свиных желудков.

Среда Эдварда Состоит из отвара сердечной мышцы, воды, пептона, после стерилизации добавляют 20% инактивированной сыворотки крови лошади или крс и 10% дрожжевого экстракта. Посевы инкубируют при 37 -38 С.

Возбудитель ферментирует глюкозу, мальтозу, манозу, галактозу, декстрин, образует сероводород, редуцирует хлорид тетразола, мочевину не расщепляет.

Токсинообразование Из микоплазм извлечены гемолизин и термостабильный эндотоксин.

Пример: рост бактерии на питательной среде Мартена в виде яичного желтка.

Биопроба Заражают 2 -3 здоровых телят 6 -8 месячного возраста подкожно в область подгрудка, интратрахеально или интраплеврольно экссудатом от больных животных или культурой. За животными ведут наблюдение в течении 30 дней. В положительных случаях телята заболевают на 2 -7 день, температура поднимается до 40 -41 С, развивается общая интоксикация организма; при подкожном введении заражения на месте введения образуется флегмона, в процесс вовлекаются регионарные лимфоузлы. Гибель обычно наступает через 17 суток.

Серологические реакции Включают в себя постановку РСК, РНГА, проведение ИФА. Для прижизненного выявления больных животных применяют РСК. Для определения спецефических антител к микоплазмам в сыворотке крови животных применяют метод иммуноферментного анализа.

РНГА Данную реакцию относят к серологической реакции осадочного типа. В ней используют растворимые микробные антигены, сорбированные на эритроцитах как носителях (антигенный диагностикум), или сорбированные на эритроцитах антитела известной иммунной сыворотки (антительный диагностикум). Антигенные диагностикумы применяют для серологической диагностики, антительные – для обнаружения антигенов в исследуемом материале.

РСК В РСК участвуют две системы : АГ – АТ и КОМПЛЕМЕНТ. РСК ставят в два этапа. Сначала в пробирку вносят исследуемую сыворотку крови, известный антиген и комплемент. Смесь реагентов выдерживают в водяной бане при 37 С 20 -30 мин. Независимо от результата видимых изменений в пробирке не происходит (первая фаза РСК). Чтобы выяснить результат, в пробирку вносят индикаторную систему (вторая фаза РСК). После инкубирования всех компонентов учитывают результаты. Возможны два варианта результатов:

Антитела в исследуемой сыворотки отсутствуют: Комплекс АГ- АТ - С не образовался, С – остался в активном состоянии и способен реагировать с другим комплексом АГ – АТ , т. е. лизировать индикаторную систему. Антитела в исследуемой сыворотке присутствуют: Образовался комплекс АГ –АТ – С , комплемент инактивирован, при внесении в пробирку индикаторной системы её лизис не происходит.

ИФА Этот метод получил распространение после того, как была решена задача введения ферментной метки в молекулы антител или антигенов. Антитела, связанные с ферментов, сохраняют способность специфически реагировать с гомологичным антигеном, а фермент – взаимодействовать с соответствующим субстратом. ИФА обычно используют в гистохимическом (иммунопероксидазная реакция) и твердофазном вариантах.

Биопрепараты Лечение микоплазмоза включает средства, воздействующие на возбудителя болезни (убивающие инфекцию). Для борьбы с инфекцией (микоплазма, уреаплазма) в современной медицинской практике эффективно применяются антибиотики тетрациклинового ряда (Тетрациклин, Метациклин, Доксициклин), макролидов и азалидов (Эритромицин, Рокситроми , Джозамицин, Азитромицин и др. ) и фторхинолоны (Офлоксацин, Ципрофлоксацин, Пефлоксацин). В случаях смешанной инфекции описанные препараты комбинируют с другими противомикробными средствами (Метронидазол, противогрибковые препараты). Данное лечение должно проходить под строгим диспансерным наблюдением, длительным и комплексным.

ДИАГНОСТИКА И ЛЕЧЕНИЕ Выделение микоплазм требует лабораторных условий (специальные транспортные и посевные среды). Но в основном культуры микоплазмы не определяются. Микоплазма чувствительна к некоторым антибиотикам, включая тетрациклин и тилозин, но не к пенициллину, который подавляет синтез клеточных оболочек. Таким образом, в сомнительных случаях конъюнктивита, когда есть подозрение как на хламидии, так и на микоплазмы, тетрациклины являются основными препаратами.

Инактивированная вакцина против респираторного микоплазмоза птиц – Avi. Nova 104 MG Bacterin Описание: Вакцина содержит инактивированные клетки M. gallisepticum и представляет собой водномасляную эмульсию белого цвета. Применение: Вакцину применяют с профилактической целью для создания иммунитета против респираторного микоплазмоза птиц у кур прародительского, родительского стада и несушек. Метод вакцинации: Вакцинации подлежит клинически здоровая птица двукратно в 6 -8 и 15 -17 - недельном возрасте, но не позднее, чем за 14 -30 дней до начала яйцекладки. Перед применением вакцину следует выдержать в течение 2 -3 часов при температуре 18 -20°С и тщательно перемешать. Соблюдая правила асептики, вакцину вводят внутримышечно (грудная мышца) или подкожно в область нижней трети шеи в объеме 0, 5 мл. Иммунитет: Формируется в течение 2 -5 недель и сохраняется в течение всего продуктивного периода использования птицы. Форма выпуска: Вакцина выпускается во флаконах по 1000 доз в объеме 500 мл и упакована в коробки по 12 флаконов. Срок годности: 24 месяца при соблюдении условий хранения и транспортировки (сухое темное место, температура от 2°С до 8°С). Не замораживать!

Спасибо за внимание Конец показа слайдов