СТРУКТУРА МЕТОДОВ ИССЛЕДОВАНИЯ, ПРИМЕНЯЕМЫХ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ИНФЕКЦИЙ, ПЕРЕДАВАЕМЫХ ПОЛОВЫМ ПУТЕМ, И УРОГЕНИТАЛЬНЫХ ИНФЕКЦИЙ В …… КЛИНИЧЕСКОМ КОЖНО-ВЕНЕРОЛОГИЧЕСКОМ ДИСПАНСЕРЕ, И СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ИХ ЭФФЕКТИВНОСТИ
• • • Инфекционно-воспалительные заболевания урогенитального тракта являются одной из основных причин снижения качества жизни и нарушения репродуктивной функции человека. Из многообразия микроорганизмов, способных вызывать такие заболевания, доказана роль Treponema pallidum, Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis, Trichomonas vaginalis, Mycoplasma genitalium относящихся к группе облигатных патогенов, возбудителей ИППП. Воспалительные заболевания урогенитального тракта, а также невынашивание беременности этиологически часто связаны с условнопатогенными микроорганизмами: Mycoplasma hominis, Ureaplasma spp. Особую проблему представляет генитальный герпес, рост которого отмечается в последнее десятилетие и роль которого в формировании патологии, в т. ч. врожденной, значительно возросла. Первым этапом микробиологической диагностики инфекционных болезней является выбор материала и метода для исследования, обусловленный патогенезом заболевания. В состав КДЛ БУЗОО «ККВД» входят лабораторные подразделения позволяющие обеспечить проведение всех необходимых методов лабораторных исследований В данном докладе будет представлены: структура используемых в КДЛ прямых методов исследования биологического материала взятого из предполагаемого очага инфекции у пациентов. оценка эффективности прямых методов исследования, направленных на выявление возбудителей инфекционного процесса или его антигенов (АГ) или его генетического материала (ДНК);
Заболеваемость ИППП в Н-ской области в сравнении с показателями по РФ и …. ФО в 2008 – 2012 годах (случаи на 100 тысяч населения) Омская область РФ Сиб. ФО 2008 2009 2010 2011 2012 2010 2011 Сифилис 58, 4 61, 6 56, 6 55, 4 53, 7 44, 9 37, 6 32, 4 80, 8 71, 2 Гонорея 81, 5 71, 0 61, 7 63, 1 60, 1 42, 7 38, 2 36, 0 72, 8 66, 3 Трихомониаз 161, 0 129, 3 111, 7 106, 7 90, 0 126, 8 111, 4 н/д 220, 7 203, 5 Хламидийная инфекция 101, 2 82, 6 102, 6 88, 0 87, 0 71, 0 65, 9 н/д 64, 9 59, 6 Аногенитальная герпетическая инфекция 27, 8 24, 1 27, 3 29, 4 32, 5 19, 8 18, 3 н/д 12, 3 Аногенитальные бородавки 52, 0 43, 1 46, 6 40, 9 38, 3 32, 7 29, 2 н/д 27, 8 25, 9 • • На протяжении последних пяти лет (2008 – 2012 годы) в Омской области отмечается положительная динамика по заболеваемости ИППП: ● сифилис – снижение на 8, 0 % ● гонококковая инфекция – снижение на 26, 3 % ● ИППП II поколения (А 56 – А 63. 0) – снижение на 27, 6 % (исключение: рост заболеваемости аногенитальной герпетической инфекцией на 16, 9 %) Однако темпы снижения заболеваемости ИППП I поколения отстают от показателей по РФ и ее уровень в Омской области превышает показатели по РФ: ● сифилис – на 65, 7 % ● гонококковая инфекция – на 66, 9 % ● ИППП II поколения ((А 56 – А 63. 0) показатель 2011 года) – на 10, 2 %.
