Стратегии применения быстрых тестов в мировой практике Дробченко

Стратегии применения быстрых тестов в мировой практике Дробченко А. Е ЗАО «Биоград» , Санкт-Петербург, http: //www. biograd. ru © ЗАО «Биоград» , 2015 г. 1

Алгоритм тестирования (СП 3. 1. 5. 2826 -10) « 4. 4. 1. На первом этапе (скрининговая лаборатория). Если получен положительный результат в ИФА, анализ проводится последовательно еще 2 раза (с той же сывороткой и в той же тест-системе, вторая сыворотка запрашивается только в случае невозможности направления для дальнейшего исследования первой сыворотки). Если получены два положительных результата из трех постановок в ИФА сыворотка считается первично-положительной и направляется в референс-лабораторию (Лаборатория диагностики ВИЧинфекции центра по профилактике и борьбе со СПИД) для дальнейшего исследования. » … © ЗАО «Биоград» , 2011 г.

Алгоритм тестирования (СП 3. 1. 5. 2826 -10) « 4. 4. 2. На втором этапе (референс-лаборатория). Первично положительная сыворотка повторно исследуется в ИФА во второй тест-системе другого производителя, отличающейся от первой по составу антигенов, антител или формату тестов, выбранной для подтверждения. При получении отрицательного результата сыворотка повторно исследуется в третьей тест-системе другого производителя, отличающейся от первой и второй по составу антигенов, антител или формату тестов. В случае получения отрицательного результата (во второй и третьей тест-системах) выдается заключение об отсутствии антител к ВИЧ. » … © ЗАО «Биоград» , 2011 г.

Алгоритм тестирования (СП 3. 1. 5. 2826 -10) « При получении положительного результата (во второй и/или третьей тест-системе) сыворотку необходимо исследовать в иммунном или линейном блоте. Результаты, полученные в подтверждающем тесте, интерпретируются как положительные, неопределенные и отрицательные. 4. 4. 3. Положительными (позитивными) считаются пробы, в которых обнаруживаются антитела к 2 из 3 гликопротеинов ВИЧ (env, gag, pol). 4. 4. 4. Отрицательными (негативными) считаются сыворотки, в которых не обнаруживается антитела ни к одному из антигенов (белков) ВИЧ или имеется слабое реагирование с белком р 18. » … © ЗАО «Биоград» , 2011 г.

Алгоритм тестирования (СП 3. 1. 5. 2826 -10) « 4. 4. 5. Неопределенными (сомнительными) считаются сыворотки, в которых обнаруживаются антитела к одному гликопротеину ВИЧ и/или каким-либо протеинам ВИЧ. При получении неопределенного результата с белковым профилем, включающим белки сердцевины (gag) р 25, проводится исследование для диагностики ВИЧ-2. 4. 4. 6. При получении отрицательного и сомнительного результата в иммунном или линейном блоте рекомендуется исследовать сыворотку в тест-системе для определения р24 антигена или ДНК/РНК ВИЧ. Если был выявлен антиген р24 или ДНК/РНК ВИЧ, повторное обследование в иммунном или линейном блоте проводится через 2, 4, 6 недель после получения первого неопределенного результата. » … © ЗАО «Биоград» , 2011 г.

Отчет ВОЗ № 17 (2013 год) Приведены алгоритмы диагностики, в которых тесты делятся по уровню использования на тесты первого, второго и третьего уровня. Быстрые тесты рекомендованы для случаев, когда необходимо ставить <40 анализов в день Классические ИФА тест-системы рекомендованы для проведения более чем 40 анализов в день, при возможности «удержания» пациента © ЗАО «Биоград» , 2014 г.

Отчет ВОЗ № 17 (2013 год) Классификация серологических тестов (ИФА и быстрые тесты) по поколениям в зависимости от применяемых антигенов и конъюгатов: Первое поколение – антигены из вирусного лизата Второе поколение – синтетические пептиды Третье поколение – рекомбинантные антигены / меченые рекомбинантные антигены в конъюгате ( «сэндвич» антиген-антитело-антиген) Четвертое поколение – одновременное определение антител и антигена p 24 (Аг-Ат) Отчет по четвертому поколению еще не опубликован © ЗАО «Биоград» , 2014 г.

Отчет ВОЗ № 17 (2013 год) алгоритм тестирования высокая распространенность (>5%) © ЗАО «Биоград» , 2014 г.

Отчет ВОЗ № 17 (2013 год) алгоритм тестирования низкая распространенность (<5%) © ЗАО «Биоград» , 2014 г.

