Санкт-Петербургский государственный университет Биолого-почвенный

Санкт-Петербургский государственный университет Биолого-почвенный факультет Кафедра цитологии и гистологии Горчакова Маргарита Валерьевна Мембранные рецепторы мелатонина на лимфоцитах человека при остром панкреатите Санкт-Петербург, 2009 г.

Работа выполнена • на базе лаборатории клинической иммунологии и молекулярной диагностики ЦКДЛ ЦЛД • в сотрудничестве с кафедрой и клиникой общей хирургии СПб. ГМУ им. акад. И. П. Павлова Научный руководитель: д. м. н. , проф. Е. Е. Зуева

Мелатонин • медиатор циркадных ритмов • противодействует активным радикалам кислорода • участвует в контроле пролиферации и дифференцировки • влияет на сокращение http: //subscribe. ru/archive/science. health. gerontology/200704/12191306. html сосудов • изменяет продукцию цитокинов и антител

Рецепторы мелатонина • Ядерные рецепторы - семейство орфановых рецеторов RZR/ROR • Мембранные рецепторы – двух типов МТ 1 и МТ 2 • Оба типа рецепторов присутствуют на лимфоцитах человека

Острый панкреатит Билиарный Желчекаменная болезнь ОП Токсикогенный Алкоголь • Заболеваемость достигает 80 человек на 100 000 населения • Высокая летальность при развитии деструктивных форм и инфекционных осложнениях (от 8 до 24%) • Непредсказуемая вариабельность тяжести течения • Причина неоднородности в индивидуальных противовоспалительных ресурсах организма

Количество рецепторов МТ 1 и МТ 2 может быть связано с различными исходами острого панкреатита при одинаковых начальных проявлениях Цель исследования Оценить прогноз тяжести течения острого панкреатита в зависимости от распределения мембранных рецепторов 1 и 2 типа к мелатонину на лимфоцитах

Задачи 1. Оценить особенности экспрессии рецепторов мелатонина на лимфоцитах близкородственных лабораторных крыс 2. Оценить присутствие рецепторов МТ 1 и МТ 2 на лимфоцитах здоровых людей 3. Оценить присутствие рецепторов МТ 1 и МТ 2 на лимфоцитах при остром панкреатите 4. Оценить присутствие рецепторов МТ 1 и МТ 2 на лимфоцитах при остром панкреатите в зависимости от тяжести течения заболевания

Материалы • В исследование включены данные по 12 лабораторным крысам и по 70 пациентам СПб. ГМУ (мужчины, медиана возраста 43, 3 года) Здоровые Пациенты, ранее перенесшие острый добровольцы панкреатит легкого течения тяжелого течения n=29 n=20 n=21 • Материал – фракция мононуклеаров периферической крови (забор 9. 00 -11. 00 утра), выделенная при градиентном центрифугировании

Методы • Использован метод непрямой иммунофлюоресценции первичные антитела к МТ- рецепторам вторичные антитела goat anti -rabbit FITC (BD, Germany) • Сбор данных проведен на проточном цитометре Cytomics FC 500 ( Beckman Лимфоциты, несущие Coulter, USA) рецептор MT 1

Результаты % Лабораторные крысы 100 90 80 МТ 1(%) МТ 2 (%) МТ 2/МТ 1 70 60 50 76, 5± 0, 4 80, 0± 0, 4 1, 05± 0, 01 40 30 % 20 10 t=5, 87; p<0, 001 0 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 Крысы МТ 1 % 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 Крысы МТ 2 Здесь и далее:

