Правила по технике безопасности при работе в микробиологической лаборатории Нельзя входить в лабораторию в верхней одежде и головном уборе, не вносить посторонние вещи. Работа должна производиться в специальном чистом халате, волосы должны быть подобраны, не падать на плечи. На рабочем столе не должно быть посторонних предметов (в том числе портфелей и сумок). Нельзя оставлять без присмотра включенные горелки или спиртовки, нельзя переносить горящую спиртовку на другое место: держать вблизи спиртовки вату, марлю, спирт и другие воспламеняющиеся жидкости. Не оставлять открытыми чашки Петри, пробирки и колбы с посевами культур микроорганизмов. Запрещается набирать суспензии клеток микроорганизмов пипеткой ртом; необходимо пользоваться специальными приспособлениями, исключающими попадание микроорганизмов в рот. До и после работы необходимо тщательно мыть и дезинфицировать поверхность стола, на котором проводилась работа с микроорганизмами. Все инструменты, использованные при работе с живыми культурами, должны быть обеззаражены либо обжиганием в пламени горелки, спиртовки (петли, иглы), либо погружены в дезинфицирующий раствор (предметные и покровные стекла, пипетки, шпатели). В лаборатории необходимо поддерживать порядок и чистоту. По окончании занятий протирать иммерсионный объектив микроскопа мягкой тканью, накрывать микроскоп полиэтиленовым чехлом, приводить в порядок рабочее место, мыть руки. В лаборатории запрещается прием пищи, лишнее хождение по лаборатории. . Перед уходом из лаборатории необходимо проверять, выключены ли газ, вода, электроприборы.
МИКРОСКОП И ТЕХНИКА МИКРОСКОПИРОВАНИЯ
Цели и задачи 1. Ознакомиться с устройством светопольного микроскопа. 2. Овладеть методами работы с ним. 3. Научиться готовить препараты живых и фиксированных окрашенных клеток микроорганизмов. 4. . Овладеть техникой микроскопирования препаратов живых клеток с сухими системами объективов. 5. Овладеть техникой микроскопирования фиксированных окрашенных клеток микроорганизмов с иммерсионными объектами .
Общий вид микроскопа БИОМЕД-1
ОБЩИЙ ВИД МИКРОСКОПА БИОМЕД - 4
Микроскоп (от греческого слова micros – малый, scopeo – смотрю)
• Разрешающая способность нормального глаза человека – 0, 2 мм • Размеры наименьших частиц, видимых в современных микроскопах имеют размеры 0, 0002 мм
Микроскоп Биомед-1 состоит из Механической части и осветителя оптической части
МЕХАНИЧЕСКАЯ и ОСВЕТИТЕЛЬНАЯ ЧАСТИ • крестообразный столик с коаксиальной ручкой; • Тубусодержатель; • макрометрический и микрометрический винты; • Основание микроскопа с вмонтированной электрической лампочкой; • Боковая панель основания с выключателем осветителя и регулятором освещения препарата
• крестообразный столик с помощью коаксиальной ручки перемещает препараты в двух взаимно перпендикулярных направлениях; • Грубая фокусировка препарата осуществляется с помощью макрометрического винта; • Точная фокусировка осуществляется с помощью микрометрического винта
ПРАВИЛА РАБОТЫ С МИКРОВИНТОМ Полных оборотов микровинтом делать нельзя. Вначале необходима грубая настройка. Разрешается поворачивать микровинт в ту или иную сторону не более 2… 4 х делений (не более пол-оборота).
Оптическая часть микроскопа • конденсор системы Аббе с ирисовой диафрагмой; • объективы; • окуляры
Назначение конденсора • Конденсор (от лат. condenso - уплотняю, сгущаю) собирает лучи, идущие от источника через диафрагму, и направляет их на объект. • С помощью винта конденсора, опуская его или поднимая, регулируют степень освещения препарата.
Правила работы с конденсором • При работе с большими увеличениями микроскопа конденсор должен находиться в верхнем положении. • При работе с малыми увеличениями микроскопа конденсор опускают вниз.
Объективы • Объектив (греч. objectum – предмет исследования) многолинзовая короткофокусная система, от качества которой зависит в основном изображение объекта; • Фронтальная линза - наружная, обращенная плоской стороной к препарату, обеспечивает увеличение объектива; оно обозначено на оправе объектива. • Микроскоп БИОМЕД – 4 оснащен объективами, увеличивающими в 4, 10, 40 и 100 раз (х4, х10, х40, х100);
СУХИЕ СИСТЕМЫ ОБЪЕКТИВОВ «БИОМЕД-1» • Между фронтальной линзой и препаратом находится слой воздуха • х4 • х10 • х40
Иммерсионный объектив микроскопа «Биомед-4» • Между фронтальной линзой и препаратом – находится капля иммерсионного масла, показатель преломления которого близок к показателю преломления стекла 1, 515 и 1, 52 соответственно. • х100
Аберрации линз • Хроматическая аберрация возникает при прохождении через линзу пучка лучей различной длиной волны. Преломляясь по-разному, лучи пересекаются не в одной точке. Сине-фиолетовые лучи с короткой длиной волны преломляются сильнее, чем красные с большей длиной волны. Вследствие этого у бесцветного объекта появляется окраска. • Сферическая аберрация - связана со свойством линз неравномерно преломлять периферические и центральные луч. Первые обычно преломляются в большей степени, чем вторые, поэтому пересекаются на более близком расстоянии к линзе. В результате изображение точки приобретает вид расплывчатого пятна.
