Ультраструктура бактериальной клетки Этапы приготовления и методы окраски микроскопических препаратов
n n n - Клеточная стенка (КС) - важный и обязательный элемент для большинства прокариотных клеток. Строение и химический состав КС прокариот резко отличаются от таковой эукариот (содержит специфические полимерные комплексы, отсутствующие в других клеточных структурах) В зависимости от строения КС прокариоты, относящиеся к эубактериям, делятся на: Грамположительные (Г+) Грамотрицательные (Г-) не имеющие клеточной стенки.
КС грамположительных и грамотрицательных бактерий
Функции клеточной стенки n Определяет и сохраняет постоянную форму клетки n Защищает внутреннюю часть клетки от действия механических и осмотических сил внешней среды n Участвует в регуляции роста и деления клеток n Обеспечивает коммуникацию с внешней средой через каналы и поры n Несет на себе специфические рецепторы для бактериофагов n Определяет антигенную характеристику бактерий (О- и Кантигены) n Пептидогликан, входящий в ее состав наделяет клетку иммуногенными свойствами n Нарушения синтеза клеточной стенки бактерий приводит к Lтрансформации
Строение клеточной стенки n n Имеет два слоя – наружный – пластичный, внутренний – ригидный. Основа – пептидогликан, имеется только у эубактерий, кроме микоплазм
Строение пептидогликана Пептидогликан - состоит из параллельно расположенных цепочек полисахарида гликана. Гликан складывается из цепочек, в которой чередуются остатки Nацетилглюкозамина и N-ацетилмурамовой кислоты, соединенных бета -1, 4 – гликозидными связями. Цепочки гликана между собой скрепляются пептидными связями.
Строение пептидогликана n. Боковые цепочки представлены идентичным набором тетрапептидов 1 - L-Аланин 2 - D-глутаминовая кислота 3 - мезо-диаминопимелиновая кислота (мезо-ДАП) 4 - D-Аланин n. Поперечные n. У цепочки – пентапептид, содержащий глицин. разных видов бактерий боковые и поперечные пептиды различны. n. Пентапептид – ДАП другой связывает боковые тетрапептиды (D-аланин одной цепи
Пептидогликан может разрушатся под действием различных ферментов n n n Лизоцим – разрушает связь между N-ацетилмураминовой кислотой и Nацетилглюкозамином Амидазы – расщепляют связь между N-ацетилмураминовой кислотой и и боковым пептидом (L—Аланином) Эндопептидазы – расщепляют межпептидные связи Бета-лактамные антибиотики –нарушают образование поперечных сшивок между боковыми цепочками. Под действием пенициллина из Г+ бактерий образуется протопласт, а из Гбактерий – сферопласт, имеющий остатки оболочки на поверхности клетки.
КС грамположительных бактерий n n содержит в качестве основных компонентов три типа макромолекул: пептидогликаны тейхоевые кислоты липотейхоевые кислоты
Структура грамположительной клеточной стенки n n Содержит 40 слоев пептидогликана Молекулы тейхоевых кислот ковалентно связаны с пептидогликаном Липотейхоевые кислоты заякорены в гидрофобном слое ЦПМ На поверхности могут быть белковые структуры, расположенные островками
Структура грамотрицательной клеточной стенки n n n Тонкий слой пептидогликана покрыт внешней мембраной, прикрепленной липопротеидами Внешняя мембрана содержит фосфолипиды на внутренней поверхности и липополисахариды – на внешней Пространство между цитоплазматической и наружной мембранами – периплазма
n Клетки, утерявшие КС в результате мутации или разрушающего воздействия, называются Lформами и могут существовать только в изотонических растворах.
Иммунологические свойства пептидогликана n n n Определяет родоспецифические и видоспецифические антигенные детерминанты Запускает классический и альтернативный путь активации белков системы комплемента Тормозит фагоцитарную активность макрофагов, защищая бактерии, особенно Г+, от фагоцитоза Угнетает миграцию макрофагов Способен индуцировать развитие ГЗТ Оказывает пирогенное действие на организм человека и животных
Методы определения строения клеточной стенки. n n n Окраска по Граму. При окрашивании клеток генцианвиолетом (кристаллфиолетовым) и последующем докрашивании раствором люголя (J в KJ), в КС образуется комплекс пептидогликан+йод+генцианвиолет, который затем обесцвечивают спиртом. У грамотрицательных микроорганизмов, т. к. у них слой ПГ тонкий, весь окрашенный комплекс вымывается из клеточной стенки и они становятся бесцветными. У грамположительных комплекс остается связанным в толстом слое пептидогликана. В итоге после первого окрашивания – грам+ – синие, грам – - прозрачные. 2 этап окраски по Граму – этап докрашивания фуксином. После второго этапа грам+ остаются синими, а грамстановятся красными.