Результаты Контрольная группа Основная группа % % 100. 0 100. 0 90. 0 80. 0 70. 0 r<0, 17; 80. 0 r<0, 12; 60. 0 50. 0 p>0, 05 60. 0 p>0, 05 40. 0 40. 0 30. 0 20. 0 20. 0 10. 0 0. 0 20 25 30 35 40 45 50 55 60 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 % Возраст % Возраст МТ 1 100. 0 100. 0 90. 0 90. 0 80. 0 80. 0 70. 0 60. 0 r<0, 17; 70. 0 60. 0 r<0, 12; 50. 0 50. 0 40. 0 30. 0 p>0, 05 40. 0 p>0, 05 30. 0 20. 0 20. 0 10. 0 0. 0 20 25 30 35 40 45 50 55 60 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 % Возраст МТ 2 МТ 2 1. 40 2. 00 1. 80 1. 20 1. 60 1. 00 0. 80 r=0, 3; 1. 40 1. 20 r<0, 03; 1. 00 0. 60 p>0, 05 0. 80 0. 60 p>0, 05 0. 40 0. 40 0. 20 0. 20 0. 00 0. 00 20 25 30 35 40 45 50 55 60 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 МТ 2/МТ 1 Возраст МТ 2/МТ 1 Возраст

Результаты Контрольная группа Основная группа МТ 1(%) МТ 2 (%) МТ 2/МТ 1 МТ 1(%) МТ 2/МТ 1 56, 4± 2, 0 59, 2± 2, 1 1, 05± 0, 01 53, 9± 3, 0 49, 9± 3, 2 0, 95± 0, 04 % 69 64 59 ** 54 49 t=0, 95; p>0, 05 t=0, 92; p>0, 2 44 контрольная основная группа группа Здесь и далее: МТ 1 t=0, 6; t=2, 2; МТ 2 p>0, 05 p<0, 05

Результаты Острый панкреатит легкого и тяжелого течения • У пациентов с легкой формой ОП показатель МТ 2/МТ 1 не отличается от контрольной группы (t=1, 44; p>0, 05) • У пациентов с тяжелым течением ОП показатель МТ 2/МТ 1 снижен ( t =7, 35; p<0, 001) t=3, 59; p<0, 005 Форма ОП МТ 1 (%) МТ 2 (%) МТ 2/МТ 1 ОП легкого течения 53, 8± 4, 8 56, 6± 4, 3 1, 12± 0, 05 ОП тяжелого течения 54, 0± 3, 8 43, 4± 4, 3 0, 79± 0, 04 Контрольная группа 56, 4± 2, 0 59, 2± 2, 1 1, 05± 0, 01

Результаты % Тяжесть течения острого панкреатита 100. 0 90. 0 80. 0 70. 0 60. 0 rs=0, 16; rs=0, 67; 50. 0 40. 0 p>0, 05 % p<0, 05 30. 0 20. 0 2. 00 10. 0 1. 80 0. 0 1. 60 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 1. 40 1. 20 % Балл по шкале SAPS МТ 1 1. 00 100. 0 0. 80 90. 0 0. 60 80. 0 0. 40 70. 0 60. 0 rs=0, 43; 0. 20 0. 00 50. 0 40. 0 p<0, 05 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 Балл по шкале SAPS 30. 0 МТ 2/МТ 1 20. 0 10. 0 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 Балл по шкале SAPS МТ 2 Значение коэффициента Исследуемые корреляции Тяжесть поражения с МТ 2 rs=0, 43; p<0, 05 Тяжесть поражения с МТ 2/МТ 1 rs=0, 67; p<0, 05

Выводы • У здоровых лабораторных крыс преобладают лимфоциты с рецепторами МТ 2. Минимальная вариабельность значений относительного количества лимфоцитов, несущих МТ-рецепторы, подтверждает, что экспрессия маркеров МТ 1 и МТ 2 является генетически детерминированным признаком. • У условно здоровых мужчин преобладают лимфоциты с рецепторами МТ 2. • В группе пациентов, перенесших острый панкреатит различной степени тяжести, количество лимфоцитов, экспрессирующих МТ 2, снижено по сравнению с контрольной группой. • Снижение экспрессии МТ 2 и смещение равновесия между МТ 1 и МТ 2 в сторону рецепторов первого типа достоверно связано с тяжестью течения острого панкреатита и не коррелирует с возрастом пациентов.

Спасибо за внимание!