Удельный вес отдельных ИППП в общей структуре заболеваемости по Омской области 2010 год Абс. % 2011 год Абс. % Абс. РФ СФО % 2010 2011 ИППП всего (А 50 А 63. 0), в т. ч. : 8295 Сифилис 1138 13, 9 1096 14, 5 1062 14, 8 13, 3 12, 5 16, 8 16, 2 Гонорея 1242 15, 2 1247 16, 4 1188 16, 6 12, 7 15, 2 15, 1 Трихомониаз 2248 27, 5 2110 27, 8 1779 24, 9 37, 5 37, 1 46, 0 46, 4 Хламидийная инфекция 2064 25, 2 1740 22, 9 1721 24, 1 21, 0 21, 9 13, 5 13, 6 Аногенитальная герпетическая инфекция 550 6, 7 581 7, 7 643 9, 0 5, 9 6, 1 2, 2 2, 8 Аногенитальные бородавки 937 11, 5 808 10, 7 758 10, 6 9, 7 5, 8 5, 9 • • 7582 2012 год 7151 В 2012 году по отношению к 2010 году возросла доля больных герпетической инфекцией и гонореей на 2, 3 % и 1, 4 %, снизился удельный вес больных трихомониазом на 2, 6 %. В сравнении с РФ в области отмечается более высокий удельный вес больных венерическими болезнями, в первую очередь гонореей (выше, чем по РФ на 6, 2 %, в том числе гонореей – на 3, 9 %) и более низкий – трихомониазом (меньше чем по РФ на 12, 2 %).
Материалы и методы исследования За 2012 г. в КДЛ ……. проведено 264058 анализов биологического материала, полученного от пациентов, обратившихся на прием к венерологу с наличием клинических признаков заболевания , либо с профилактической целью. Обследование пациентов проводилось микроскопическим , культуральным, иммунофлюоресцентным (РПИФ), молекулярно-биологическим (ПЦР) методами для выявления возбудителей инфекций, передаваемых половым путем, и урогенитальных инфекций. • Клиническим материалом для лабораторных исследований являлись: ■ у женщин: отделяемое (соскоб) уретры, цервикального канала, влагалища, нижнего отдела прямой кишки (для гонококковой инфекции, по показаниям – хламидийной инфекции), ■ у мужчин: отделяемое (соскоб) уретры, секрет предстательной железы; ■ у детей и у женщин, не имевших в анамнезе половых контактов с пенетрацией: отделяемое уретры, задней ямки преддверия влагалища, нижнего отдела прямой кишки (для гонококковой инфекции, по показаниям – хламидийной инфекции); при осмотре с использованием детских гинекологических зеркал – отделяемое цервикального канала. •
Структура прямых методов исследований отделяемого половых органов за 2012 год
1. Микроскопические исследования окрашенных мазков - 85, 16% : • Микроскопические исследования препарата, окрашенного 1% раствором метиленового синего и по Граму проводились для обнаружения Neisseria gonorrhoeae/грамотрицательных диплококков. • Микроскопического исследования препарата, окрашенного 1% раствором метиленового синего, по Граму и Романовскому–Гимзе проводилось для обнаружения Trichomonas vaginalis. • Микроскопическое исследование препаратов окрашенных по Граму проводилось для обнаружения вегетирующих форм грибов Candida – псевдомицелия и почкующихся дрожжевых клеток. 2. Микроскопия нативного мазка составила 3, 16% в структуре методов: • микроскопическое исследование нативного препарата (световое, фазовоконтрастное и темнопольное) применялось для обнаружения Trichomonas vaginalis, Treponema pallidum.
• • Молекулярно-биологический метод ПЦР-9, 06% Исследование методом ПЦР в реальном времени проводилось для обнаружения специфических фрагментов ДНК Trichomonas vaginalis, Neisseria gonorrhoeae, Treponema pallidum, Chlamydia trachomatis, Mycoplasma hominis, Ureaplasma species, Mycoplasma genitalium, Herpes simplex virus 1, 2 типов. Бактериологический (культуральный) метод составил 1, 77% Бактериологические исследования проводились для выявления Neisseria gonorrhoeae и определение чувствительностик к а/м препаратам. Культуральное исследование в количественном варианте проводилось для диагностики урогенитального кандидоза при отрицательном результате микроскопического исследования и наличии клинических проявлений у пациента. Бактериологический метод диагностики основанный на расщеплении мочевины проводился для выявления Mycoplasma hominis, Ureaplasma spp. . Иммунофлюоресцентный метод (РПИФ, реакция прямой иммунофлюоресценции) -0, 85% метод выявления специфических Аг с помощью Ат, конъюгированных с флюорохромом, применялся для выявления Chlamydia trachomatis, Mycoplasma hominis, Ureaplasma spp. .
Структура исследований отделяемого половых органов по возбудителям ИППП и урогенитальных инфекций
СТРУКТУРА МЕТОДОВ ИССЛЕДОВАНИЯ, ПРИМЕНЯЕМЫХ в БУЗОО «ККВД» ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ИППП, И УРОГЕНИТАЛЬНЫХ ИНФЕКЦИЙ
ВЫЯВЛЯЕМОСТЬ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ИНФЕКЦИЙ, ПЕРЕДАВАЕМЫХ ПОЛОВЫМ ПУТЕМ, И УРОГЕНИТАЛЬНЫХ ИНФЕКЦИЙ РАЗЛИЧНЫМИ МЕТОДАМИ В КДЛ БУЗОО ККВД в 2012 г.
