Основы иммуногематологии Минск 2012 г Антигенные системы

Основы иммуногематологии Минск, 2012 г.

Антигенные системы эритроцитов o Изоантигены (аллоантигены) – это генетически детерминированные структуры, определяющие биологическую индивидуальность организма внутри вида

Перечень систем антигенов эритроцитов согласно номенклатуре ISBT Название системы ISBT символ Номер системы АВО 001 MNS 002 P P 1 003 Rh RH 004 Lutheran LU 005 Kell KEL 006 Lewis LE 007 Duffy FY 008 Kidd JK 009 Diego DI 010 и т. д. I I 027 GIL 029

Антигены эритроцитов системы АВО Ø Ø Ø По системе АВО различают 4 основные группы, образуемые сочетанием определенных антигенов А, В на поверхности эритроцитов и антител анти-А, анти-В в сыворотке крови. По международным правилам для обозначения групп крои используются только буквы 0, А, В, АВ. Антиген А представлен следующими вариантами: А 1 и более слабыми А 2, А 3, А 4 … Ах. А 2 имеет самостоятельную антигенную специфичность, среди лиц А(II)-12%, АВ(IY) А 2 составляет 20 -25%, А 3 1 на 1000 доноров, А 4 1 на 10000 -40000 доноров.

Экстраагглютинины анти-А 1, анти-Н o В сыворотке 1%-2% лиц с подгруппой А 2 и у 20 -25% лиц А 2 В выявляются экстраагглютинины анти-А 1 (альфа 1), активные при 15250, вызывают агглютинацию в пробе на индивидуальную совместимость и неактивные при 370 С. o Анти –Н экстраагглютинин изредка встречается в сыворотке лиц А 1 и А 1 В, выявляется при 15 -250.

Причины ошибок при определении групп крови системы АВО Погрешности технического характера: Нарушение идентификации донора или реципиента (в пробирке находится кровь не того человека, кого нужно исследовать): Перепутывание реципиентов; Перепутывание доноров (один сдает за другого, меняются креслами, ); Перепутывание пробирок; Неправильная паспортизация пробирок с кровью. Погрешности методического характера: Нарушение объемного соотношения стандартных сывороток или моноклональных реактивов и исследуемых эритроцитов. Нарушение месторасположения реактивов. Нарушение времени проведения реакции. Нарушение температурного режима проведения реакции. Нарушение режима освещенности во время проведения реакции. Биологические особенности образца крови: Наличие слабого антигена. Неспецифические свойства эритроцитов или сыворотки (плазмы). Групповой химеризм. “Дефектные” группы крови. Качество иммуногематологических реактивов.

Методы определения групп крови системы АВ 0 o Определение групп крови системы АВ 0 при помощи стандартных изогемагглютинирующих сывороток ( прямой и перекрестный метод); o Определение групп крови с использованием моноклональных реагентов; o Определение групп крови с применение идентификационных карт в гелевом тесте; o Определение групп крови в микропланшетах с использованием магнетизированных эритроцитов; o Определение групп крови с применением карточек с высушенными моноклональными реагентами (СЕРАФОЛ).

o Антигенная система Резус ( Rh-Hr) Rho(D), rh`(C), rh``(E), Hr(d), hr`(c), hr``(e) (основные антигены) o Иммуногенность антигенов Резус. D >c > C > E > e > d

ГАПЛОТИП o Комплекс генов на одной хромосоме, которые наследуются вместе. Каждый гаплотип состоит из трех антигенных детерминант: D или d, С или с; Е или е в различных комбинациях. Например: сde/Cd. E, CDe/cde, CDe/CDe.

