Схема постановки РЗК 1 Розведення гемолітичної сироватки Розведення

Схема постановки РЗК 1. Розведення гемолітичної сироватки Розведення сироватки Інгредієнти, мл 1: 100 Гемолітична сироватка в розведенні 1: 10 Фізіологічний розчин 1: 400 1: 800 1: 1000 1: 1200 1: 1400 1: 1600 1: 1800 1: 2000 0, 2 0, 1 0, 1 1, 8 3, 9 7, 9 9, 9 11, 9 13, 9 15, 9 17, 9 19, 9

2. Титрування гемолітичної сироватки Розведення гемолітичної сироватки Інгредієнт Контролі 1: 100 1: 400 1: 800 1: 1000 1: 1200 1: 1400 1: 1800 ГС К Е Гемолітична сироватка 0, 1 0, 1 - - Еритроцити барана 3 % суспензія 0, 1 0, 1 0, 1 Комплемент у 0, 1 розведенні 1: 10 0, 1 0, 1 - Фізіологічний розчин 0, 2 0, 2 0, 3 0, 4 0, 2 Інкубація при 37 ºС протягом 45 -60 хвилин Облік результатів

3. Приготування гемолітичної системи 1) 1 мл відмитих еритроцитів барана змішують з 32 мл фіз. розчину 2) Готують робочу дозу сироватки з таким розрахунком, щоб кінцевий об’єм рідини дорівнював 33 мл (наприклад, титр сироватки 1: 100, тоді робоча доза дорівнює 1: 33. Таким чином, 1 мл сироватки треба розчинити в 32 мл фіз. розчину). 3) Змішують 1) і 2) та ставлять в термостат при 37 0 С на 30 хв.

4. Розведення комплементу Інгредієнти, мл Розведення комплементу 1: 15 1: 20 1: 25 1: 30 1: 40 1: 60 1: 80 Комплемент в 0, 2 розведенні 1: 10 0, 2 0, 1 Фізіологічний розчин 0, 2 0, 3 0, 4 0, 3 0, 5 0, 7 0, 1

5. Титрування комплементу Інгредієнти, мл Доза реагентів, мл Комплемент в розведеннях 0, 25/ 1: 10 0, 25/ 1: 15 0, 25/ 1: 20 0, 25/ 1: 25 0, 25/ 1: 30 0, 25/ 1: 40 0, 25/ 1: 60 0, 25/ 1: 80 Гемолітична система 0, 5 0, 5 Фізіологічний розчин 0, 5 0, 5 Інкубація при 37 ºС протягом 60 хв Облік результатів

6. Розведення антигену Інгредієнти, мл Розведення антигену 1: 2 1: 4 1: 8 1: 16 1: 32 1: 64 1: 128 1: 256 1: 512 Антиген 0, 25 0, 25 0, 25 Фізіологічний розчин 0, 25 0, 25 0, 25

7. Титрування антигену Інгредієнти Антиген в розведеннях Доза реагентів, мл 0, 25/ 0, 25/ 1: 2 1: 4 1: 8 1: 16 1: 32 1: 64 0, 25/ 1: 128 0, 25/ 1: 256 0, 25/ 1: 512 Комплемент (робоча 0, 25 доза) 0, 25 0, 25 0, 25 0, 25 0, 25 0, 5 Фізіологічний розчин Інкубація при 37 ºС протягом 45 -60 хв Гемолітична система 0, 5 0, 5 Інкубація при 37 ºС протягом 45 -60 хв Облік результатів

8. Розведення досліджуваної сироватки Інгредієнти, мл Розведення сироватки 1: 20 1: 40 1: 80 1: 160 1: 320 1: 640 1: 1280 Досліджувана сироватка 1: 10 0, 25 0, 25 Фізіологічний розчин 0, 25 0, 25

9. Постановка основного досліду РЗК Інгредієнт Доза реагентів, мл Контроль С Досліджувана сироватка в розведеннях 0, 25/ 1: 10 0, 25/ 1: 20 0, 25/ 1: 40 1: 80 Антиген (робоча доза) 0, 25 Комплемент (робота доза) 0, 25 Фізіологічний розчин - К ГС - - 0, 25/ 1: 320 0, 25/ 1: 640 0, 25/ 1: 10 0, 25 0, 25 - 0, 25 0, 25 0, 25 - - - 0, 25 0, 75 0, 5 - 0, 25/ 1: 160 Аг - Інкубація при 37 ºС протягом 45 -60 хв Гемолітична система 0, 5 0, 5 Інкубація при 37 ºС протягом 45 -60 хв Облік результатів 0, 5