• В основе иммунодиагностики инфекционных заболеваний лежит применение серологических реакций • Серологическая реакция – это реакция между антигеном (АГ) и антителом (АТ) in vitro, с помощью которой можно определить неизвестный компонент, используя второй, известный, компонент. Например, если взять известное АТ, то можно найти неизвестный АГ, и наоборот. • Любая серологическая реакция характеризуется 2 -умя основными свойствами: специфичность и чувствительность.
Антигены
Бактериальные антигены (АГ) • По специфичности: 1) группоспецифические (встречаются у разных видов одного рода или семейства); 2) видоспецифические (встречаются у представителей одного вида); 3) типоспецифические (определяют серологические варианты – серовары – внутри одного вида).
Бактериальные антигены (АГ) • По локализации в бактериальной клетке: 1) О – АГ (соматический) ЛПС (у грам-) или полисахарид (у грам+) клеточной стенки; термостабилен (выдерживает кипячение в течение 1– 2 ч); 2) Н – АГ (жгутиковый) – белок флагеллин; термолабилен; 3) К – АГ (капсульный) – полисахарид (реже полипептид) капсулы; по чувствительности к температуре К - АГ подразделяются на А-, В- и L-антигены. Разновидности К - АГ: Vi – АГ, поверхностно. АГ оболочечные АГ. АГ 4) токсины и ферменты
Антитела (иммуноглобулины) - это
Структура молекулы иммуноглобулина • Сиреневым цветом на рисунке отмечен фрагмент, который взаимодействует с АГ (Fab-фрагмент) -фрагмент • У большинства АТ в молекуле минимум 2 таких фрагмента, поэтому одно АТ может одновременно связываться с 2 -умя АГ
• Реакция АГ-АТ в системе in vitro может сопровождаться развитием нескольких феноменов: агглютинации, феноменов преципитации, лизиса, которые можно определить визуально • Если же при реакции данных феноменов не возникает, то для визуализации результата реакции применяют различные метки, которые метки прикрепляют к АГ или АТ, а затем проводят детекцию меченного реагента
• Реакция агглютинации (от лат. agglutinatio склеивание) – это склеивание корпускулярных антигенов (например, бактериальных клеток) антителами в присутствии электролитов • Агглютинация проявляется в виде хлопьев или осадка, состоящих из корпускул (например, бактерий) «склеенных» антителами • Агглютинация может быть прямая или пассивная (непрямая)
• Реакция преципитации – РП (от лат. praecipito осаждать) это формирование и осаждение комплекса растворимого молекулярного антигена с антителами в виде помутнения, называемого преципитатом. • Варианты РП: 1) реакция кольцепреципитации, 2) реакция преципитации в геле.
Цели иммунодиагностики 1. Сероиндикация это обнаружение неизвестного АГ в исследуемом материале с помощью известных АТ • Диагностический препарат, содержащий известные АТ, называется диагностическая сыворотка • В сероиндикации используют: – реакцию иммунофлюоресценции (РИФ) – реакцию пассивной гемагглютинации (РПГА) – реакцию преципитации (РП) – иммуноферментный анализ (ИФА)
Цели иммунодиагностики 2. Сероидентификация это определение неизвестного АГ в чистой культуре с помощью известных АТ (диагностических сывороток) • Сероидентификация – это часть III этапа бактериологического метода • В сероидентификации используют: – реакцию агглютинации (РА) – реакцию преципитации (РП)
Цели иммунодиагностики 3. Серодиагностика это определение неизвестных АТ в сыворотке крови больного с помощью известных АГ • Диагностический препарат, содержащий известные АГ, называется диагностикум • Серодиагностика – это самостоятельный метод диагностики (серологический) • В серодиагностике используют: – реакцию агглютинации (РА) – реакцию иммунофлюоресценции (РИФ) – реакцию пассивной гемагглютинации (РПГА) – реакцию связывания комплемента (РСК) – иммуноферментный анализ (ИФА)
Реакция пассивной (непрямой) гемагглютинации (РПГА) для сероиндикации • Ставится на стекле (пластинчатая РПГА). • Компоненты: 1. исследуемый материал (в нём ищут АГ) 2. диагностическая сыворотка – суспензионные АТ (антитела к искомому АГ, адсорбированные на эритроцитах I группы крови человека). • Учет визуальный: при “+” реакции красные хлопья.
РПГА Положительная (красные хлопья) Отрицательная (нет хлопьев)
Реакция преципитации (РП) для сероиндикации • Реакцию проводят в узких пробирках; такой вариант РП называется реакция кольцепреципитации • Компоненты: 1. исследуемый материал (в нём ищут растворимый АГ) 2. преципитирующая сыворотка (антитела к искомому растворимому АГ) • Учет визуальный. При “+” реакции на границе двух растворов образуется непрозрачное кольцо преципитата.
Реакция кольцепреципитации
Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) для сероиндикации • Ставится на стекле • Компоненты: 1. исследуемый материал (в нём ищут АГ) 2. люминесцирующая сыворотка (антитела к искомому АГ, меченные ФИТЦ). • Учет с помощью люминесцентного микроскопа: при “+” реакции наблюдается специфическое (чаще – зелёное) свечение
РИФ
ИФА для сероиндикации (“сэндвич” – вариант ) • Ставят в лунках планшета • Компоненты: 1. первые АТ к искомым АГ, 2. исследуемый материал (в нём ищут АГ), 3. вторые АТ, меченные ферментом (пероксидаза). 4. Для учета в конце реакции добавляют субстрат для фермента (Н 2 О 2) и хромоген (ТМБ) • Учет или визуальный (изменение цвета раствора в лунке), или с помощью спектрофотометра (измеряется оптическая плотность раствора в лунке)
Схема ИФА (“сэндвич)”
ИФА
Реакция агглютинации (РА) для сероидентификации • Ставится на стекле (пластинчатая РА) РА • Компоненты: 1. чистая культура (определяем её АГ) 2. агглютинирующая сыворотка (содержит АТ к АГ определённых бактерий). • Учет визуальный: при “+” реакции – белые хлопья, при “-” реакции – равномерная мутность.
