РИФ - прямая • К исследуемому препарату (например срезам тканей), содержащему искомый АГ добавляют антисыворотку с АТ к этому АГ. • Предварительно АТ метят флюорохромом. • В результате взаимодействия АГ и АТ образуется иммунный комплекс, который фиксируется только в тех участках ткани, где имеется данный антиген. • Эти участки легко обнаруживаются при микроскопии в ультрафиолетовом свете по характерному свечению — флюоресценции.
РИФ образуется иммунный комплекс прямая К исследуемому препарату, содержащему искомый АГ добавляют антисыворотку с АТ к этому АГ. Предварительно АТ метят флюорохромом.
Непрямая РИФ • На срезы тканей, содержащих известные АГ добавляют исследуемую сыворотку. • Если в ней содержатся АТ(иммуноглобулины) к данному тканевому АГ, происходит связывание этих АТ с АГ • Не связавшиеся белки тщательно отмывают и на срезы тканей наносят противочеловеческую Ig. G-антисыворотку, меченную флюорохромом • В результате АТ с флюорохромной меткой против человеческих иммуноглобулинов, содержащиеся в антисыворотке (АТ к АТ-иммуноглобулинам класса G), связываются только с иммуноглобулинами (АТ), которые присутствовали в исследуемой сыворотке больного и остались фиксированными на соответствующих (известных) АГ ткани. • Люминесценция этих фиксированных АИ хорошо выявляется при микроскопии ткани в ультрафиолетовом свете.
Исследуемая сыв-ка Образование комплекса АГ-АТ АТ Известные АГ Схема метода непрямой иммунофлюоресценции. а - нанесение исследуемой сыворотки на срезы тканей с известным АГ, б - реакция связывания АТ антигеном, в - внесение стандартной антисыворотки, содержащей антитела к иммуноглобулинам человека, меченные флюорохромом, г - фиксация этих антител на антителах к искомому антигену