Программы скрининга групп высокого риска, Сан-Франциско США 2003 -2008 © ЗАО «Биоград» , 2015 г.

Рекомендации CDC, 2014 © ЗАО «Биоград» , 2015 г.

Point of Care (POC) тесты © ЗАО «Биоград» , 2015 г.

Возможный алгоритм с быстрыми тестами 4 поколения Тест 4 поколения с раздельным определением Антител (Ат) и антигена p-24 (Аг). Ат+ Аг- Ат- Аг+ Быстрый блот + - или ± Отрицательный результат Молекулярный тест (NAT) + Иммуноблот, ИФА в соотв. с СП - Острая ВИЧ инфекция Повторное тестирование © ЗАО «Биоград» , 2015 г.

Отчет ВОЗ № 17 (2013 год) Быстрые: - Иммунохроматографические (lateral-flow) - Мембранные, иммунофильтрация (flow-through) Простые: - Иммуноферментные гребни (combs) - Агглютинационные (latex agglutination) © ЗАО «Биоград» , 2015 г.

Критерии положительного результата (Western Blot): СП 3. 1. 5. 2826 -10 «Профилактика антитела к 2 из 3 гликопротеинов ВИЧ-инфекции» ВИЧ (env, gag, pol). ВОЗ (рекомедованы в письме два env (gp 41, gp 160, gp 120) Минздравсоцразвития N 4174 -РХ от 4. 08. 2006 г. ) CDC любые два из: p 24, gp 41, gp 160/120 Американский Красный Крест по одной полосе из env, gag и pol CRSS Консорциум по стандартизации ретровирусной серологии gag или pol И env (p 24 или p 31) И (gp 41 или gp 120/160) © ЗАО «Биоград» , 2011 г.

Бесприборные (быстрые и простые тесты четвертого поколения): Простые: -Иммуноферментные гребни (combs) Immuno. Comb II HIV 1&2 Tri. Spot Ag-Ab Быстрые: -Иммунохроматографические (lateral-flow) Alere Determine HIV-1/2 Ag/Ab Combo Alere HIV Combo (не зарегистрирован) © ЗАО «Биоград» , 2014 г.

Immuno. Comb II HIV 1&2 Tri. Spot Ag-Ab: сероконверсия Порядок точек: 1) 2) 3) 4) контрольная антиген p 24 антитела к ВИЧ-2 антитела к ВИЧ-1 0 7 9 14 19 21 26 Дней с первого образца панели © ЗАО «Биоград» , 2015 г.

Иммуно. Комб II ВИЧ 1+2 Комб. Фирм Immuno. Comb® II HIV 1&2 Comb. Firm Наименование Immuno. Comb® II HIV 1&2 Comb. Firm рекомбинантный иммуноблот Определяемые антитела: к Env к Gag к Pol к Env ВИЧ 1 ВИЧ 2 gp 120, p 24 p 31 gp 36 gp 41 gp 120 gp 41 • Время анализа – 1 час • Не требует разведения реагентов (реагенты готовы к применению) gp 36 Внутренний контроль p 24 p 31 © ЗАО «Биоград» , 2011 г. 18

• Тест Иммуно. Комб. Фирм разрешен для подтверждения наличия антител к ВИЧ (приказ МЗ РФ № 292 от 30. 07. 2001). • Результаты мультицентровых испытаний (Израиль, Франция, Бельгия, Бразилия, Сенегал) * - включая 15 положительных по ВИЧ-1 группы О Без учета неопределенных: чувствительность 100%, © ЗАО 100% специфичность «Биоград» , 2011 г. 19

Иммуноферментные бесприборные тест-системы • Иммуно. Комб II HIV 1&2 Bispot – скрининговый, 36 мин • Полноценный ИФА за 36 минут • Иммуно. Комб II HIV 1&2 Tri. Spot Ag-Ab – АГ-АТ, 84 мин • ИФА четвертого поколения (антиген-антитело) • Дифференцированный результат по антителам и антигену p 24 • Иммуно. Комб II HIV 1&2 Comb. Firm – подтверждающий (иммуноблот), 66 мин • Рекомбинантный иммуноблот (подтверждающий тест) • Определяет антитела к 5 различным антигенам ВИЧ (Для каждого анализа используется по 2 зубца) © ЗАО «Биоград» , 2015 г.

Иммунохроматографические: Alere Determine HIV-1/2 Ag/Ab Combo Контр. p 24 Aг Ат 43 47 50 54 57 61 64 70 72 Дней с первого образца панели © ЗАО «Биоград» , 2015 г. 77

Иммунохроматографические: Alere HIV Combo © ЗАО «Биоград» , 2015 г.

