Организация и проведение сличительных испытаний (грипп птиц, болезнь Ньюкасла), обзор результатов 2012 -2013 гг. Чвала Илья Александрович, зав. реф. лаб. вирусных болезней птиц, ФГБУ «ВНИИЗЖ»
Нормативные документы • ГОСТ Р ИСО/МЭК 17025— 2006 Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий • ISO/IEC 17043: 2010 “Conformity assessment—General requirements for proficiency testing, ” «Оценка соответствия. Общие требования к проверке квалификации» , • Межлабораторные сравнительные испытания при аккредитации и инспекционном контроле испытательных лабораторий. Методика и порядок проведения. Р 50. 4. 0062002 • Правила организации проведения межлабораторных сличительных испытаний и профессионального тестирования специалистов учреждений, осуществляющих лабораторные исследования в области ветеринарии (утв. Федеральной службой по ветеринарному и фитосанитарному надзору 25 января 2010 г. )
Участие Референтной лаборатории вирусных болезней птиц в международных МСИ • Istituto Zooprofilattico Sperimentale delle Venezie, Падуя, Италия (FAO/OIE референтная лаборатория), • DEFRA, Animal Health and Veterinary Laboratories Agency, Вэйбридж, Великобритания (OIE референтная лаборатория), • GD Animal Health Service, Дэвентер, Голландия, С учетом Laboratory Proficiency Testing (OIE) http: //www. oie. int/en/our-scientific-expertise/reference -laboratories/proficiency-testing/
Задачи МСИ Laboratory Proficiency Testing (OIE) • Оценка способности лабораторий проводить исследования с использованием конкретного метода/тест-системы, • Оценка достоверности исследований конкретного специалиста, • Проверка точности калибровки оборудования, • Оптимизация используемого или аппробация нового метода, • Приведение количественных результатов в соответствие (устранение межлабораторных отличий)
Программа МСИ • Стандартные условия исследования (в т. ч. методы, оборудование, диагностические тест-системы, и др. ), • Количество проб для каждого из методов исследования (раундов), • Выбор штаммов для изготовления шифрованных проб, • Гарантия качества: однородность, активность и специфичность, стабильность, надлежащая маркировка и условия хранения/транспортировки, • Сбор и анализ результатов, • Оценка результатов (статистические методы? ), • Корректирующие меры
Стандартные методы? • Перечень нормативной документации, разрешенной для использования в государственных ветеринарных лабораториях при диагностике болезней животных, рыб, пчел, а также контроля безопасности сырья животного и растительного происхождения от 30 июля 2009 г. N 02 -03 -48/563 • ГОСТ 25581 -91 Птица сельскохозяйственная, синантропная, дикая и экзотическая. Методы лабораторной диагностики гриппа • ГОСТ 25587 -83: Птица сельскохозяйственная. Методы лабораторной диагностики болезни Ньюкасла • Ветеринарные правила лабораторной диагностики гриппа А птиц (Приказ Минсельхоза России от 3 апреля 2006 года N 105) • Методические указания по лабораторной диагностике болезни Ньюкасла и классической чумы птиц (гриппа птиц) ГУВ МСХ СССР 1972 год • МУ по определению уровня антител к вирусу ньюкаслской болезни в реакции торможения гемагглютинации Департамент ветеринарии N 13 -7 -2/988 от 23. 06. 1997
Полимеразная цепная реакция • Тест-система для обнаружения вируса гриппа А методом ПЦР, НПО «Нарвак» , • Тест-система для обнаружения и дифференциации вируса гриппа А подтипов Н 5 и Н 7 методом ПЦР, НПО «Нарвак» , • Тест-система для выявления и дифференциации вируса гриппа птиц методом полимеразной цепной реакции «ГРИПП» , вариант EPh, ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора, г. Москва, • Тест-система для выявления и дифференциации вируса гриппа птиц методом полимеразной цепной реакции «ГРИПП» вариант FRT, ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора, г. Москва, • Тест-система для обнаружения вируса гриппа А методом ПЦР, ООО «Ветбиохим» , г. Москва, • Тест-система для обнаружения и дифференциации вируса гриппа А подтипов Н 5 и Н 7 методом ПЦР, ООО «Ветбиохим» , г. Москва, в отдельных случаях наименования тест-систем приводились недостаточно полно, или без указания варианта проведения исследований (в режиме «реального времени» или ОТ-ПЦР).
