Волгоградский государственный медицинский университет Коррекция эндотелиальной дисфункции у

Волгоградский государственный медицинский университет Коррекция эндотелиальной дисфункции у крыс с экспериментальным сахарным диабетом соединениями с антиоксидантным действием д. м. н. , профессор Тюренков Иван Николаевич

Патогенез эндотелиальной дисфункции при сахарном диабете Гиперинсулинемия Оксидативный стресс (ПОЛ, КПГ, полиоловый путь обмена глюкозы, образование пероксинитрита) Гипергликемия тромбогенных и прокоагулянтных факторов воспаления (протеинкиназа С, Среактивный белок, гомоцистеин, протеин С), повышение проницаемости сосудистой стенки Эндотелиальная дисфункция Сахарный диабет Смещение баланса вазодилатациявазоконстрикция в сторону последней (снижение ЭЗВД) Инсулинорезистентность Нарушение в системе синтеза, выделения и доступности NO Нарушение липидного баланса крови в сторону атерогенных липидов Нейрогуморальная активация (активация РААС, АТ II, тканевого АПФ, ремоделирование сосудистой стенки, гипертрофия кардиомиоцитов)

Материалы и методы исследования Комплексный морфо-функциональный подход в оценке эндотелиальной дисфункции: • Изучение вазодилатирующей функции (ЭЗВД при введении ацетилхолина, L-аргинина, N-L-аргинина; ЭНЗВД при введении нитроглицерина; мощности и стабильности NO-синтазной системы; индексы Пурселло и Гослинга) • Изучение антитромботической функции (скорость образования тромба (артериальный тромбоз); фактор фон Виллебранда) • Изучение противоспалительной функции (уровень СРБ, морфологические признаки воспаления эндотелия) • Изучение антипролиферативной функции (пролиферация сосудистой стенки, уровень циркулирующих эндотелиоцитов, соотношение комплекса интима/медиа) Флавицин (100 мг/кг) Мексидол (100 мг/кг) Эндотелиальная дисфункция на всех этапах исследования моделировалась стрептозотоцин-индуцированным сахарным диабетом. ЭСД вызывали введением стрептозотоцина в дозе 45 мг/кг, в/в

Исходная скорость мозгового кровотока и эластичность и сопротивление сосудистой стенки при ЭСД Примечание - ЭСД – группа животных с экспериментальным сахарным диабетом без лечения; ** - достоверно по отношению к группе интактных животных (P≤ 0, 01); (Достоверность оценивалась с помощью критерия Манна -Уитни)

Оценка вазодилатирующей функции эндотелия при активации и блокаде синтеза эндогенного оксида азота у животных с ЭСД Примечание - ЭСД – группа животных с экспериментальным сахарным диабетом без лечения; ** - достоверно по отношению к группе интактных животных (P≤ 0, 01); (Достоверность оценивалась с помощью критерия Манна-Уитни)

Влияние флавицина и мексидола на исходную скорость мозгового кровотока и эластичность и сопротивление сосудистой стенки при ЭСД Примечание - ЭСД – группа животных с экспериментальным сахарным диабетом без лечения; ** - достоверно по отношению к группе интактных животных (P≤ 0, 01); ≠ - достоверно по отношению к группе животных с ЭСД (P≤ 0, 05); (Достоверность оценивалась с помощью критерия Манна-Уитни)

Оценка вазодилатирующей функции эндотелия и эндотелиопротективного действия флавицина и мексидола при активации и блокаде синтеза эндогенного оксида азота у животных с ЭСД Примечание - ЭСД – группа животных с экспериментальным сахарным диабетом без лечения; ** - достоверно по отношению к группе интактных животных (P≤ 0, 01); ≠ - достоверно по отношению к группе животных с ЭСД (P≤ 0, 05); ≠≠ - достоверно по отношению к группе животных с ЭСД (P≤ 0, 01); (Достоверность оценивалась с помощью критерия Манна-Уитни)

Изучение влияния мексидола и флавицина на стабильность и мощность эндотелиальной NO-синтазной системы у животных с ЭСД Примечание - ЭСД – группа животных с экспериментальным сахарным диабетом без лечения; ** - достоверно по отношению к группе интактных животных (P≤ 0, 01); ≠≠ - достоверно по отношению к группе животных с ЭСД (P≤ 0, 01); (Достоверность оценивалась с помощью критерия Манна-Уитни)

Cкорость тромбообразования у интактной группы и группы с ЭСД на модели артериального тромбоза Примечание - ЭСД – группа животных с экспериментальным сахарным диабетом без лечения; * - достоверно по отношению к группе интактных животных (P≤ 0, 05); ** - достоверно по отношению к группе интактных животных (P≤ 0, 01); (Достоверность оценивалась с помощью критерия Манна-Уитни)