Иммунохроматографические: Alere HIV Combo © ЗАО «Биоград» , 2015 г.

Alere Determine HIV-1/2 Ag/Ab Combo - исследования Тест Alere Determine HIV-1/2 Ag/Ab Combo прошел преквалификацию ВОЗ в 2012 году. Отчет об испытаниях теста и инспекциях производственных мощностей опубликован на сайте ВОЗ. В том числе в отчете было отмечено, что данный тест правильно определял все образцы первой Международной Референс Панели (код NIBSC 02/210), включая все протестированные субтипы ВИЧ -1 (А, B, C, CRF 01 AE) ВИЧ 1 группы О и ВИЧ-2. Стандартный образец антигена p 24 (код NIBSC 90/636) Alere Determine HIV-1/2 Ag/Ab Combo определял в разбавлениях до 1: 320, что соответствует 3, 125 МЕ. При этом референс-тест Vironostika HIV Ag/Ab (bio. Mérieux) определял данный образец в концентрациях только до 12, 5 МЕ. © ЗАО «Биоград» , 2015 г.

Alere Determine HIV-1/2 Ag/Ab Combo – исследования (1) Evaluation of a 4 th generation rapid HIV test for earlier and reliable detection of HIV infection in pregnancy. J Clin Virol. 2012 Jun; 54(2): 180 -4. doi: 10. 1016/j. jcv. 2012. 021. Epub 2012 Mar 22. Chetty V, Moodley D, Chuturgoon A. Womens Health and HIV Research Unit, Department of Obstetrics and Gynaecology, Nelson R Mandela School of Medicine, University of Kwa. Zulu-Natal, South Africa (ЮАР) © ЗАО «Биоград» , 2015 г.

Чувствительность при определении острой фазы ВИЧ-инфекции (1) Обследовано 32 образца от беременных женщин, у которых была определена сероконверсия при последующих визитах. В 18 из образцов определялась вирусная нагрузка. Тест Determine HIV-1/2 Ag/Ab Combo выявил 16 из 18 образцов, в которых выявлялась вирусная нагрузка, чувствительность – 88, 9%, общая чувствительность на всех 32 образцах – 59, 4%. В целом по исследованию (включая 32 образца с подозрением на острую ВИЧ-инфекцию и 189 образцов с установленной ВИЧ-инфекцией) Determine HIV-1/2 Ag/Ab Combo определил 94% образцов с ВИЧ-инфекцией, в то время как тесты 3 -го поколения – 85%. © ЗАО «Биоград» , 2015 г.

Alere Determine HIV-1/2 Ag/Ab Combo – исследования (2) Rapid HIV screening: missed opportunities for HIV diagnosis and prevention. Patel P, Bennett B, Sullivan T, Parker MM, Heffelfinger JD, Sullivan PS; CDC AHI Study Group J Clin Virol. 2012 May; 54(1): 42 -7. doi: 10. 1016/j. jcv. 2012. 01. 022. Epub 2012 Feb 29 Отдел по борьбе с ВИЧ/СПИД CDCP, Атланта, США Из 99111 обследованных образцов (общая популяция) выявлено 62 с острой ВИЧинфекцией, обследованы 62 на тестах третьего поколения и 34 на тестах 4 поколения © ЗАО «Биоград» , 2014 г.

Чувствительность при определении острой ВИЧ-инфекции (2) Сравнение на образцах, положительных по результатам МАНК, но отрицательных или неопределенных в иммуноблоте. Чувствительность: Architect Antigen/Antibody Combo IA – 88% (классический тест 4 поколения) Determine HIV-1/2 Ag/Ab Combo – 76% (быстрый тест 4 поколения) Тесты третьего поколения (ИФА) – 55% Быстрые тесты (кроме 4 поколения) – 22 -33% © ЗАО «Биоград» , 2014 г.

Alere Determine HIV-1/2 Ag/Ab Combo (3) Evaluation of a rapid antigen and antibody combination test in acute HIV infection. Faraoni S, Rocchetti A, Gotta F, Ruggiero T, Orofino G, Bonora S, Ghisetti V. J Clin Virol. 2013 May; 57(1): 84 -7. doi: 10. 1016/j. jcv. 2013. 01. 007. Epub 2013 Feb 4 Лаборатория Микробиологии и Вирусологии, отделение инфекционных заболеваний, госпиталь Amedeo di Savoia, Турин, Италия. Исследовано 17 образцов от пациентов с острой ВИЧ-инфекцией © ЗАО «Биоград» , 2015 г.