Окраска по Граму
Методы определения строения клеточной стенки. n n n КОН-тест. В основе метода лежит способность КС грамположительных микроорганизмов сохранять целостность при воздействии гидроокиси калия, тогда как КС грамотрицательных бактерий при этом разрушается. Постановка пробы с КОН предусматривает суспендирование петли суточной агаровой культуры в капле 3% раствора КОН на предметном стекле. При «+» реакции, свойственной грамотрицательным микроорганизмом, жидкость в капле становиться вязкой, нити слизи тянутся за петлей на 0, 5 -2 см. Образование слизистой консистенции связывают с выходом из клетки ДНК, являющейся вязким компонентом.
Поверхностные структуры бактерий n В результате биосинтеза органических полимеров некоторыми прокариотами вокруг их клетки откладывается слизистое вещество. Такие образования в зависимости от структурных особенностей получили название капсул, слизистых слоев или чехлов.
Капсула n n n Капсула - слизистое образование, обволакивающее клетку, имеющее аморфное строение и сохраняющей связь с клеточной стенкой. Когда ее толщина меньше 0, 2 мкм - говорят о микрокапсуле, она может быть обнаружена только с помощью электронного микроскопа. Если ее толщина образования больше 0, 2 мкм, говорят о макрокапсуле. Ее можно обнаружить при обычной световой микроскопии.
Капсула n n Капсулы на 98% состоят из воды и плохо воспринимают красители. Для их выявления используют специальные методы окраски. При этом часто используется негативная окраска, при которой окрашивается не сам объект, а фон вокруг него. Для этого используется тушь или нигрозин. Красители не проникают в микроорганизмы, которые остаются не окрашенными и выделяются виде светлых зон на темном поле. Способ для выявления капсул предложил использовать Бурри. Гинс добавил к этому методу докраску микроорганизмов фуксином. Таким образом, классическим методом выявления капсул является способ окраски по Бурри-Гинсу, хотя существуют и другие методы.
n n n Если слизистое вещество, синтезируемое бактериями, имеет аморфный, бесструктурный вид и легко отделяется от поверхности клетки, говорят о слизистых слоях. В отличие от капсул, чехлы имеют тонкую структуру. В них обнаруживают несколько слоев с разным строением. Между этими структурами у прокариот обнаружено много переходных форм, иногда нельзя четко отграничивать капсулу от слизистых клеточных выделений или капсулу от чехла.
Химический состав капсулы n n Наличие капсулы зависит от питания микроорганизма и условий его культивирования. Химический состав капсул гомо- или гетерополимерной природы. Исключение составляет капсула некоторых видов Bacillus, построенная из полипептида, являющегося полимером D-глутаминовой кислоты. некоторые бактерии способны синтезировать и выделять в окружающую среду волокна целлюлозы. Чехлы как более сложные структуры имеют обычно и более сложный состав.
Функции капсулы n n n n защищают клетку от механических повреждений, высыхания, создают дополнительный осмотический барьер, барьер для проникновения фагов. могут служить источником запасных питательных веществ. осуществляют связь между соседними клетками в колонии, а также прикрепление клеток к различным поверхностям. Капсула - признак вирулентности некоторых патогенных микроорганизмов (возбудители коклюша, гонореи, менингита, сибирской язвы и др. ). позволяют противостоять защитным действиям инфицированного организма - защищают бактерии от действия вне- и внутриклеточных продуктов фагоцитов и препятствуют поглощению бактерий. Капсула облегчает адгезию к эпителию являются антигенами, в ответ, на которые вырабатываются специфические антитела. Капсульный антиген или специфические антитела к капсульному антигену используют в диагностике инфекционных заболеваний. (Например, реакция Нойфельда используется для идентификации Streptococcus pneumoniae набухание капсулы микроорганизмов в присутствие специфических агглютинирующих антител.
n n Пили (фимбрии)– это нитеобразные полимерные органеллы белковой природы, локализованные на поверхности клеток. Размер пилей варьирует от долей микрометров до более 20 мкм в длину и от 2 до 11 нм в диаметре. Функции пилей: отвечают за адаптацию, выживаемость, распространение, адгезию, коньюгацию, сигнальное общение.
