Слайд 1 Отчет о работе 13 11 14

Слайд 1 Отчет о работе 13. 11. 14 Капранов Н. М.

Цель работы Слайд 2 Исследование различных образцов биологических жидкостей/тканей у пациентов с подозрением на Т-ЛПЗ и демонстрация “необходимости” клеточного биочипа для диагностики данных заболеваний. Классификация T-клеточных и NK клеточных новообразований (ВОЗ 2001) T-клеточные опухоли из Зрелые T- и NK- клеточные клеток предшественников новообразования * T-клеточный лейкоз/лимфома *Т-клеточный пролимфоцитарный лейкоз из клеток предшественников *Т-клеточный лейкоз из больших гран. клеток * Бластная NK-клеточная *Агрессивный NK-клеточный лейкоз лимфома *Т-клеточный лейкоз/лимфома взрослых *Экстранодальная NK/T клеточная лимфома, назальный тип *T-клеточная лимфома с энтеропатией *Гепатолиенальная T-клеточная лимфома *Подкожная, панникулитоподобная Tклеточная лимфома *Грибковидный микоз *Синдром Сезари *Первичная кожная анапластическая лимфома *Ангиоиммунобластная T-клеточная лимфома *Перефирическая Т-клеточная лимфома, неспрецифированная *анапластическая крупноклеточная лимфома Пролиферативные Tклеточные заболевания неясного злокачественного характера *лимфоматоидный папулез

Слайд 3 Пациент КАН Лейкопения – в крови лейкоцитов 1, 5* 109 кл/л. 53, 5 45, 0 Исследуемый образец: Костный мозг 31, 5 CD 3+ != CD 4+ + CD 8+. Коэкспрессия CD 4+ /CD 8+ 23%.

Слайд 4 Пациент КАН Морфологическая картина Т-клеток CD 3 Х 100 У крупных клеток ядра с “вмятинками” Крупные клетки, встречаются на CD 2, CD 3, CD 4, CD 8 На CD 2 27% На CD 3 21% На CD 4 45% На CD 8 60% Морфологическая картина B-клеток CD 19 20% B-клеток - плазматические Х 100

Пациент КАН Слайд 5 Исследуемый образец: Кровь WBC 1, 1* 109 кл/л. Был изготовлен клеточный биочип, на котором было нанесено только антитело CD 3+. Данный чип инкубировался с суспензией мононуклеаров, и был передан для ПЦР анализа на клональность CD 3+ T-клеток. В выделенных клетках был обнаружен клон по ɣ-цепи.

Слайд 6 Пациент ПВА Ангиоиммунобластная T-клеточная лимфома. По результатам ИГХ опухолевые клетки имеют иммунофенотип CD 3+, CD 4+. Пролиферативная активность выявляется у 10 -20% клеток. Исследуемый материал: костный мозг Низкая клеточность суспензии. CD 2 CD 3 x 100 ПВА CD 3 x 100

Пациент ПВА Исследуемый материал: кровь; WBC 3, 7*109 кл/л Слайд 7 CD 2: гран -53%, большие 35%, малые 65%. CD 3: гран -23%, большие 15%, малые 85%. CD 4: большие 50%, малые 50%. CD 8: гран -23%, большие 30%, малые 50%. С цитометрией расхождения по CD 19, у нас норма – на цитометре – сильное снижение – 3, 1% CD 19+ клеток; c NK-клетками наоборот (CD 16, 56+ - 36, 6%). По цитометру – ничего не нашли за ЛПЗ.

Слайд 8 Пациент ПВА Исследуемый материал: кровь; WBC 3, 7*109 кл/л Т-клетки B-клетки CD 3 CD 19 x 100 CD 2: гран. -53%, большие 35%, малые 65%. CD 3: гран. -23%, большие 15%, малые 85%. CD 4: большие 50%, малые 50%. CD 8: гран. -23%, большие 30%, малые 70%. CD 5: большие 35%, малые 65%, гран. - 45%. CD 7: большие 45%, малые 55%.

Пациент ПВА Слайд 9 Если научимся смотреть Ki-67, то сможем узнать на каком CD пролиферирующие клетки. Есть значительные (необъяснимые) отличия от результатов цитометрии по маркерам CD 19 и CD 56. Опухоль составляют большие клетки без гранул?

Пациент АЕЮ Слайд 10 Исследуемый материал: костный мозг Из истории болезни: Есть популяция T-клеток с иммунофенотипом CD 3+/CD 5 -/CD 7+/TCR αβ -/TCRγδЗаключение- хронический T-клеточный лимфолейкоз из больших гранулярных клеток, диагноз ставится по клональности (клон TCR по ɣ-цепи).

Слайд 11 Пациент АЕЮ CD 2 Гранулярные клетки крупного размера с широкой цитоплазмой и менее зрелым хроматином. CD 2 - 55% CD 3 -19% CD 4 - 5% CD 8 – 50% x 100 CD 19 x 100 Клетки крупные, незрелые, вакуолизированные

Слайд 12 Пациент АЕЮ CD 16 CD 2 x 100 CD 19 Исследуемый материал: кровь, WBC 4, 2*109 кл/л. Использовался чип для практикума. На CD 45 больших гранулярных клеток 60% x 100

Пациент ГКЮ Иммунофенотип по цитометру – CD 2+/CD 3 -/CD 5 -/CD 7 -/CD 16+/CD 43+/CD 56 -/CD 57 - Диагноз – NK лейкоз/лимфома из больших гранулярных клеток Слайд 13

Слайд 14 Пациент ГКЮ CD 2 x 100 Больших гранулярных клеток на CD 45 60%, на CD 2 – 75%, а на CD 3 – 10%. На CD 3 присутствуют большие лимфоциты – скорее всего реактивные клетки. CD 3 x 100 Вывод: данный диагноз можно ставить и с помощью чипа, к тому же возможна диф. Диагностика между NK и T клеточной лимфомой/лейкозом из больших гранулярных клеток.

Выводы Слайд 15 Чип может быть полезен для диагностики: 1) Прямое назначение- иммунофенотип+морфология; 2) Если диагноз не ставится по этим данным – можем дать рекомендацию по дальнейшему исследованию – скорее всего направление на изучение T-клеточной клональности; 3) Можно делать чип с одним CD 3 и отдавать на ПЦР – узнаем о наличии или отсутствии клона по той или иной цепи TCR. Если есть один клон – ставится диагноз, если несколько – то можно использовать чип как сортер клеток: изготовить чипы с антителами CD 1, CD 2, …CD 8 и отдать на ПЦР анализ. Тогда будет установлен иммунофенотип каждого из присутствующих клонов; 4) Имеет смысл анализ пролиферативной активности, с помощью изучения внутреядерно Ki-67. Это актуально как для крови и костного мозга, так и для тканей, где наличие пролиферирующих клеток является важным диагностическим критерием. Для пат. анатомии это стандартный анализ, но мы будем знать еще и фенотип пролиферирующих клеток.

Спасибо за внимание!

Кажаев КМ

Кажаев КМ CD 2 CD 19 Плазматических клеток 28%

Кажаев Т-клетки 20% крупных ЛУ