Чувствительность при определении острой ВИЧ-инфекции (3) Тест Determine HIV-1/2 Ag/Ab Combo определил ВИЧ инфекцию в 15 из 17 образцов, из них в 5 образцах наблюдалась полоса антигена и в 10 образцах– полоса антител. Чувствительность составила 88, 2% © ЗАО «Биоград» , 2015 г.

Alere Determine HIV-1/2 Ag/Ab Combo (4) Performance of Rapid Point-of-Care and Laboratory Tests for Acute and Established HIV Infection in San Francisco Pilcher, CD. et al Christopher D. Pilcher 1*, Brian Louie 2, Shelley Facente 1, 3, Sheila Keating 5, John Hackett Jr 6, Ana Vallari 6, Chris Hall 7, Teri Dowling 3, Michael P. Busch 5, Jeffrey D. Klausner 1, 4, Frederick M. Hecht 1, Sally Liska 2, Mark W. Pandori 2 1 HIV/AIDS Division, University of California San Francisco, California, United States of America, 2 Public Health Laboratory, San Francisco Department of Public Health, San Francisco, California, United States of America, 3 HIV Prevention Section, San Francisco Department of Public Health, San Francisco, California, United States of America, 4 STD Prevention and Control Services Section, San Francisco Department of Public Health, San Francisco, California, United States of America, 5 Blood Systems Research Institute, San Francisco, California, United States of America, 6 Abbott Diagnostics, Abbott Park, Illinois, United States of America, 7 Magnet Community Health Center, San Francisco, California, United States of America PLo. S ONE (2013) 8(12): e 80629. doi: 10. 1371/journal. pone. 0080629 Сан-Франциско, США © ЗАО «Биоград» , 2015 г.

Alere Determine HIV-1/2 Ag/Ab Combo (4) Ретроспективное исследование 22348 образцов из групп высокого риска Сан-Франциско (МСМ, пациенты клиники ЗППП, лица запросившие пост-контактную профилактику, половые партнеры лиц, у которых был выявлен ВИЧ), исследованных в 2003 -2008 году при помощи антительных тестов с повторным исследованием пулированных отрицательных образцов на РНК ВИЧ. Все образцы с отрицательным результатом антительного теста, но с наличием РНК или различающимися результатами тестов были сохранены для последующего исследования. © ЗАО «Биоград» , 2014 г.

Alere Determine HIV-1/2 Ag/Ab Combo (4) Исходное исследование: © ЗАО «Биоград» , 2015 г.

Alere Determine HIV-1/2 Ag/Ab Combo (4) Исследование проводилось среди групп высокого риска, процент случаев обнаружения ВИЧ-инфекции в острой фазе при помощи Alere Determine HIV-1/2 Ag/Ab Combo был значительно выше (от 3 до 5 раз), чем при исследовании общей популяции в публикации Patel P et al (2): © ЗАО «Биоград» , 2014 г.

Alere Determine HIV-1/2 Ag/Ab Combo (4) Исследование образцов острой фазы ВИЧ-инфекции: © ЗАО «Биоград» , 2014 г.

Alere Determine HIV-1/2 Ag/Ab Combo Дополнительная информация по исследованиям и применению тест-систем Determine и Determine Combo на сайте (английский язык): http: //www. alerehiv. com © ЗАО «Биоград» , 2014 г.

Постановление Правительства № 102 от 05. 02. 2015 Установить, что для целей осуществления закупок отдельных видов медицинских изделий, включенных в перечень, заказчик отклоняет все заявки, содержащие предложения о поставке медицинских изделий, происходящих из иностранных государств, за исключением Республики Армения, Республики Белоруссия и Республики Казахстан, при условии, что на участие в определении поставщика подано не менее 2 удовлетворяющих требованиям документации о закупке заявок, которые одновременно: • содержат предложения о поставке одного или нескольких видов медицинских изделий, включенных в перечень, страной происхождения которых является Российская Федерация, Республика Армения, Республика Белоруссия или Республика Казахстан; • не содержат предложений о поставке одного и того же вида медицинского изделия одного производителя. © ЗАО «Биоград» , 2015 г.

Постановление Правительства № 102 от 05. 02. 2015 В прилагаемом к постановлению перечне нет иммунохроматографических тестов на инфекционные заболевания, соответственно на них действие постановления не распространяется. © ЗАО «Биоград» , 2015 г.

Спасибо за внимание ЗАО «Биоград» Адрес: 197101, г. Санкт-Петербург, Петровский пр. , д. 14, 19 -Н тел. /факс: (812) 325 21 71, 325 21 70 (многоканальные) http: //www. biograd. ru [email protected] ru © ЗАО «Биоград» , 2015 г. 39