Различают 3 типа пили n n n 1 -й тип - жесткие, закреплены в клеточной стенке, способствуют адгезии микробных клеток к субстрату. 2 -й тип – имеют такое же строение, участвуют в процессах коньюгации – условно половой процесс у бактерий (обозначают F от слова фертильность, плодовитость). Бактерии, имеющие такие реснички, наз. мужскими клетками F+ - при коньюгации отдают генетическую информацию. Клетки воспринимающие обозначаются как F-, условно считаются женскими. 3 -й тип – очень длинные, адсорбируют бактериофаги, участвующие в процессах лизиса бактерий или передачи генетической информации.
n n n ü ü ü Жгутики могут располагаться полярно и латерально. В зависимости от числа жгутиков и их локализации различают: Монотрих (один жгутик прикреплен к одному полюсу клетки); Лофотрих (пучок жгутиков расположен на одном полюсе); Амфитрих (пучки жгутиков расположены на двух полюсах); Перитрих (многочисленные жгутики расположены по всей поверхности клетки). Жгутик представляет собой жесткую спираль, обычно закрученную против часовой стрелки. Имеет три основные части: фибрилла крюк базальное тело
n n n Фибрилла - длинная спиральная нить, основная часть жгутика, состоит только из одного белка – флагеллина. Белковые субъединицы уложены в виде спирали, внутри - полый канал. Наращивание жгутика происходит с дистального конца, куда субъединицы поступают по внутреннему каналу. У некоторых видов жгутик снаружи покрыт чехлом особого химического строения или же являющимся продолжением клеточной стенки. Крюк состоит из белка, отличающегося от флагеллина, и служит для обеспечения гибкого соединения нити с базальным телом. Базальное тело представляет собой систему из двух (у Г+) или четырех колец (Г-), нанизанных на стержень. Внутренние кольца M и S обязательны для бактерий, наружные кольца Р и L имеются только у Г-. М-кольцо локализовано в ЦПМ S-кольцо располагается в периплазматическом пространстве в Гили в пептидогликановом слое Г+ Кольцо Р располагается в пептидогликановом слое, L-кольцо – в наружной мембране. Таким образом, подвижность бактерий зависит от интактности клеточной стенки.
Строение жгутика г- бактерий
Способы выявления подвижности: n n n Непосредственная микроскопия живых неокрашенных микроорганизмов - препарат «висячая» капля. При микроскопии важно отличать броуновское движение от активного движения, обусловленного жгутиками. Посев по Шукевичу - активное передвижение подвижных бактерий в верхнюю часть скошенного агара из нижней, куда производится посев. Окрашивание жгутиков. За счет красителей и протрав увеличивается поперечный размер жгутиков, при этом ранее не видимые из-за своей малой толщины нить, становиться видимой.
ЦИТОПЛАЗМАТИЧЕСКАЯ МЕМБРАНА n n Ø Ø Ø n n ЦПМ – не отличается от мембраны эукариот, состоит из двойного слоя фосфолипидов и триглицеридов, которые обращены гидрофобными концами внутрь и гидрофильными – наружу, белков, углеводов и РНК. Впячивания цитоплазмы внутрь клетки образуют МЕЗОСОМЫ, где проходят процессы дыхания. Выделяют три основных типа мезосом: ламелярные (пластинчатые), везикулярные (имеющие форму пузырьков) и тубулярные (трубчатые); можно наблюдать мезосомы смешанного типа. Хорошо развитые и сложноорганизованные мезосомы характерны для грамположительных бактерий. У грамотрицательных видов они встречаются реже и организованы проще.
Цитоплазма n n Цитоплазма - содержимое клетки, окруженное ЦПМ включает в себя цитозоль и разнообразные структурные элементы: внутрицитоплазматические мембраны, генетический аппарат, рибосомы и включения.
Рибосомы n n прокариот имеют константу седиментации 70 S. Построены из двух неодинаковых субединиц: 30 S- и 50 S. Синтез белка осуществляется полисомами, состоящими из рибосом, молекул и. РНК и т. РНК (в циптоплазме или связанны с мембранными структурами).