ВЫЯВЛЯЕМОСТЬ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ИНФЕКЦИЙ, ПЕРЕДАВАЕМЫХ ПОЛОВЫМ ПУТЕМ, И УРОГЕНИТАЛЬНЫХ ИНФЕКЦИЙ РАЗЛИЧНЫМИ МЕТОДАМИ В КДЛ БУЗОО ККВД в 2012 г. Возбудитель инфкции Всего иссл ПЦР Нативн. Окраше РПИФ микроск % нный % % % выяв мазок выявл л Trichomonas vaginalis Уд. вес Neisseria gonorrhoeae Уд. вес Treponema pallidum 83832 100 77152 100 590 1134 1, 35 61 0, 08 2 2, 12 Уд. вес Chlamydia trachomatis 100 8862 0, 34 Уд. вес Mycoplasma hominis Уд. вес Ureaplasma species 100 2100 8632 Уд. вес 100 Herpes simplex virus 1, 2 871 Уд. вес Candida species Уд. вес Mycoplasma genitalium Уд. вес всего 100 75215 100 6794 100 264058 Уд. вес 100 8096 91, 3 144 6, 86 6840 79, 24 850 7748 9, 24 60 0 588 27, 20 14 16, 39 74950 89, 4 74950 97, 15 0 Бактери ологиче % ские выявл посевы 50 2141 2, 7 10 1103 52, 52 1168 11, 33 40 99, 66 17, 26 0, 16 752 8, 49 853 40, 62 624 17, 36 44, 93 7, 23 8, 51 9, 73 17, 31 10, 02 13, 53 24, 13 100 74950 99, 65 6794 6, 49 100 23921 9, 06 30 265 0, 35 8336 224864 2250 4687 3, 16 85, 16 0, 85 1, 77 18, 11
Молекулярноа-биологические исследования на обнаружение ДНК вирус папилломы человека (ВПЧ). • • • Данные исследования проводились в количественном варианте методом ПЦР в реальном времени. Определялась вирусная нагрузка - количество геномных эквивалентов (ГЭ) вируса определенной филогенетической группы(А 5, 6, 7, 9) на 10 5 клеток человека, которая оценивалась с позиции риска развития дисплазии. За 2012 год на ВПЧ 16/18 т исследовано 204 пробы, положительных -26%; на ВПЧ высокого канцерогенного риска (ВКР) 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 типов ВКР исследовано 972 пробы, положительных - 32%.
Результаты ПЦР- исследование на ВПЧ высокого канцерогенного риска (ВКР) 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 типов за 2012 год Групп ы обсле дован ных Муж. Филогенетическая группа А 7 -18, 39, 45, 59 типы ВПЧ ВКР Филогенетическая группа А 5 и А 6 - 51, 56 типы Всех групп Малоз начим ая конце нтрац ия Клини чески значи мая повы шенна я Малоз начим ая конце нтрац ия Клини чески значи мая повы шенна я Клинич ески значим ая повыше нная 972 66 101 64 60 61 38 61 32 35 185 137 10, 4% 6, 6% 6, 2% 6, 3% 3, 9% 6, 3% 3, 6% 19% 14, 1% 47 80 54 38 47 33 32 27 30 154 117 7% Жен. Филогенетическая группа А 9 16, 31, 33, 35, 52, 58 типы ВПЧ ВКР 6, 8% всего Колич ество иссле дован ных проб 11, 8% 8% 5, 6% 7% 4, 9% 4, 7% 4% 4, 4% 22, 8% 17, 3% 19 21 10 22 14 5 29 5 5 31 20 6, 4% 7, 1% 3, 4% 7. 4% 4, 7% 10% 1, 7% 10, 5% 6, 8% 676 296
Результаты параллельных исследований методом ПЦР и НАСБА для обнаружения ДНК и РНК Chlamydia trachomatis и Mycoplasma genitalium в отделяемом половых органов пациентов впервые обратившихся на прием к венерологу
Возможные причины расхождений результатов ПЦР и НАСБА • Пациенты обратившиеся впервые на прием к венерологу с жалобами на выделения из половых органов уже начали принимать лекарственные препараты. • Транспортные среды не обеспечивают сохранность микроорганизмов жизнеспособными (не стабилизируют РНК) • Негативная роль человеческого фактора при ручном способе выделения НК (нуклеиновых кислот).
