Средства специфической профилактики терапии и диагностики инфекционных болезней

Средства специфической профилактики, терапии и диагностики инфекционных болезней

Вакцины

n n Вакцина представляет собой биологический препарат, приготовленный из возбудителей инфекции, лишенных патогенных свойств, но сохранивших иммунногенные свойства. Введение в организм вакцины ведет к активации факторов иммунитета, в том числе и к образованию антител против того возбудителя, из которого приготовлена вакцина. Вакцина – это биопрепарат, предназначенный для создания искусственного активного иммунитета.

Различают: n n n инактивирован ные вакцины, живые вакцины, генно инженерные вакцины.

Инактивированные вакцины В состав практически всех инактивированных вакцин входят адьюванты. Адьюванты (от англ. adjivant – помогающий) – вещества антигенной и неантигенной природы, различные по химическому составу, которые при совместном с антигеном введении в организм вызывают неспецифическое стимулирование иммуногенеза. Наиболее используемые: минеральный гель, алюмокалиевые квасцы, безводный ланолин.

Вакцины инактивированные корпускулярные Содержат цельные инактивированные микробные клетки. n Получение: 1. В зависимости от антигенной гетерогенности конкретного возбудителя в состав вакцины включают штаммы одного или нескольких сероваров. Используют штаммы бактерий без признаков диссоциации. Бактериальную массу чаще получают путем выращивания вакцинных штаммов в жидких питательных средах в ферментерах. n

2. Бактериальные клетки инактивируют физическими или химическими методами. 3. Устанавливают необходимую концентрацию микробных клеток в 1 мл суспензии. 4. Добавляют адьювант. 5. Препарат расфасовывают и контролируют.

Физические методы инактивации: n Прогревание при 55 60°C n Ультразвук n Ультрафиолетовое облучение n Ионизирующее излучение Химические методы инактивации: n Формалин n Глутаровый альдегид n Бета пропиолактон n Кристаллвиолет n Метиленовый синий и тд.

К любому методу инактивации микроорганизмов предъявляют два основных требования: 1) полная инактивация клеток возбудителя; 2) отсутствие существенных нарушений в антигенных и иммуногенных свойствах возбудителя.

Химические вакцины n n n В качестве иммуногенного начала содержат извлеченные тем или иным способом из микробной клетки различные химические соединения. К преимуществу химических вакцин относят возможность отделить иммуногенный компонент от балластных веществ клетки, что позволяет снизить реактогенность препарата. В принципе к химически вакцинам можно отнести и анатоксинвакцины.

Анатоксивакцины Содержат в качестве иммуногенного начала инактивированный формалином экзотоксин бактерий – анатоксин. n Получение: 1. Токсинообразующий штамм возбудителя культивируют в жидкой питательной среде в условиях, обеспечивающих максимальное накопление токсина в культуральной жидкости. 2. Культуральную жидкость отделяют от бактериальной массы. 3. Экзотоксин переводят в состояние анатоксина воздействием формалина в тепле. n

Анавакцины n При производстве анавакцин микробную массу и токсин не разделяют, готовый препарат содержит инактивированные микробные клети и анатоксин.

Живые вакцины – искусственно ослабленные или природные авирулентные (слабовирулентные) штаммы возбудителя, которые утратили способность вызывать у естественно восприимчивых животных болезнь, но могут в течение определенного промежутка времени размножаться в организме вакцинированного животного, вызывая иммунный ответ.

Основные требования к вакцинным штаммам. n n n Отсутствие склонности к реверсии (возвращению в исходное вирулетное состояние). Неконтагиозность (возбудитель вакцинного штамма не должен передаваться от вакцинированного животного к невакцинированному). Желательно, чтобы вакцинный штамм нес стабильный маркер, отличающий его от эпизоотических штаммов возбудителя.

Генно инженерные вакцины n n Получают путем введения в геном какого либо безвредного микроорганизма определенного гена или группы генов возбудителя болезни. Например, генов, контролирующих синтез протективного антигена, что обеспечивает иммуногенность рекомбинантного штамма. В качестве передатчика генов (вектора) обычно используют плазмиды или фаги.

Контроль вакцин

Проводят по трем основным параметрам. 1. Стерильность (инактивированные) или чистота роста (живые). Контролируют посевом на питательные среды. 2. Безвредность. Проверяют введением вакцины тем или иным лабораторным животным. Вакцина не должна вызывать заболевание и гибель животных.

3. Специфическая активность (иммуногенность). Контролируют следующим образом: вакцину вводят группе лабораторных животных и через промежуток времени, достаточный для выработки активного иммунитета (15 20 суток), животных этой группы вместе с контрольными непривитыми заражают заведомо летальной дозой возбудителя. Контрольные животные должны погибнуть, 80% и более вакцинированных должны выжить. В некоторых случаях об иммуногенности препарата судят по косвенным показателям: количеству агглютининов у привитых животных (лептоспирозная вакцина), антитоксинов в РН (вакцина против ботулизма).

Лечебно профилактические иммунные сыворотки и иммуноглобулины

n n Данные биопрепараты применяют для создания искусственного пассивного иммунитета. Пассивный иммунитет возникает через 20 24 ч после инъекции препарата и длится максимум 2 3 недели. Иммунные сыворотки получают путем многократного введения антигена животным продуцентам (волам, лошадям и т. д). При достижении необходимого уровня антител у животного берут кровь, сепарируют ее для получения сыворотки, которую стерилизуют фильтрованием и консервируют 0, 25. . . 0, 5% фенола, 0, 01 0, 3% тиомерсала или другими веществами.