Нуклеоид n n n - генетический аппарат прокариот, не отделенным от цитоплазмы мембраной. Вся генетическая информация прокариот содержится в одной молекуле ДНК формы ковалентно замкнутого кольца (бактериальная хромосома У некоторых прокариот существуют внехромосомные факторы наследственности – плазмиды. Они придают новые свойства клетке – лекарственную устойчивость, токсигенность, способны самореплицироваться и передаваться дочерним клеткам. Для выявления нуклеоида фиксированный мазок перед окраской обрабатывают рибонуклеазой или разбавленой соляной кислотой, чтобы разрушить рибосомальную РНК. Последующее окрашивание основным красителем, позволяет выявить нуклеоид в виде плотных тел с неправильными очертаниями, расположенных в центре или на полюсах клетки.
Спора бактерий n n n Ø Ø Ø n – образуется при попадании в неблагоприятные условия путем отделения участка цитоплазмы и генетического материала бактерий и отделения участка прочной стенкой (выживании вида, а не размножения). В одной клетке только одна спора. Споры могут располагаться в клетке терминально, центрально или субтерминально. Высокая устойчивость спор во внешней среде объясняется следующими причинами: оболочка содержат много кальция, очень прочная в споре отсутствует свободная вода, и в связи с этим метаболические процессы находятся в спящем состоянии Выявление методом Циля-Нильсена (красный цвет споры, цитоплазма в синий), Ожешко.
Включения запасных веществ n n Гранулы углеводной природы (полисахариды) выявляют при обработке клеток раствором Люголя. Гранулы крахмалоподобных веществ (гранулезы) окрашиваются в синий цвет. Гранулы гликогеноподобных веществ – в красно-коричневый цвет. Липидные гранулы у дрожжей и мицелиальных грибов представлены нейтральными жирами, которые легко обнаруживаются и без окраски в виде сильно преломляющих свет гранул. Для выявления используют окраску липофильными красителями: суданом III или суданом черным.
Включения запасных веществ n n n Белковые включения образует Bacillus thuringiensis в тот же период, что и споры. Это кристаллический белковый эндотоксин, проявляет инсектицидное действие Окрашивают с помощью красителей, хорошо связывающихся с белками, например амидошварцем или анилиновым черным. Зерна волютина (полифосфатные, метахроматидные гранулы) впервые были обнаружены у Spirillum volutans. Накапливаются в клетках коринебактерий и дрожжеподобных грибов.
Приготовление бактериального препарата n от качества приготовления препарата в значительной степени зависит результат микроскопии. Для приготовления мазка необходимо иметь: üЧистое обезжиренное предметное стекло üБактериологическую петлю üКультуру, выращенную на плотной питательной среде — агаре, или жидкой среде — бульоне üСпиртовку или газовую горелку üНабор красок
Приготовление бактериального препарата n n Предметные и покровные стекла должны быть чистыми и хорошо обезжиренными (кипятят 15 минут в 1% растворе соды (или в мыльной воде), споласкивают водой, кладут в слабую соляную кислоту и, хорошо промывают водой. Хранят стекла в сосудах (банках) с притертыми пробками в смеси Никифорова (равное количество спирта и эфира), в 96° спирте, или промытыми и вытертыми досуха.
Исследование микроорганизмов в живом состоянии n Исследование микроорганизмов в живом состоянии применяется главным образом для изучения формы и подвижности бактерий, реже при реакции агглютинации.
Исследование в висячей и раздавленной капле n n Исследование проводят либо в висячей, либо в раздавленной капле, т. е. в капле на предметном стекле, покрытом покровным. Для висячей капли необходимо иметь специальное предметное стекло с луночкой.
Препарат «висячая капля» n n «Висячей каплей» пользуются для наблюдения подвижности микробов Для приготовления препарата небольшую каплю суспензии микроорганизмов наносят на покровное стекло, переворачивают его каплей вниз и помещают на специальное предметное стекло с углублением в центре 1 - предметное стекло с углублением в центре, 2 – покровное стекло, 3 – капля суспензии микроорганизмов.
n n n С жидкой среды маленькую каплю наносят на тщательно вымытое покровное стекло; С плотной - на покровное стекло предварительно наносят каплю воды или физраствора, культуру петлей размешивают в приготовленной капле. На покровное стекло накладывают предметное стекло с лункой посередине, края которой предварительно обмазаны вазелином. Предметное стекло слегка прижимают к покровному, в результате чего оба стекла склеиваются. Препарат переворачивают покровным стеклом кверху. Под микроскопом край капли сначала отыскивают со слабым увеличением и при суженной диафрагме, а потом исследуют препарат при помощи более сильной сухой системы.