Исследование ликвора на наличие ДНК Treponema pallidum Номер пробы Ig M Ig G РИФ ДНК 1 - 1: 8 4+ Не обнар. 2 - 1: 4 2+ Не обнар. 3 - 1: 8 3+ Не обнар. 4 - 1: 16 3+ Не обнар. 5 - 1: 2 3+ Не обнар. 6 - 1: 2 2+ Не обнар. 7 - 1: 2 2+ Не обнар. 8 - 1: 8 3+ Не обнар. 9 - 1: 64 2+ Не обнар. • • • МП ИЛС, Москва, 2010 «Взятие, транспортировка , хранение клинического материала для ПЦРдиагностики» предлагается исследовать СМЖ на обнаружение ДНК Treponema pallidum. Инструкция по применению набора реагентов для выявления ДНК Treponema pallidum методом ПЦР не предусматривает исследование ликвора. В КДЛ планируется провести исследование проб СМЖ у пациентов с ранними формами сифилиса с положительными результатами ИФА на Ig M
Выводы: • • В 2012 г. ведущее место в структуре прямых методов исследований, используемых в……, занимал микроскопический метод (88, 3%), что объясняется простотой , доступностью и быстротой получения результатов (30 - 60 мин и менее). Результаты микроскопии использовались как ориентировочные так как чувствительность их не превышает 40– 60% в связи с субъективной оценкой результатов; Исключение составляют: микроскопическое исследование препаратов окрашенных по Граму для обнаружения вегетирующих форм грибов Candida в сочетании с клиническими проявлениями заболевания. Микроскопическое исследовании уретрального отделяемого у мужчин с манифестными проявлениями гонококковой инфекции. Микроскопическое исследование нативного препарата для диагностики трихомониаза при клинически выраженных формах заболевания; Микроскопия в темном поле зрения для диагностики ранних форм сифилиса с клиническими проявлениями. (Особенностью метода нативной микроскопии является немедленное исследование после получения клинического материала, что представляет определенные трудности в практическом применении. )
• • Выводы: В структуре методов, применяемых для обследования пациентов на наличие Chlamydia trachomatis, Ureaplasma species преобладает ПЦР (79 -91%), положительных результатов 17, 3 -50%. При идентификации Mycoplasma genitalium удельный вес ПЦР составил 100%, положительных результатов - 6, 5% При исследовании на Herpes simplex virus 1 и 2 типов удельный вес ПЦР составил 100%, положительных результатов - 24, 1%. Культуральный метод применялся для выявления возбудителей гонококковой инфекции, урогенитального кандидоза и количественного обнаружения Mycoplasma hominis и Ureaplasma spp. , высеваемость возбудителей составляет 10, 0 -18%. Культуральным методом определялась чувствительность антимикробных препаратов к выявленным микроорганизмам. Недостатки бактериологического метода - опасность инфицирования, сложность, трудоемкость, длительность.
Тенденции наметившиеся в структуре методов диагностики ИППП и урогенитальных инфекций в 2013 году. • • С целью увеличения в структуре методов исследований удельного веса высокочувствительных и специфичных в 2013 году внедрены мультипраймные ПЦР-исследования: Определение ДНК: Chlamydia trachomatis, Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis, Ureaplasma spp. Определение ДНК : Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis, Mycoplasma genitalium, Trichomonas vaginalis Со второго квартала 2013 г. РПИФ не применяется для индикации Chlamydia trachomatis, Ureaplasma species и Mycoplasma hominis. В связи с трудоёмкостью и значительному влиянию человеческого фактора темнопольная микроскопия для обнаружение Treponema pallidum со второго квартала 2013 года заменена ПЦР исследованием отделяемого эрозивноязвенных элементов. С 2013 года исследование на ВПЧ ВКР 16/18 типов исключено из номенклатуры исследования в связи с выявлением у обследованных лиц ВПЧ ВКР других филогенетических групп в клинически значимых концентрациях. В данный момент внедряется диагностическое цитологическое исследование эпителия цервикального канала на наличие атипичных клеток, которое планируется проводить пациенткам с положительными результатами на ВПЧ ВКР с целью определения дальнейшей тактики лечения.
Скачать презентацию СТРУКТУРА МЕТОДОВ ИССЛЕДОВАНИЯ ПРИМЕНЯЕМЫХ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ИНФЕКЦИЙ
3) Блок Доклад Казань Блок СН 2013.ppt