Виконала Гречун Ірина Наукові керівники Ястребова Ольга Станіславівна

Виконала: Гречун Ірина Наукові керівники: Ястребова Ольга Станіславівна, асистент

Актуальність проблеми. Серед великого набору протимікробних речовин важливе місце займають єнаміни та продукти їхніх подальших досліджень. Напрямлений пошук перспективних єнамінів та продуктів їхніх подальших досліджень(діоксодекагідроакредину) робить актуальною проблему дослідження їхньої мутагенної активності, встановлення їхнього впливу на проліферативну здатність клітин.

Наукова новизна. Відомо, що єнаміни та продукти їхніх подальших досліджень (діоксодекагідроакредин) проявляють антибактеріальну активність. Було цікаво дослідити їхній вплив на проліферативну здатність клітин і визначити їхню мутагенну дію у прокаріот і особливо у еукаріот. Мета роботи: дослідити цитотоксичну активність даних речовин, виявити здатність впливати на генетичний матеріал клітини.

• Завдання: 1. Встановити вплив різних концентрацій даних речовин на проліферативну здатність клітин еукаріотів. 2. Виявити зміни в перебігу мітотичного циклу залежно від концентрацій досліджуваних речовин. 3. Встановити потенційну мутаційну активність цих речовин. 4. Визначити концентрацію розчинів досліджуваних речовин, ефективну для досліджень з мікроорганізмами.

На кафедрі медичної хімії медуніверситету був синтезований єнамін на основі дімедону та амінокислоти. Тому ми використали його для подальших досліджень. Синтез дімедону з гліцином відбувається за схемою :

Для порівняння було використано продукт подальшої взаємодії єнаміна з дімедоном в реакції з формальдегідом за схемою:

Сучасні методи вивчення біологічної активності хімічних речовин. Багато хімічних речовин, які синтезуються, використовуються як медикаменти, консерванти. Щоб уникнути забруднення ними як потенційними мутагенами довкілля, необхідне їхнє тестування на живих організмах. Запропоновано ряд характеристик для тест-систем: - достатня чутливість для статистично достовірного визначення малих мутаційних ефектів; - високий рівень відтворюваності в межах однієї і різних лабораторій; - здатність до виявлення всіх типів мутацій.

Allium test - рослинна тест система для оцінки Мутагенного ефектів на основі рослини Allium cepa - Цибуля ріпчаста, сорт Штутгарт. Метод дозволяє реєструвати хромосомні мутації, наслідком яких є наявність мостів і фрагментів в ана-телофазі, а також виявляти зміну поведінки на веретені поділу. Таким чином, використання Allium cepa - тесту є повністю виправданим і відповідає меті і завданням дослідження.

Матеріали і методи дослідження Рослини Allium cepa з однаковим генотипом пророщували в розчинах досліджуваних речовин різних концентрацій (10 -6 М, 10 -5 М, 10 -4 М, 10 -3 М). Цибулини помістили в розчини на 3 дні. Контролем слугувала дистильована вода. Як показник мітотичної активності визначали мітотичний індекс(МІ) за формулою: МІ=П+М+А+Т/І+П+М+А+Т × 100%. Індекси кожної з фаз мітозу визначали за формулою : ІХ=Х/П+М+А+Т× 100%. Хромосомні аберації вивчали в ана- і телофазах. Відсоток аберацій визначали за формулою: Аб = n Аб /А+Т× 100%.

Об’єкти дослідження

Вимірювання довжин корінців Allium сера

30 мм 27. 45 25 24. 69 25 20. 46 20 17. 1 15 10 5 0 контроль 10 -6 10 -5 10 -4 10 -3 середня довжина Довжина корінців (мм) Allium cepa в розчинах єнаміну

ММ 23. 5 25 20 18. 15 17. 4 15. 2 15 10 5 0 контроль 10 -6 10 -5 10 -4 0 10 -3 середня довжина Довжина корінців (мм) Allium cepa речовини діоксодекагідроакридину

Оскільки ріст корінців визначається поділом клітин первинної меристеми, то наступним етапом нашого дослідження було вивчення мітотичної активності. 15 % 14. 1 11. 3 10 10 7. 65 5. 4 5 0 контроль 10 -6 10 -5 10 -4 10 -3 Мітотичний індекс первинної меристеми корінців Allium cepa речовини 1 (єнаміну)

% 8 7. 6 7. 4 7 6 4. 55 5 4 4 3 2 1 0 0 контроль 10 -6 10 -5 10 -4 10 -3 Мітотичний індекс первинної меристеми корінців Allium cepa речовини 2 (діоксодекагідроакридину)

профаза метафаза анафаза телофаза 35 30 25 20 15 10 5 0 контроль 10 -6 10 -5 10 -4 10 -3 профаза 26 29 26 26 26 метафаза 24 26. 6 19 25 23 анафаза 22 23 24 26 24 телофаза 26 28 25 24 24 % Перебіг мітозу в первинній меристемі корінців Allium cepa єнаміну

профаза 35 30 %25 20 15 10 5 0 метафаза анафаза телофаза контроль 10 -6 10 -5 10 -4 10 -3 профаза 26 21 30 32 0 метафаза 26 24. 5 25 20 0 анафаза 23 31 25 27 0 телофаза 29 25 26 29 0 Перебіг мітозу в первинній меристемі корінців Allium cepa діоксодекагідроакридину

10 % 8 3 6 1. 9 1. 6 4 2 0 6 4 4 2. 5 0. 3 0 контроль 10 -6 10 -5 10 -4 10 -3 Кількість і спектр аберацій в клітинах первинної меристеми вирощених в розчинах різних концентрацій єнаміну

5 % 4 3 1. 2 2 2 1 4 2. 7 1. 3 1 0 0 контроль 10 -6 хромосомні мости 10 -5 10 -4 10 -3 фрагменти Кількість і спектр аберацій в клітинах меристеми вирощених в розчинах різних концентрацій діоксодекагідроакредину

Хромосомні мости

ВИСНОВКИ • Встановлено, що єнамін на основі дімедону і гліцину проявляє рістстимулюючу активність у корінців Allium cepa в концентрації 10 -6 М. Отже, речовина 1( єнамін) у концентрації 10 -6 М може бути стимулятором росту. Вона може викликати підвищення мітотичного індексу(МІ). • Речовина 2 (діоксодекагідроакридин) викликає зниження МІ попри те, що довжина корінців була досить високою. Це робить можливим використання цієї речовини як антимікробного засобу у еукаріотів.

Дякую за увагу!