ГРУППЫ СИСТЕМЫ РЕЗУС o Истинная группа по системе Резус есть результат наследования 3 -х антигенов от матери и 3 -х антигенов от отца. o Например: CDE/cde, Cd. E/cde, cde/cde, всего более 20 вариантов

Группы системы Резус-положительный Резус-отрицательный ССDее -18% ссdее Сс. Dее - 32% Ссdее Сс. DЕе - 15% ССdее сс. DЕе - 12% ссd. Ее сс. DЕЕ - 2% и др. сс. Dее - 2% Сw CDее - 3% и др. Всего более 20 групп системы Резус - 13% - 1, 5% - 0, 3% - 0, 7%

Условные группы по системе Резус o Резус-отрицательный реципиент - это реципиент, на эритроцитах которого нет Rh 0(D) -антигена. Исследованием остальных антигенов Резус пренебрегают. Реципиентов фактически делят на две группы: Rh 0(D) -положительных и Rh 0(D)- отрицательных

Условные группы по системе Резус o Резус-отрицательный донор - это донор, на эритроцитах которого нет Rh 0 (D), rh ( С), rh ( E) - антигенов. ccddee фенотип резус - отрицательного донора.

Слабые варианты антигена D объединяют в группу Du, частота которой составляет ~ 1 % среди резус-положительных лиц Разновидности Du: - D слабый (Dweak) – уменьшено количество антигенных детерминант; - D вариантный (Dpartial) – характеризуется экспрессией измененного D антигена в виде «порций» , отсутствуют некоторые эпитопы. Наиболее частый вариант – парциальный D категории VI ( 0, 1%).

Du - антиген Ø При рутинном исследовании отличить D слабый (Dweak) от D вариантного (Dpartial) невозможно; Ø поэтому кровь донора считается резусположительной, Ø кровь реципиента резус-отрицательной. ( Инструкция определение резуспринадлежности крови № 113 -08 от 13. 11. 2008 г. ) Ø Факт не выявления антигенов D weak и D partial у доноров может иметь отрицательные последствия для реципиентов, так как эти антигены иммуногенны для D-отрицательных больных.

СИСТЕМА КЕL В антигенной системе KEL известно 27 антигенов: -K, k, Kpa, Kpb, Ku, Jsa, Jsb Ø Наибольшей иммуногенностью обладает фактор К (синоним Ке. LL), (KEL 1 ) (Кк-9, 5%, ККISBT 0. 3%. кк- 90, 5%) Ø наибольшее клиническое значение имеют анти-К(Кеll) АТ, которые относятся к Ig. G 1, они in vivо сенсибилизируют эритроциты, которые затем разрушаются макрофагами. Ø Риск аллоиммунизации антигеном К у ккреципиента составляет 1: 10.

Система Duffy представлена шестью антигенами клинически значимыми - Fya, Fyb Фенотип Генотип Частота, % Fy(a+b-) Fya 17, 2 Fy(a+b+) Fya. Fyb 48, 5 Fy(a-b+) Fyb 34, 3

Антитела системы Duffy o Наиболее часто встречаются анти-Fyа, тепловые, неполные. o Адекватным методом подбора эритроцитов, выявления антител является непрямая реакция Кумбса.

Обязательный объем иммуногематологического обследования доноров крови и ее компонентов Ø >ABO, RH 1(D) типирование Ø >KEL 1 фенотипирование Ø >Скрининг антител Ø >RH фенотипирование ( Rh- доноров по антигенам С и Е, Rh + для формирования регистра типированных доноров и доноров стандартных эритроцитов) Согласно требованиям инструкции: «Порядок выполнения иммуногематологических исследований крови доноров и различных категорий реципиентов» , № 123 -1108 от 13. 11. 2008 г. 8

Обязательный объем иммуногематологического обследования реципиентов >ABO, RH 1(D)-типирование >скрининг антител >тесты на совместимость ( пробы на индивидуальную совместимость сыворотки реципиента и крови донора) Согласно требованиям инструкций: «Переливание донорской крови и ее компонентов» № 113 -1103 от о 1. 02. 2003 г. «Порядок выполнения иммуногематологических исследований крови доноров и различных категорий реципиентов» , № 1231108 от 13. 11. 2008 г. , «Перечень требований безопасности при переливании крови и ее компонентов» Приложение к постановлению Министерства здравоохранения РБ от 19. 05. 2011 № 39

Важнейшая задача иммуногематологического исследования крови – скрининг аллоиммунных антиэритроцитарных антител.