Типы объективов АХРОМАТЫ –устраняют сферическую аберрацию и частично хроматическую, дают изображение наиболее четкое в центре поля зрения. Края поля зрения при использовании ахроматов бывают окрашены в разные цвета спектра. Ахроматы широко распространены вследствие своей простоты и дешевизны. АПОХРОМАТЫ - устраняют хроматическую аберрацию почти в 10 раз, по сравнению с ахроматами. дают возможность устранить окрашивание объекта и получить одинаково четкое изображение по всему полю зрения.
Оптические данные объективов микроскопа «Биомед-4» Система Собственное увеличение Числовая апертура Фокусное расстояние, мм Свободное рабочее расстояние, мм Сухая 4 х 0, 10 21, 61 10, 20 Сухая 10 х 0, 20 15, 50 6, 20 Сухая Масляная иммерсия 40 х 0, 65 4, 35 0, 40 100 х 1, 25 1. 35 0, 12
Влияние иммерсионного масла на ход лучей в микроскопе 1 - объектив; 2 — предметное стекло; 3 — объект; 4— иммерсионное масло; 5— лучи света; 6 — фронтальная линза объектива
ОКУЛЯРЫ
ОСНОВНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ МИКРОСКОПА • общее увеличение • разрешающая способность
Общее увеличение микроскопа • произведение увеличения объектива на увеличение окуляра
Разрешающая способность микроскопа • Четкость получаемого изображения характеризуется разрешающей способностью микроскопа, т. е. той наименьшей величиной объектов и их деталей, которые можно увидеть с помощью этого прибора.
Числовая апертура • Для условий работы наших микроскопов величина постоянна, так как объекты исследуются при обычном свете ( =0, 55 мкм). Следовательно, предел разрешающей способности зависит исключительно от возможности повышения числовой апертуры. Числовая апертура ( «охват» линзы) объектива характеризует его светособирательную способность и определяется по формуле: • A 1 =n • sin l/2 , • где - отверстный угол, образуемый крайними лучами, попадающими в объектив (рис. 4); • n - показатель преломления среды, находящейся между фронтальной линзой объектива и рассматриваемым предметом. • Разрешающая способность микроскопа - величина, обратная разрешающему расстоянию (d). • Чем меньше абсолютная величина d, тем выше разрешающая способность микроскопа, тем меньше величины объект можно увидеть. Световой микроскоп при освещении видимым светом имеет разрешающую способность около 0, 2 мкм.
Правила работы с сухими системами объективов • Приготовленный препарат помещают и закрепляют с помощью держателя (6) на предметном • столике. Сначала препарат рассматривают с объективом 10 х, а затем переходят к большим увеличениям. Необходимо помнить, что чем меньше увеличение объектива, тем больше при установке препарата на фокус будет свободное рабочее расстояние (расстояние между объективом и препаратом). С помощью сухого объектива с увеличением 10 х просматривают несколько полей зрения. Передвигают предметный столик с помощью ручки перемещения препарата (16). Нужный для исследования участок препарата устанавливают точно в центре поля зрения. Вращением револьвера переводят объектив с увеличением 40 х. Наблюдая сбоку, макрометрическим винтом поднимают предметный столик почти до соприкосновения с препаратом (не касаясь его). Затем, смотря в окуляр, тем же винтом очень медленно опускают столик до появления изображения изучаемых объектов. После этого вращением микрометрического винта в ту или другую сторону (но не более чем на 2… 4 деления) производят его точную фокусировку. Если при повороте микровинта на 2… 4 деления (полоборота) в ту или иную сторону изображение не найдено, снова возвращаются к поиску изображения с использованием макрометрического винта, а затем переходят к работе с микрометрическим винтом. При смене объективов необходимо регулировать степень освещения препарата с помощью конденсора. Так, при просмотре препарата с объективом 10 х конденсор опускают, а при переходе на объектив 40 х конденсор несколько поднимают.
Правила работы с иммерсионной системой • • • На фиксированный и окрашенный препарат наносят каплю иммерсионного масла. С помощью держателя препарата (6) закрепляют препарат на предметном столике. Поворачивают револьвер и устанавливают по центральной оптической оси иммерсионный объектив с увеличением 100 х. Конденсор поднимают вверх до упора. Ирисовую диафрагму конденсора открывают полностью. Глядя сбоку, предметный столик с помощью макрометрического винта поднимают до погружения объектива в масло, почти до соприкосновения его фронтальной линзы с предметным стеклом препарата. Это нужно проводить очень осторожно, чтобы фронтальная линза объектива не получила повреждения. Смотрят в окуляр, очень медленно вращают макрометрический винт от себя и, не отрывая объектив от масла, опускают тубус до появления грубого изображения. При этом следует помнить, что свободное рабочее расстояние в иммерсионном объективе равно 0, 09… 0, 10 мм. Затем точную фокусировку производят микрометрическим винтом. Рассматривают в препарате несколько полей зрения, передвигая столик с помощью ручки перемещения препарата (16). По окончании работы с иммерсионным объективом опускают предметный столик, снимают препарат и осторожно протирают фронтальную линзу объектива сначала сухой мягкой хлопчатобумажной салфеткой, затем той же салфеткой, смоченной капелькой спирта. Оставлять масло на поверхности линзы нельзя, так как оно способствует оседанию пыли, высыхает и со временем может привести к повреждению оптики микроскопа. Препарат освобождают от масла сначала кусочком фильтровальной бумаги, затем обрабатывают стекло спиртом.
Скачать презентацию Правила по технике безопасности при работе в микробиологической
микроскоп. Устройство.Правила работы.pptx