Световая микроскопия ПРАКТИКУМ 1 Основные задачи

Световая микроскопия ПРАКТИКУМ № 1

Основные задачи микроскопии Визуальное наблюдение Описание и измерение препаратов Запись изображения Диагностика Основные объекты микроскопии Фиксированные препараты Живые клетки и бесклеточные системы

Основные задачи микроскопии Визуальное наблюдение Описание и измерение препаратов Запись изображения Диагностика Основные объекты микроскопии Фиксированные препараты Живые клетки и бесклеточные системы

Первый микроскоп –Роберт Гук Наклонил тубус Поставил источник света и линзу перед ним Вставил третью линзу перед объективом и окуляром

Микрография, 1665 год Наблюдал структуру растений и дал чёткий рисунок, впервые показавший клеточное строение пробки (термин «клетка» был введён Гуком). В своей работе «Микрография» (Micrographia, 1665) он описал клетки бузины, укропа, моркови, привел изображения весьма мелких объектов, таких как глаз мухи, комара и его личинки, детально описал клеточное строение пробки, крыла пчелы, плесени, мха. В этой же работе Гук изложил свою теорию цветов, объяснил окраску тонких слоёв отражением света от их верхней и нижней границ.

Антони ван Левенгук – открытие прокариот Лупа ( «микроскоп» ) Левенгука Линза –маленький шарик диаметром 2 -3 мм Увеличение - 200 -300 раз(в 5 раз лучше, чем существующие!)

Бактерии из полости рта

Теория Аббе 1) Образование дифракционной картины в фокальной плоскости x' по методу Й. Фраунгофера 2) образование из отклоненных пучков оптического изображения А'' В" в сопряженной плоскости х". Согласно Аббе, разрешающая способность микроскопа заврхсит от его увеличения, величины числовой апертуры объектива и, наконец, от геометрического совершенства изображения (т. е. от степени исправления аберраций). Произведение синуса половины апертуры объектива микроскопа (u на показатель преломления (n) среды, лежащей между объектом наблюдения и объективом, Аббе назвал "числовой апертурой" (А): A = nsin(u/2). Согласно теории Аббе, числовая апертура определяет ряд важнейших свойств микроскопа: яркость изображения, "проникающую" способность, "отображающую" способность (т. е. степень сходства изображения с предметом). Чем больше числовая апертура, тем более мелкие подробности объекта наблюдения можно рассмотреть в микроскоп

Критерий Релея

РАЗРЕШАЮЩАЯ СПОСОБНОСТЬ СВЕТОВОГО МИКРОСКОПА λ- длина волны света, используемого для освещения объекта 0. 61λ d= nxsinα α - угол между оптической осью объектива и показатель преломления среды, лежащей между объектом наблюдения и объективом наиболее отклоняющимся лучом, попадающим в объектив А - числовая (нумерическая) апертура n- А = nxsinα

Применение иммерсии – изменение коэффициента преломления среды

СТРОЕНИЕ СВЕТОВОГО МИКРОСКОПА окуляры тубусодержатель бинокулярная насадка объективы узел смены объективов макро- и микровинты предметный столик конденсор основание источник света регулятор интенсивности света

Ход лучей в микроскопе

Маркировка объектива

ОБЩИЕ ПРАВИЛА РАБОТЫ С МИКРОСКОПОМ 1. Нельзя переносить микроскоп за «горловину» : необходимо всегда второй рукой поддерживать его снизу. 2. При работе с микроскопом нельзя применять большие усилия. Ни в коем случае нельзя касаться пальцами поверхности линз, зеркал и светофильтров. 3. Чтобы предохранить внутренние поверхности объективов, а также призмы тубуса от попадания пыли, необходимо всегда оставлять окуляр в тубусе. 4. Объективы должны находится в чистом состоянии. По окончании работы на микроскопе необходимо тщательно удалить остатки иммерсионного масла с фронтальной линзы объектива. 5. После окончания работы на препарат должен был наведен объектив с малым увеличением. Нельзя оставлять «смотрящим вниз» объектив с увеличением 40 х или 90 х. 6. Запрещается использовать иммерсионную жидкость с неиммерсионными объективами.

