Световая микроскопия Подготовила студентка ФМед Ф группы

Световая микроскопия Подготовила: студентка ФМед. Ф группы № 6181/10 Бекетова Дарья

Микроскоп (от греческого mikros - малый и skopeo смотрю) оптический прибор для получения увеличенного изображения мелких объектов и их деталей, не видимых невооруженным глазом.

Виды микроскопии • Оптическая (световая) микроскопия • Электронная микроскопия • Рентгеновская микроскопия

Разрешающая способность наименьшее расстояние между элементами наблюдаемого объекта (воспринимаемыми как точки или линии), при котором они ещё могут быть отличены один от другого Человеческий глаз 0, 176 мм=176 мкм Световой микроскоп 0, 2 мкм=200 нм Рентгеновский микроскоп 2 -20 нм Электронный микроскоп 0. 2 -0. 5 нм

Устройство оптического микроскопа А – окуляр B – объектив С – объект D – конденсор Е – предметный столик F – зеркало Увеличение оптического микроскопа равно произведению увеличений объектива и окуляра

Принципы световой микроскопии Пучок света, проходящий через исследуемый образец или отраженный от него, меняет одну или несколько характеристик (длину волны, интенсивность, фазу или плоскость поляризации), что сопровождается различными оптическими эффектами — поглощением, отражением, преломлением, дифракцией, интерференцией, дисперсией, люминесценцией и другими, которые в совокупности и составляют изображение.

Типы аберраций • Сферическая аберрация

• Кома аберрация

• Астигматизм

• Дисторсия Идеальное изображение, подушкообразная и бочкообразная дисторсия

• Хроматические аберрации (хроматизм положения, хроматизм увеличения)

Ахроматические объективы рассчитаны для применения в спектральном диапазоне 486– 656 нм. Исправление любой аберрации (ахроматизация) выполнено для двух длин волн. В этих объективах устранены сферическая аберрация, хроматическая аберрация положения, кома, астигматизм и частично — сферохроматическая аберрация. Изображение объекта имеет несколько синевато-красноватый оттенок.

Апохроматические объективы имеют расширенную спектральную область, и ахроматизация выполняется для трех длин волн. При этом, кроме хроматизма положения, сферической аберрации, комы и астигматизма, достаточно хорошо исправляются также вторичный спектр и сферохроматическая аберрация, благодаря введению в схему линз из кристаллов и специальных стекол. По сравнению с ахроматами, эти объективы обычно имеют повышенные числовые апертуры, дают четкое изображение и точно передают цвет объекта.

Полуапохроматы или микрофлюары. Современные объективы, обладающие промежуточным качеством изображения.

Планобъективы В планобъективах исправлена кривизна изображения по полю, что обеспечивает резкое изображение объекта по всему полю наблюдения. Планобъективы обычно применяются при фотографировании, причем наиболее эффективно применение планапохроматов.

Методы освещения 1. Метод светлого поля и его разновидности 1. 1. Метод светлого поля в проходящем свете. Применяется при изучении прозрачных препаратов с включенными в них абсорбирующими (поглощающими свет) частицами и деталями (тонкие окрашенные срезы животных и растительных тканей, тонкие шлифы минералов и т. д. ).

1. 2. Метод косого освещения Разновидность предыдущего метода. Отличие между ними состоит в том, что свет на объект направляют под большим углом к направлению наблюдения. Иногда это помогает выявить «рельефность» объекта за счёт образования теней.

1. 3. Метод светлого поля в отражённом свете Применяется при исследовании непрозрачных отражающих свет объектов, например шлифов металлов или руд. Освещение препарата (от осветителя и полупрозрачного зеркала) производится сверху, через объектив, который одновременно играет и роль конденсора.

2. Метод темного поля в проходящем свете Используется для получения изображений прозрачных неабсорбирующих объектов, которые не могут быть видны, если применить метод светлого поля. Зачастую это биологические объекты. Свет от осветителя и зеркала направляется на препарат конденсором специальной конструкции — т. н. конденсором тёмного поля.

3. Метод фазового контраста и его разновидность — т. н. метод «аноптрального» контраста предназначены для получения изображений прозрачных и бесцветных объектов, невидимых при наблюдении по методу светлого поля. К таковым относятся, например, живые неокрашенные животные ткани.

4. Поляризационная микроскопия Метод наблюдения в поляризованном свете для микроскопического исследования препаратов, включающих оптически анизотропные элементы (или целиком состоящих из таких элементов). Таковыми являются многие минералы, зёрна в шлифах сплавов, некоторые животные и растительные ткани и пр.

5. Метод исследования в свете люминесценции люминесцентная микроскопия (или флуоресцентная микроскопия) состоит в наблюдении под микроскопом зеленооранжевого свечения микрообъектов, которое возникает при их освещении синефиолетовым светом или не видимыми глазом ультрафиолетовыми лучами.

Макрофаги с поглощенными латексными частицами В проходящем свете, увеличение 1000 х В режиме флуоресценции (поглощение 495 нм, испускание 517 нм), увеличение 1000 х

Метод ДНК-комет (исследование канцерогенных свойств лекарственных препаратов) Окраска гелей SYBR Green I – ДНК специфический флуоресцентный краситель Интактные клетки А 549 (карцинома легкого человека) 8 m. M ЭМС (Этилметансульфонат)

Обсчет фотографий в специализированном программном обеспечении Вычисление 13 различных параметров. Наиболее информативные: 1) Длина хвоста кометы; 2) Количество ДНК в хвосте кометы в %

Спасибо за внимание!