ПРИМЕНЕНИЕ ПРОПУСКА ЭКЗОНА ДЛЯ КОРРЕКЦИИ ДУПЛИКАЦИЙ ПРИ МИОДИСТРОФИИ

ПРИМЕНЕНИЕ ПРОПУСКА ЭКЗОНА ДЛЯ КОРРЕКЦИИ ДУПЛИКАЦИЙ ПРИ МИОДИСТРОФИИ ДЮШЕННА. Кэвин М. Фленеган Центр генной терапии национальной детской больницы, Колумбус.

ДИСТРОФИНОПАТИИ. КЛИНИЧЕСКИЙ ДИАГНОЗ Миодистрофия Дюшенна Первые проявления в возрвсте 3 -5 лет Слабость мышц нижних конечностей Контрактуры КФК 50 -100 норм Потеря способности ходить в возрасте 12 лет. Миодистрофия Беккера Классические признаки: потеря способности ходить > 12 лет В качестве альтернативы: «Промежуточное мышечная дистрофия» -потеря способности ходить в возрасте от 12 до 15 лет Миодистрофия Беккера: потеря способности ходить > 15 лет Конечностно-поясные синдромы в зрелости Боли в мышцах, Изолированная кардиомиопатия

РАСПРЕДЕЛЕНИЕ МУТАЦИЙ Тип мутации Миодистроф ия Дюшенна Миодистроф ия Беккера Общее Делеция 32 менее 1 экзона 13 45(66%) Преждевремен 5 ная остановка 3 9(13%) Мисенс 1 2 3(4%) Вставка или удаление в рамке считывания 1 Дупликация менее 1 экзона 3 1 4(6%) Не обнаружено мутаций 3 2 5(7%) 2(3%)

МУТАЦИИ В ДИСТРОФИНЕ ДЮШЕННА ИЛИ БЕККЕРА Размер делеции не коррелирует с фенотипом. Делеции «в рамке считывания приведет, скорее всего, к появлению частично функционального белка.

Пропуск экзонов, прилегающих к большой делеции превращает транскрипт при МДД в транскрипт при МДБ Однако, пропуск дублированного экзона имеет потенциал, чтобы превратить транскрипт при МДД в совершенно нормальный транскрипт.

ДУПЛИКАЦИЯ ЭКЗОНА 2

ДУПЛИКАЦИЯ ЭКЗОНА 18

ДУПЛИКАЦИЯ ЭКЗОНОВ 8 -9

ПРОПУСК ДУПЛИКАЦИЙ В КЛЕТОЧНЫХ ЛИНИЯХ ПАЦИЕНТОВ

ПОЧЕМУ ИСПОЛЬЗОВАЛИ НОВУЮ МЫШИННУЮ МОДЕЛЬ? Нет животной модели для дупликации Дупликация экзона 2 составляет 10% от дупликаций В отличие от пропуска экзонов для делеций или точечных мутаций, пропуск только одной копии дуплицированого экзона будет восстановить полностью нормальную м. РНК и экспрессию дистрофина дикого типа (как показано здесь на уровне м. РНК)

ДУПЛИКАЦИЯ ЭКЗОНА 2 У ЧЕЛОВЕКА Вайт и др 2006 год исследовал максимальную степень различий дупликаций человеческого экзона 2 при помощи MLPA и ПЦР. Каждая вертикальная полоса указывает на приблизительное положение MLPA зонда. В затененных столбцах указываются два горячих региона; онибыли использованы для определения вставки экзона 2 у мышей по гомологии.

ДИСТРОФИЧЕСКИЙ ФЕНОТИП ЧЕРЕЗ 2 МЕСЯЦА

ПРОЦЕССЫ РЕГЕНЕРАЦИИ ПОСЛЕ 3 НЕДЕЛЬ

ФЕНОТИП В 6 -12 МЕСЯЦЕВ

ФЕНОТИП В ВОЗРАСТЕ 6 МЕСЯЦЕВ

ФЕНОТИП В ВОЗРАСТЕ 12 МЕСЯЦЕВ

Различия массы Различия уровня КФК

СИЛА ДЛИННОГО РАЗГИБАТЕЛЯ ПАЛЬЦЕВ

DUP 2 МЫШИ Аналогичные характеристики MDX мышам Проводятся сследования физиологии мышей Полезные платформы для развития терапии для пропуска дуплицированого экзона 2 Два подхода: Пропуск антисмысловыми олигонуклеотидами Вирусный (AAV) пропуск экзона

БУДУЩИЕ НАПРАВЛЕНИЯ Отдельные характеристики dup 2 мышей Тестирование: пропуска экзона антисмысловыми олигонуклеотидами Тестирование возможности пропустить другие дупликации в клеточных линиях пациентов Исследования зависимости дозы нашего AAVU 7 вектора Планирование исследований токсичности, которая позволит нам приступить к испытаниям на людях

ПЕРЕВЕДЕНО ПРОЕКТОМ МОЙМИО: WWW. MYMIO. ORG ОРИГИНАЛ: HTTP: //WWW. PARENTPROJECTMD. ORG/SIT E/PAGESERVER? PAGENAME= ONNECT_C C ONFERENCE