Реакция преципитации • осаждение из раствора нерастворимого комплекса АГ-АТ, образующегося в результате соединения растворимого АГ со специфическими АТ. • Реакция кольцепреципитации — модификация реакции преципитации, при которой регистрируют формирование преципитата в виде кольца на границе между растворами АГ и АТ • Асколи реакция — (A. Ascoli, 1877 1957, итал. биохимик) метод обнаружения в исследуемом материале термостабильного АГ сибиреязвенной бациллы, представляющий собой реакцию преципитации с сибиреязвенной сывороткой
Выявление АГ в реакции преципитации Схемы реакций кольцепреципитации (А) и диффузии в геле (Б).
Реакция преципитации Осаждение из раствора АГ (преципитогена) при воздействии иммунной сыворотки (преципитина) и электролита – В РП- м. обнаружить АГ в разведениях 1: 100 000 – 1: 1 000, т. е в таких малых ко-вах, которые не обнаруживаются в хим. реакциях
Определение вида АГ Обнаружение и титрование АТ Известный АГ АГ
Реакция преципитации (Асколи) Пробирка с неразведенной преципитир. сыв-кой 0, 5 -1 мл Наслаиваем такой же обьем АГ Результат: 5 -10 мин- 20 -24 ч. преципитат- кольцо
Метод двойной диффузии по Оухтерлони- на чашках Петри в лунках пластинчатого агара Исследуемые и известные АГ – в одни лунки Иммун. и нормаль. сыв-ки - в др. лунки (термостат 24 -48 -72 ч) Результат: Диффундируя в агар навстречу другу, АТ и АГ при (+) реакции образуют иммунные комплексы, визуально, обнаруживаемые в виде белых полос между лунками. Определение вида АГ 1 - антисыворотка к АГ-3; 2 - идентичный А 4, 5 - неидентичные АГ Дуга преципитации Обнаружение и титрование АТ Известный АГ АГ
разновидности реакции преципитации - метод двойной иммунодиффузии по Оухтерлоню, - метод радиальной иммунодиффузии - иммуноэлетрофорез, которые носят одновременно качественный и количественный характер. Особенностью метода является то, что каждая пара АГ-АТ формирует индивидуальную полосу преципитации, и реакция не зависит от наличия в исследуемой системе других антигенов и антител.
Реакция преципитации (Асколи) Пробирка с неразведенной преципитир. сыв-кой 0, 5 -1 мл Наслаиваем такой же обьем АГ Результат: 5 -10 мин- 20 -24 ч. преципитат- кольцо