Влияние флавицина и мексидола на скорость тромбообразования у животных с ЭСД на модели артериального тромбоза Примечание - ЭСД – группа животных с экспериментальным сахарным диабетом без лечения; * - достоверно по отношению к группе интактных животных (P≤ 0, 05); ** - достоверно по отношению к группе интактных животных (P≤ 0, 01); ≠ - достоверно по отношению к группе животных с ЭСД (P≤ 0, 05); ≠≠ - достоверно по отношению к группе животных с ЭСД (P≤ 0, 01); (Достоверность оценивалась с помощью критерия Манна-Уитни)

Влияние флавицина и мексидола на уровень фактора Виллебранда у животных с ЭСД Примечание - ЭСД - группа животных с экспериментальным сахарным диабетом без лечения; **-достоверно по отношению к группе интактных животных (P≤ 0, 01); ≠ - достоверно по отношению к группе животных с ЭСД (P≤ 0, 05); (Достоверность оценивалась с помощью критерия Манна-Уитни)

Изучение влияния флавицина и мексидола на уровень Среактивного белка при ЭСД Примечание - ЭСД - группа животных с экспериментальным сахарным диабетом без лечения; **достоверно по отношению к группе интактных животных (P≤ 0, 01); ≠ - достоверно по отношению к группе животных с ЭСД (P≤ 0, 05); (Достоверность оценивалась с помощью критерия Манна-Уитни)

Изучение влияния флавицина и мексидола на морфологическое состояние эндотелия сосудов у животных с ЭСД (головной мозг) Интакт Флавицин ЭСД Мексидол

Изучение влияния флавицина и мексидола на уровень циркулирующих эндотелиоцитов при ЭСД А. Эндотелиальные клетки, фенотипически верифицированные с применением моноклональных атител к антигену CD 34 А. - интактные животные Б. – животные с ЭСД Примечание - ЭСД - группа животных с экспериментальным сахарным диабетом без лечения; **-достоверно по отношению к группе интактных животных (P≤ 0, 01); ≠ - достоверно по отношению к группе животных с ЭСД (P≤ 0, 05); ≠≠ достоверно по отношению к группе животных с ЭСД (P≤ 0, 01); (Достоверность оценивалась с помощью критерия Манна-Уитни) Б.

Электронная микроскопия эндотелиоцитов 15 сосудов мозга крыс в норме, патологии и применении флавицина Интакт ЭСД+Флавицин Примечание: овалами отмечены наиболее показательные эндотелиоциты

Общая схема развития апоптоза [Yu Q. , Gao F. , Xin L, 2011]

Морфометрическая оценка экспрессии эндотелина и е-NOS у животных с ЭСД, получавших флавицин и мексидол 17 Эндотелин (Clone RJT) Эндотелиальная-NOS (Clone RN 5) Оптическая плотность (единицы яркости)* Интакт 35, 9± 3, 5 86, 3± 3, 2 ЭСД 79, 2± 3, 6♦ 34, 4± 2, 7♦♦ ЭСД+Мексидол 50, 2± 1, 9♪ 62, 8± 3, 1♪ ЭСД+Флавицин 45, 7± 4, 4♪♪ 74, 4± 2, 4♪♪ (♦ - р<0, 05; ♦♦ - р<0, 01 -достоверно по отношению к группе интактных животных; ♪ - р<0, 05; ♪- р<0, 01 достоверно по отношению к группам животных с ЭСД (критерий Уайта-Вилкоксона).

Иммуногистохимические характеристики эндотелиоцитов по Allred D. C. et 18 al. (1998) Интенсивность экспрессии Количество клеток Интакт ЭСД Флавицин Каспаза 3 + +++ + TRAIL + ++ + NF-k. B + ++ + Индексы апоптоза и пролиферации эндотелиоцитов Группы Апоптотический индекс % Интактная 3, 6± 0, 2 ЭСД 36, 2± 2, 9♦♦ Флавицин 19, 25± 1, 9♪ (♦ - р<0, 05; ♦♦ - р<0, 01 -достоверно по отношению к группе интактных животных; ♪ - р<0, 05; ♪- р<0, 01 достоверно по отношению к группам животных с ЭСД (критерий Уайта-Вилкоксона).

Флавицин Эндотелиопротекция 1) улучшение: 19 • вазодилатирующей • антитромботической • антипролиферативной • противовоспалительной функций эндотелия 2)снижение уровня маркеров апоптоза: • каспазы-3 • TRАIL • NF-k. B 3) увеличение активности e. NOS 4) снижение экспрессии эндотелина-1

Спасибо за внимание!