Исследование окрашенных препаратов n Фиксированные окрашенные препараты готовят для выявления морфологических и структурных особенностей, количественного и видового учета микроорганизмов, проверки чистоты культуры и ряда других целей. Могут храниться длительное время
Этапы приготовления мазка n n 1. Обезжиренное предметное стекло и бактериологическую петлю прожигают в пламени горелки. Пробирку с изучаемой культурой держат между указательным и большим пальцами левой руки. Петлю берут правой рукой, мизинцем правой руки прижимают пробку пробирки к ладони. Если мазок готовится с жидкой питательной среды, то каплю культуры наносят петлей на предметное стекло. Если мазок делают из культуры с агара, то петлю с культурой вносят на предметное стекло и добавляют каплю физиологического раствора, в котором эмульгируют внесенный материал. Петлю обжигают в пламени горелки. Мазок должен быть тонким, равномерно растертым, округлой формы, размером 1, 5 -2 см.
Этапы приготовления мазка 2. Высушивание мазка производится при комнатной температуре. n 3. Фиксация мазка производится с целью: • Убить микробные клетки. • Обеспечить лучшее прилипание микробов к предметному стеклу. • Облегчить дальнейшее окрашивание. n n Фиксация мазка в пламени горелки производится 3 -кратно, действие пламени должно длиться 2 секунды. n Для более нежной фиксации мазков крови, спирохет и простейших использующих химические фиксаторы: • • • Метиловый спирт в течении 5 -и минут. Этиловый спирт (96°) в течении 10 -и минут. Смесь Никифорова — в течении 10 -15 минут. Ацетон — в течении 5 -и минут. Пары формалина — в течении нескольких секунд.
Этапы приготовления мазка n 4. Окраска препаратов проводится: • Простыми методами (водным фуксином Пфейффера, метиленовой синькой Леффлера), когда окрашивается вся клетка и используется только один краситель; • Сложными методам, когда определяются клеточные структуры. n После экспозиции мазок промывают водой, высушивают фильтровальной бумагой и микроскопируют под иммерсией.
Ориентировочная окраска n n n Для ориентировочной окраски бактерий, выявляющей только их морфологию, используют 1) разведенный (1 : 10) карболовый фуксин — 10 — 30 секунд; 2) Метиленовый синий Леффлера — 3— 10 минут; 3) спиртово-водный раствор метиленового синего — 3— 5 минут; 4) водный раствор метиленового синего — 5— 10 минут.
Дифференциальная окраска n n n Методика окраски по Граму На фиксированный мазок накладывают кусочек фильтровальной бумаги, пропитанный карболовым раствором генцианвиолета, смочивают водой, оставляют от 30 сек до 1 минуту. Сливают краситель и, не смывая, наливают раствор Люголя на 1 минуту. Сливают раствор Люголя и прополаскивают препарат в 95° спирте в течение 1/2 до 1 минуты, пока не перестанет отходить краситель. Промывают водой. Дополнительно окрашивают разведенным фуксином от 30 сек-1 минуту. Сливают краситель, промывают и высушивают препарат
Окраска кислото- и спиртоустойчивых микробов. n Окраска по Цилю — Нильсену — наиболее употребительный метод окраски микобактерий туберкулеза. 1. На фиксированный мазок кладут кусочек фильтровальной бумаги, наливают фуксин Циля и нагревают на горелке до отхождения паров, после чего препарат несколько остывет. 2. Снимают бумагу с фуксином, ополаскивают водой, опускают в стаканчик с 5% раствором серной кислоты, прополаскивают до обесцвечивания. Тщательно промывают водой. 3. Докрашивают раствором метиленового синего в течение 3— 5 минут. Кислото- и спиртоустойчивые палочки принимают красный цвет, все остальные микробы — синий.