Реакция преципитации (РП) для сероидентификации • Ставится в чашках Петри с питательным агаром (выполняет роль геля), такой вариант РП называется РП в геле • Компоненты: 1. чистая культура (определяем выделение бактериями токсина) 2. диагностическая антитоксическая сыворотка (содержит АТ к токсину определённых бактерий). • Учет визуальный: при “+” реакции видны белые “усы” (полосы) преципитации.
РП в геле
Реакция агглютинации (РА) для серодиагностики • Ставится в пробирках (развернутая РА) • Компоненты: 1. сыворотка больного (в ней ищут АТ к определенному АГ); её разводят (титруют) в ряду пробирок 2. бактериальный диагностикум (содержит АГ определённых бактерий) • Учет визуальный: при “+” реакции – белые хлопья, при “-” реакции – отсутствие хлопьев. хлопья • Если реакция “+”, определяют титр АТ (- это последнее разведение сыворотки, в котором реакция ещё “+”)
Реакция пассивной (непрямой) гемагглютинации (РПГА) для серодиагностики • Ставится в лунках планшета (развернутая РПГА). • Компоненты: 1. сыворотка больного (в ней ищут АТ к определенному АГ); её разводят (титруют) в ряду лунок планшета 2. эритроцитарный диагностикум (АГ определённых бактерий, адсорбированные на эритроцитах I группы крови человека). • Учет визуальный: при “+” реакции – осадок в виде “зонтика”, при “-” реакции – осадок в виде “пуговки”. • При “+” реакции определяют титр АТ
Реакция связывания комплемента (РСК) • В данной реакции кроме АГ и АТ участвует комплемент • Комплемент – это система белков сыворотки крови; обозначается “С” • Белки системы комплемента, присоединяясь к комплексу АГ и АТ, вызывают ЛИЗИС антигена, т. е. его разрушение
Реакция связывания комплемента (РСК) для серодиагностики • Ставится в пробирках • Компоненты: 1. сыворотка больного (в ней ищут АТ к определенному АГ), её титруют в ряду пробирок 2. диагностикум (содержит АГ определённых бактерий) 3. комплемент • Для учета реакции добавляют индикаторную систему, состоящую из эритроцитов барана и АТ к систему ним (гемолитическая сыворотка) • При “+” реакции – осадок из эритроцитов, при “–” реакции – гемолиз (“лаковая кровь”) • При “+” реакции определяют титр АТ
Схема РСК (“+” результат)
Схема РСК (“-” результат)
ИФА для серодиагностики • Ставят в лунках планшета • Компоненты: 1. АГ бактерий (диагностикум) 2. сыворотка крови пациента (в ней ищут АТ) 3. антиглобулиновая сыворотка (АГС) (антитела к антителам), меченная ферментом 4. Для учета в конце реакции добавляют субстрат для фермента (Н 2 О 2) и хромоген (ТМБ) • Учет или визуальный (изменение цвета раствора в лунке), или с помощью спектрофотометра (измеряется оптическая плотность раствора в лунке)
Схема ИФА для серодиагностики
Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) для серодиагностики • Ставится на стекле • Компоненты: 1. 2. 3. АГ бактерий (диагностикум), (диагностикум) сыворотка пациента (в ней ищут АТ), антиглобулиновая сыворотка (АГС) (содержит АТ к АТ), меченная ФИТЦ Такой вариант РИФ называется непрямая РИФ • Учет с помощью люминесцентного микроскопа: при “+” реакции наблюдается специфическое (чаще – зелёное) свечение.
Принципы серодиагностики • Определение количества (титра) АТ в титра сыворотке крови пациента и сопоставление его с диагностическим титром. • Если титр АТ у пациента равен или выше диагностического, то пациент болен данным инфекционным заболеванием • Изучение изменений титра АТ в динамике (в парных сыворотках с интервалом 7 – 14 – 21 дней)
Иммунопрофилактика • - это введение человеку специфических иммунопрепаратов для формирования у него иммунитета против возбудителей инфекционных заболеваний с целью предупреждения развития этих заболеваний, т. е. для профилактики • Специфические иммунопрепараты: – вакцины – лечебно-профилактические сыворотки
ВАКЦИНА • - это иммунопрепарат, который содержит возбудителя заболевания (в ослабленном или убитом виде) или его отдельные АГ • При введении вакцины в организм человека у него развивается активный иммунитет (на АГ вакцины нарабатываются АТ) • Активный иммунитет сохраняется от нескольких месяцев до нескольких лет
ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКАЯ СЫВОРОТКА • - это иммунопрепарат, который содержит готовые АТ к возбудителю заболевания • При введении сыворотки в организм человека у него развивается пассивный иммунитет, т. к. АТ уже готовы • Пассивный иммунитет недолгий (2 – 4 недели)
Получение лечебно-профилактических сывороток От людей (доноров) От животных (чаще всего – от лошадей) Гомологичные сыворотки Гетерологичные сыворотки Вводятся дробно (по Безредке), т. к. могут вызвать у человека аллергическую реакцию
Скачать презентацию В основе иммунодиагностики инфекционных заболеваний лежит
Занятие по серологии (колледж).pptx