Важные замечания Ø Факт не выявления антигенов D weak и D partial у доноров может иметь отрицательные последствия для реципиентов, так как эти антигены иммуногенны для D-отрицательных больных. Ø Возможность дифференцирования антигенов D weak и D partial может быть использована при решении вопроса использования антирезусного иммуноглобулина: если беременная имеет антиген D weak, введение препарата не требуется; если беременная имеет антиген D partial, введение препарата целесообразно.

Распределение аллоиммунных антител среди доноров ГУ «РНПЦГТ» (n=133)

Алгоритм проведения скрининга антител у доноров Антитела есть Скрининг антител к антигенам Er Антител нет Выбраковка плазмы и ее компонентов для переливания Идентификация Повторный контроль при последующей донации крови Использование плазмы в качестве сырья для иммуногематологических диагностикумов и для производства иммуноглобулина антирезус

Распределение аллоиммунных антител среди реципиентов, которым проводился подбор крови в ГУ «РНПЦГТ» (2009 -2010 гг. ) (n=225)

Алгоритм проведения скрининга аллоиммунных антител у реципиентов Антитела есть Скрининг антител к антигенам Er Антител нет Идентификация ПРЯМОЕ ПОКАЗАНИЕ ДЛЯ ИНДИВИДУАЛЬНОГО ПОДБОРА, ЗАПИСЬ В КАРТОЧКЕ И УЧЕТ ПРИ ПОСЛЕДУЮЩИХ ПЕРЕЛИВАНИЯХ Инструкция: « Порядок выполнения иммуногематологических исследований у доноров и различных категорий реципиентов» № 123 -1108 от 132. 11. 2008 г.

Распределение аллоиммуных антител среди беременных, которым проводились анализы в ГУ «РНПЦГТ»

o Пример Беременная , 28 недель беременности, А(11) группы, резус-отрицательная Фенотип по системе Резус ССdее Выявлены антитела антирезус анти-hr (c) в титре 1: 16 o При необходимости гематрансфузии маме или заменного переливания ребенку необходима кровь с фенотипом по системе Резус ССdее ( 0, 3%) , как донорская кровь она резус-положительная. o o o

Методы выявления аллоиммунных антител

Пример панели эритроцитов для скрининга антител к антигенам эритроцитов

Основными причинами ложноотрицательных реакций при выявлении аллоантител являются:

ОСНОВНЫЕ ЗАДАЧИ ИММУНОГЕМАТОЛОГИЧЕСКОЙ БЕЗОПАСНОСТИ ПЕРЕЛИВАНИЯ ЭРИТРОЦИТСОДЕРЖАЩИХ СРЕД. Ø Качественное иммуногематологическое обследование реципиента Ø Качественное иммуногематологическое обследование крови донора. Ø Определение совместимости эритроцитсодержащих сред донор-реципиент Ø Документирование всех этапов выполнения анализов, как составная часть обеспечения прослеживаемости движения дозы крови от донора к реципиенту. Ø Проведение всех исследований в соответствии с единым стандартом, регламентирующим необходимые иммуногематологические исследования для доноров и различных категорий реципиентов.

Организационно-методические мероприятия по улучшению качества иммуногематологических исследований в Республике Беларусь: Ø Утверждены в Министерстве здравоохранения 2008 году 12 инструкций по иммуногематологии. Ø В 2005 году разработана и выполняется программа внешнего контроля качества иммуногематологических стандартов, выпускаемых на станциях переливания крови страны. Ø С целью проверки квалификации сотрудников региональных лабораторий службы крови проводится внешний контроль качества иммуногематологических исследований.

Внедрение новых методов иммуногематологических исследований: Ø определение групп крови системы АВО, резуспринадлежности моноклональными реагентами; Ø применение идентификационных карт для определения групп крови системы АВО, резуспринадлежности, выявление аллоиммунных антител к антигенам эритроцитов в гелевом тесте; Ø определение групп крови системы АВО, резуспринадлежности с использованием карточек с высушенными моноклональными антителами Серафол. Ø применение микропланшетного метода для определения групп крови системы АВО, резус-принадлежности, выявление аллоиммунных антител к антигенам эритроцитов с применением магнетизированных эритроцитов на полуанализаторе FREELYS Nano.