Скачать презентацию Теоретические основы полимеразной цепной реакции Механизм ПЦР
lecture15-пцр.ppt по биохимии
- Количество слайдов: 83
Теоретические основы полимеразной цепной реакции
Механизм ПЦР основан на явлении обратимости тепловой денатурации ДНК
нагревание
нагревание
нагревание
нагревание
нагревание
нагревание
При охлаждении раствора денатурированной ДНК происходит её ренатурация восстановление двухцепочечной структуры
охлаждение
охлаждение
охлаждение
охлаждение
охлаждение
охлаждение
охлаждение
Основные термины и понятия: 1. Праймер 2. Отжиг праймера (annealing) 3. Термостабильная ДНК-полимераза 4. Амплификация ДНК 5. Ампликон
ПЦР-цикл состоит из трёх шагов
Шаг 1: денатурация ДНК 95 C
Шаг 1: денатурация ДНК 95 C
Шаг 1: денатурация ДНК 95 C
Шаг 2: отжиг праймеров 40 -50 C
Шаг 3: элонгация цепей 72 C
Шаг 3: элонгация цепей 72 C
Шаг 3: элонгация цепей 72 C
Шаг 3: элонгация цепей 72 C
Шаг 3: элонгация цепей 72 C
Шаг 3: элонгация цепей 72 C
Шаг 3: элонгация цепей 72 C
Шаг 3: элонгация цепей 72 C
Шаг 3: элонгация цепей 72 C
Шаг 3: элонгация цепей 72 C
Шаг 3: элонгация цепей 72 C
Шаг 3: элонгация цепей 72 C
Шаг 3: элонгация цепей 72 C
В результате одного цикла число цепей удвоилось
В следующем цикле новосинтезированные цепи являются матрицами для синтеза новых цепей
95 C
95 C
95 C
40 -50 C
72 C
72 C
72 C
72 C
72 C
72 C
72 C
72 C
72 C
72 C
72 C
72 C
72 C
Число копий вновь удвоилось
Число ПЦР-продуктов нарастает экспоненциально 1
Число ПЦР-продуктов нарастает экспоненциально 2
Число ПЦР-продуктов нарастает экспоненциально 4
Число ПЦР-продуктов нарастает экспоненциально 8
Число ПЦР-продуктов нарастает экспоненциально 16
Число ПЦР-продуктов нарастает экспоненциально 32
Число ПЦР-продуктов нарастает экспоненциально 64
Число ПЦР-продуктов нарастает экспоненциально 128
Число ПЦР-продуктов нарастает экспоненциально 256
Число ПЦР-продуктов нарастает экспоненциально 512
Число ПЦР-продуктов нарастает экспоненциально 1024
Число ПЦР-продуктов нарастает экспоненциально 2048
В результате 30 циклов получается около 30 2 копий или 1073741824
Состав ПЦР-смеси: 1. ДНК-проба
Состав ПЦР-смеси: 1. ДНК-проба 2. Праймеры
Состав ПЦР-смеси: 1. ДНК-проба 2. Праймеры 3. Нуклеозид-3 -фосфаты
Состав ПЦР-смеси: 1. ДНК-проба 2. Праймеры 3. Нуклеозид-3 -фосфаты 4. Термостабильная ДНК-полимераза
Состав ПЦР-смеси: 1. ДНК-проба 2. Праймеры 3. Нуклеозид-3 -фосфаты 4. Термостабильная ДНК-полимераза 5. Буфер для ПЦР
Состав ПЦР-смеси: 1. ДНК-проба 2. Праймеры 3. Нуклеозид-3 -фосфаты 4. Термостабильная ДНК-полимераза 5. Буфер для ПЦР 6. Ионы Mg 2+
Определение результатов ПЦР
Определение результатов ПЦР
После электрофореза поместим гель на источник УФ-света — +
ампликоны
Kary B. Mullis
В 1993 г. за изобретение ПЦР Кэри Мюллису присуждена Нобелевская премия в области химии «за изобретение метода полимеразной цепной реакции»
Кэри Б. Мюллис НЕОБЫЧАЙНАЯ ИСТОРИЯ О ТОМ, КАК РОДИЛАСЬ ПОЛИМЕРАЗНАЯ ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ В мире науки (Scientific American) Июнь N 6 1990 г. или в Интернет http: //www. pcr. ru/bibliogr/how_pcr. htm