МЕТОД ИНВЕРТИРОВАННОЙ СВЕТОВОЙ МИКРОСКОПИИ ИНВЕРТИРОВАННЫЙ МИКРОСКОП источник света бинокулярная насадка предметный столик макро- и микровинты объективы

МЕТОД ИНВЕРТИРОВАННОЙ СВЕТОВОЙ МИКРОСКОПИИ НАПРАВЛЕНИЕ ХОДА ЛУЧЕЙ В ИНВЕРТИРОВАННОМ МИКРОСКОПЕ

Темнопольная микроскопия основана на способности микроорганизмов сильно рассеивать свет. Для темнопольнои микроскопии пользуются обычными объективами и специальными темнопольными конденсорами. Основная особенность темнопольных конденсоров заключается в том, что центральная часть у них затемнена и прямые лучи от осветителя в объектив микроскопа не попадают. Объект освещается косыми боковыми лучами и в объектив микроскопа попадают только лучи, рассеянные частицами, находящимися в препарате. Темнопольная микроскопия основана на эффекте Тиндаля, известным примером которого служит обнаружение пылинок в воздухе при освещении их узким лучом солнечного света. Чтобы в объектив не попадали прямые лучи от осветителя, апертура объектива должна быть меньше, чем апертура конденсора. Для уменьшения апертуры в обычный объектив помещают диафрагму или пользуются специальными объективами, снабженными ирисовой диафрагмой. При темнопольной микроскопии микроорганизмы выглядят ярко светящимися на черном фоне. При этом способе микроскопии могут быть обнаружены мельчайшие микроорганизмы, размеры которых лежат за пределами разрешающей способности микроскопа. Однако Темнопольная микроскопия позволяет увидеть только контуры объекта, но не дает возможности изучить внутреннюю структуру.

Фазовый контраст – Фриц Цернике, нобелевский лауреат 1953 года Цернике ввел понятие «Коэффициент рефракции» -скорость прохождения света через различные объекты. Биологический объект в среднем замедляет движение волны света на λ/4. Сдвиг фазы нельзя зарегистрировать, но можно зарегистрировать сдвиг амплитуды, т. е. интенсивности. Интерференцию световых лучей мы будем видеть как увеличение контраста.

Фазовоконтрастный микроскоп

МЕТОД ФАЗОВО-КОНТРАСТНОЙ МИКРОСКОПИИ клетки культуры СПЭВ клетк а ядро ядрышки ядро фото Е. А. Александровой

МЕТОД ФЛУОРЕСЦЕНТНОЙ МИКРОСКОПИИ ФЛУОРЕСЦЕНТНЫЙ МИКРОСКОП

Флуоресцентная микроскопия Стоксов сдвиг — разница длин волн максимумов спектров поглощения и флуоресценции. Измеряется в обратных сантиметрах, реже в нанометрах, в силу нелинейной зависимости энергии фотона от длины волны. Назван в честь физика Джорджа Стокса. Когда система (молекула или атом) поглощает энергию, она переходит в возбужденное состояние. Существует несколько возможностей для её возврата в основное состояние. Одним из них является испускание. Вследствие разных причин часть поглощенной энергии теряется в безызлучательных процессах. В результате этого испущенный фотон имеет меньшую энергию, и, следовательно, большую длину волны, чем поглощенный.

МЕТОД ФЛУОРЕСЦЕНТНОЙ МИКРОСКОПИИ КЛЕТКИ КУЛЬТУРЫ СПЭВ. ОКРАСКА РОДАМИНОМ фото Е. А. Александровой

МЕТОД ФАЗОВОКОНТРАСТНОЙ МИКРОСКОПИИ МЕТОД ФЛУОРЕСЦЕНТНОЙ МИКРОСКОПИИ СОВМЕСТНОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МЕТОДОВ фото Е. А. Александровой

ТЕХНИКА ПРИГОТОВЛЕНИЯ ПРЕПАРАТОВ. Заливка материала. парапласт термостат

ТЕХНИКА ПРИГОТОВЛЕНИЯ ПРЕПАРАТОВ. Работа на микротоме. современный микротом начала XX века

ТЕХНИКА ПРИГОТОВЛЕНИЯ ПРЕПАРАТОВ. Современный инструментарий станция по заливке парафином автомат для окраски срезов и мазков автомат для гистологической обработки тканей

ПРЕПАРАТ КРОВИ ЛЯГУШКИ. увеличение 100 х лимфоциты гранулоциты эритроциты

ПРЕПАРАТ КРОВИ ЛЯГУШКИ. увеличение 100 х МЕТОД ФАЗОВО-КОНТРАСТНОЙ МИКРОСКОПИИ МЕТОД ШИРОКОПОЛЬНОЙ МИКРОСКОПИИ