Российский государственный аграрный университет – МСХА имени К. А. Тимирязева М. Ю. Чередниченко
Организмы Бактерии Дрожжи Нематода Человек Размер генома, млн. п. н. 0. 5 -5 12 97 3000 Число генов, Плотность, тыс. п. н. /ген 0. 47 -4. 29 6 19 80 -100 1 -1. 7 2 5 >30
*Navicola pelliculosa (диатомовая водор. ) * 35, 000 * *Drosophila melanogaster (плодовая муха) * 180, 000 * *Paramecium aurelia (инфузория) * 190, 000 * *Gallus domesticus (цыпленок) * 1, 200, 000 * *Erysiphe cichoracearum (гриб) * 1, 500, 000 * *Cyprinus carpio (карп) * 1, 700, 000 * *Lampreta planeri (минога) * 1, 900, 000 * *Boa constrictor (удав) * 2, 100, 000 * *Parascaris equorum (круглый червь) * 2, 500, 000 * *Carcarias obscurus (акула) * 2, 700, 000 * *Rattus norvegicus (крыса) * 2, 900, 000 * *Xenopus laevis (шпорцевая лягушка) * 3, 100, 000 *
*Homo sapiens (человек) * 3, 400, 000 * *Nicotiana tabacum (табак) * 3, 800, 000 * *Paramecium caudatum (инфузория) * 8, 600, 000 * *Schistocerca gregaria (саранча) * 9, 300, 000 * *Allium cepa (лук) * 18, 000 * *Coscinodiscus asteromphalus (диатом. вод. )* 25, 000 * *Lilium formosanum (лилия) * 36, 000 * *Pinus resinosa (сосна) * 68, 000 * *Amphiuma means (тритон) * 84, 000 * *Ophioglossum petiolatum (папоротник) * 160, 000 * *Amoeba proteus (амеба) * 290, 000 * *Amoeba dubia (амеба) * 670, 000
1. 2. Ферменты генетической инженерии
ДНК-полимеразы
ДНК-лигаза
Нуклеазы
Рестриктазы
1. 3. Разделение фрагментов ДНК и построение рестрикционных карт (физическое картирование)
Электрофорез в агарозном геле
Секвенирование
1. 4. Конструирование рекомбинантных ДНК
Конструирование рекомбинантных ДНК
Векторы: - для клонирования - экспрессионные - для трансформации
Плазмиды (7 -8 kb)
Фаг лямбда (9 -21 kb)
BAC (bacterial artificial chromosome) (100 -300 kb)
YAC (yeast artificial chromosome) (> 100 kb)
Требования к векторной молекуле:
Геномная библиотека (банк генов) представляет собой клонированный в составе векторов полный набор последовательностей ДНК данного организма.
1. 5. Идентификация и выделение последовательностей генов
Блот-гибридизация по Саузерну (Southern-blot)