По направленности действия иммунные сыворотки подразделяют на: n n n антибактериальные, антитоксические, антивирусные.

Контроль сывороточных препаратов. Проводят по трем основным параметрам. 1. Стерильность препаратов проверяют посевом на питательные среды (МПА, МПБ, МППБ, агар Сабуро или Чапека). 2. Безвредность каждой серии контролируют введением сыворотки лабораторным животным.

3. Определение превентивных (защитных) свойств сыворотки на естественно восприимчивых или лабораторных животных заключается в том, что животным вводят сыворотку (п/к, в/м или в/б), а через 20 24 ч иммунизированных и контрольных животных заражают летальной дозой гомологичного вирулентного микроорганизма. Иммунизированные животные должны остаться здоровыми при гибели или характерном переболевании контрольных.

Активность антитоксических и ряда противовирусных сывороток определяют в реакциях нейтрализаци. Количество антител в сыворотках устанавливают при помощи различных серологических реакций (РСК, РА, РНГА, РДП и т. д. )

Диагностические иммунные сыворотки и глобулины

n n Принцип получения диагностических иммунных сывороток такой же, как и лечебно профилактических, но диагностические сыворотки должны характеризоваться не только активностью в серологических реакциях, но и высокой специфичностью. С помощью диагностических сывороток обнаруживают микробные антигены в тканевых материалах и идентифицируют выделенные микроорганизмы.

Различают: n n n видовые сыворотки (предназначенные для идентификации микроорганизмов на уровне вида), групповые (идентификация на уровне серологической группы), серовариантные (на уровне серовара).

n n n Иммунные сыворотки используют в различных серологических реакциях (РА, РП, РСК, РИГА, РН, ИФА). При получении антител меченых флуорохромом и ферментами из иммунных сывороток предварительно выделяют и очищают иммуноглобулиновую фракцию. Диагностические сыворотки контролируют на стерильность, активность и специфичность.

Моноклональные антитела n n Представляют собой иммуноглобулины, продуцируемые одним клоном плазматических клеток и реагирующие с определенным антигенным эпитопом микроорганизма. Применяют для того, чтобы избежать нежелательных перекрестных реакций между сероварами одного вида или между различными видами микроорганизмов за счет общих антигеннах детерминант при использовании иммунных поликлональных диагностических сывороток.

n n Чтобы получить моноклональные антитела, изолируют и поддерживают линию лимфоцитов, синтезирующих антитела определенной специфической направленности. Клетки продуценты антител не способны расти in vitro. Злокачественная опухоль (миелома) синтезирует в больших количествах ано мальные иммуноглобулины и способна к неограниченному росту in vitro. Разработана методика слияния клеток миеломы с лимфоцитами, при этом гибридная клетка (гибридома), как и опухолевая, способна к неограниченному росту и одновременно синтезирует антитела, как лимфоидная.

Получение моноклональных антител. Включает в себя несколько этапов. 1. Известным антигеном иммунизируют животных. Затем из селезенки выделяют В лимфоциты. 2. Проводят слияние (гибридизацию) В лимфоцитов и миеломных кле ток. Получают смесь лимфоцитов гибридных и миеломных клеток. 3. Смесь клеток культивируют в среде, содержащей ГАТ (гипоксантин аминоптерин тимидин), что приводит к гибели лимфоцитов и миеломных клеток, так как на указанной среде могут расти только гибридомы.

4. Гибридомные клетки рассевают (клонируют) таким образом, чтобы в лунке панели для микрокультивирования оказалась только одна клетка, дающая начало клону. После размножения клеток оценивают их способ ность синтезировать нужные антитела (проводят скрининг). Клонирова ние повторяют. В конечном итоге выбирают стабильный клон, продуци рующий антитела заданной специфичности. Моноклональные антитела выделяют либо из культуральной жидкости (клетки гибридомы выращивают in vitro) либо из асцитической (выращивание гибридомы in vivo).

Моноклональные антитела используют для диагностики инфекционных болезней в иммуноферментном, радиоиммунном и иммунофлуоресцентном анализах.

Диагностические антигены

n n Предназначены для серодиагностики инфекционных болезней животных. Технология приготовления антигенов разнообразна, но основой для антигенов любого типа служат исходные селекционированные, без признаков диссоциации штаммы микроорганизмов.

В зависимости от типа серологической реакции антигены могут быть: n корпускулярными (РА, РСК), n на носителях (эритроцитарные антигенные диагностикумы для РНГА, антигены на частицах латекса и т. д. ), n растворимые (РП, РДП).

Контроль диагностических антигенов. Проводят по следующим параметрам. n n Контроль стерильности. Антиген для серологических реакций должен находиться в определенной оптимальной концентрации, выраженной, например, количеством микробных клеток в 1 мл. Активность антигена определяют в той или иной серологической ре акции с заведомо положительной сывороткой.

n Специфичность антигена испытывают в серологической реакции с заведомо отрицательной сывороткой. Корпускулярные антигены для серологических реакций осадочного типа контролируют на спонтанную агглютинацию – выпадение в осадок в отсутствии антител.

Диагностические аллергены

n n n Данные биопрепараты (бруцеллин, туберкулин, маллеин) представляют собой экстракты из клеток возбудителя. В основе аллергических диагностических тестов лежит специфическая реакция иммунного воспаления на месте инъекции (аппликации) аллергена. Диагностические аллергены контролируют на стерильность, бузвредность и специфичность.