Окраска включений в бактериях. Окраска по Нейссеру для выявления зернистости дифтерийных палочек В растворе метиленового синего держат 1 минуту, в растворе Люголя — 1 минуту. Промывают водой. Докрашивают раствором хризоидина (или везувина, или бисмарк-браун) 1 — 3 минуты. Промывают водой. Тела бактерий окрашиваются в нежножелтый цвет, зерна Бабеша — Эрнста—в темно-синий.
Окраска капсул n n Окраска капсул микробов может иногда иметь диагностическое значение. В мазках из органов или из тканей капсулы можно обнаружить при помощи простой окраски метиленовым синим. Специальные окраски дают более четкие препараты. Окраска по Бурри На середине предметного стекла наносят капельку туши и смешивают ее петлей с каплей культуры. Делают мазок ребром покровного стекла, дают высохнуть и микроскопируют. На черном фоне видны неокрашенные микробы, капсулы, жгутики.
Окраска капсул Окраска по Гинсу. n n Мазок, покрашенный тушью по Бурри, фиксируют сулемой, метиловым спиртом или на пламени. После промывки водой красят 5 -10 минут карболовым раствором тионина или фуксина и вновь промывают, а затем высушивают. Бактерии фиолетовые или красные. Фон черный. Капсулы неокрашенные!
Окраска спор. n n n Наиболее простой метод подобен окраске кислотоустойчивых бактерий (способ Циля — Нильсена). Препарат, приготовленный обычным способом, при нагревании окрашивают 1— 2 минуты карболовым фуксином Циля, промывают водой и обесцвечивают, погружая стекло в 2% раствор азотной кислоты в спирте или в 1 % водный раствор серной кислоты. Затем промывают водой и докрашивают водным раствором метиленового синего. Споры окрашивают в красный цвет. Способ Ожешки На нефиксированный мазок наливают 0, 5% раствор соляной кислоты и подогревают 1— 2 минуты. С препарата сливают кислоту, промывают его водой и после высыхания фиксируют на пламени. n Фиксированный препарат красят по способу Циля — Нильсена. В результате тела бактерий окрашиваются в синий цвет, споры — в красный
Метод Пешкова На мазок, фиксированный жаром (над пламенем!), наливают синьку Леффлера и подогревают стекло до закипания краски. Дают 15— 20 секунд покипеть, а затем (после того как стекло остынет!) промывают водой и докрашивают препарат 30 секунд 0, 5% водным раствором нейтрального красного. Промывают, сушат и микроскопируют; споры голубые, клетки розовые.
Окраска жгутиков n n Жгутики очень легко повреждаются приготовлении препарата. Исследуемая культура должна быть не старше 12— 18 часов. Серебрение по Морозову. Окраска препарата: наливают на 1 минуту 1% раствор уксусной кислоты, промывают водой, наливают раствор танина, подогревают до отхождения паров (1 минуту), тщательно промывают водой, 1— 2 минуты при подогревании обрабатывают препарат раствором азотнокислого серебра до появления темно-коричневой окраски мазка, тщательно промывают водой, высушивают. Рассматривают с иммерсионной системой.
Метод Леффлера n n За 1— 2 суток до употребления готовят протраву (состоит из спиртового раствора основного фуксина, водного раствора танина, водного раствора сернокислого аммиачного железа (соль Мора). Перед употреблением фильтруют. Препарат, приготовленный на покровном стекле, фиксируют и помещают на часовое стекло. Наливают протраву и 30— 50 секунд подогревают до отхождения паров. После овтывания промывают водой красят фуксином Циля 2— 3 минуты при слабом подогревании. После тщательной промывки и высушивания препарат микроскопируют.
Окраска ядерных элементов n Метод Романовского Препарат фиксируют метиловым спиртом или смесью Никифорова. Окрашивают рабочим раствором красителя (2 капли красителя Гимзы) 10— 20 минут. Промывают дистиллированной водой и после просушивания микроскопируют. При микроскопии ядерные элементы имеют красно-фиолетовый цвет, цитоплазма—слабо розовый. Метод Пикарского n Препарат обрабатывают 1 N НС 1 7 минут при подогревании до 60". После промывания мазок окрашивают по Романовскому. После окраски ядерные элементы темно-красные, протоплазма розовая.
Скачать презентацию Ультраструктура бактериальной клетки Этапы приготовления и методы окраски
Ультраструктура бактерий клетки.ppt