Реакция торможения гемагглютинации • Набор для выявления антител к вирусу гриппа птиц подтипа Н 5 в РТГА, ФГБУ «ВНИИЗЖ» , • Набор для выявления антител к вирусу ньюкаслской болезни в РТГА, ФГБУ «ВНИИЗЖ» , • Набор антигенов и сывороток для диагностики гриппа птиц в РТГА, ОАО «Покровский завод биопрепаратов» , • Набор компонентов для выявления антител к вирусу ньюкаслской болезни птиц в РТГА, ООО «Кронвет» , • Набор антигенов и сывороток для диагностики гриппа птиц в РТГА, ООО «Щелковский завод фармацевтических и ветеринарных препаратов» . не все участники испытаний предоставили сведения по наименованиям и сериям использованных наборов
Оборудование
Laboratory Proficiency Testing (OIE): количество проб не менее 3/раунд 2013 год: ПЦР – 5 проб (антиген вируса гриппа различных подтипов, «нормальный» (отрицательный) антиген), РТГА – 4 сыворотки крови кур (гипериммунные сыворотки к вирусам гриппа и ньюкаслской болезни, нормальная (отрицательная) сыворотка)
Вирус ньюкаслской болезни
Результаты РТГА (Н 5) с использованием референтных сывороток и антигенов, отечественных наборов АГ Н 5 N 1 IZSVe АГ Н 5 N 2 IZSVe АГ Н 5 N 3 IZSVe АГ Н 5 N 9 IZSVe АГ Н 5 N 3 Производи тель 1 АГ Н 5 N 3 Производите ль 2 АГ Н 5 N 1 «Новосибирск ий» ФГБУ «ВНИИЗЖ» АГ Н 5 N 2 Приморский ФГБУ «ВНИИЗЖ» Н 5 N 1, IZSVe 1: 2048 1: 1024 1: 1024 1: 256 1: 512 Н 5 N 2, IZSVe 1: 1024 1: 2048 1: 1024 1: 512 1: 128 1: 256 Н 5 N 3, IZSVe 1: 1024 1: 512 1: 256 Н 5 N 9, IZSVe 1: 1024 1: 512 1: 1024 1: 256 1: 512 1: 128 1: 256 Н 5 N 3, Производитель 1 1: 32 1: 16 1: 32 1: 64 1: 128 1: 16 Н 5 N 3, Производитель 2 1: 16 1: 8 1: 16 1: 64 1: 8 1: 1024 1: 512 1: 256 Положительная сыворотка Н 5 N 1, «Новосибирский» ФГБУ «ВНИИЗЖ»
• • A/mallard/Italy/3401/2005 H 5 N 1 A/turkey/Italy/1980 H 5 N 2 A/duck/Italy/775/2004 H 5 N 3 A/chicken/Italy/22 A/1998 H 5 N 9 • A/chicken/Italy/1067/1999 H 7 N 1 • A/turkey/Italy/9289/2002 H 7 N 3 • A/macaw/England/628/1980 H 7 N 7
THE 2011 -2012 WHO INFLUENZA REAGENT KIT FOR IDENTIFICATION OF INFLUENZA ISOLATES Produced and distributed by: WHO COLLABORATING CENTER FOR SURVEILLANCE, EPIDEMIOLOGY AND CONTROL OF INFLUENZA Located at: Centers for Disease Control and Prevention Influenza Division Virus Surveillance and Diagnosis Branch, G-16 1600 Clifton Road, NE Atlanta, Georgia 30333, U. S. A. Telephone: 404 -639 -3591 Fax: 404 -639 -0080 In Collaboration with Influenza Reagent Resource (IRR) and American Type Culture Collection (ATCC) http: //www. influenzareagentresource. org
Технология изготовления шифрованных проб • Изученные штаммы, свободные от контаминации, • Получение высокоактивных, специфичных и стабильных образцов, • Проверка показателей с использованием различных методов и тест-систем на всех этапах производства, сроках хранения • Объем проб: антигены по 1 мл, сыворотки по 0, 5 мл, т. е. в количестве, достаточном для тестирования испытуемым методом, возможно исследование дополнительными методами
Анализ результатов - качественный Статистическая обработка данных не проводится ввиду: • использования тест-систем различных производителей (особенности наборов и реагентов), • особенностей методов РТГА и ПЦР (ОТ- или ОТ -реального времени), • уровень оснащенности лабораторий (использование оборудования различных производителей). Результат МСИ (для каждого образца): удовлетворительный, неудовлетворительный, сомнительный
Корректирующие меры • Стажировка специалистов лаборатории – участника МСИ в профильных лабораториях, • Расширение перечня применяемых тестсистем и методов, • Совместный анализ и устранение ошибок (организатор и участник)
Наиболее распространенные ошибки МСИ-2012 • ПЦР - техническая ошибка? , контаминация? • РТГА (идентификация антигена и выявление антител) – низкая активность положительных сывороток (от 1: 16 -1: 32), использование единственного набора (без последующего подтверждения), неспецифическая реакция.
Рекомендации Участникам МСИ • Использование тест-систем нескольких производителей, • Использование дополнительных методов (РДП, ИФА, варианты ПЦР), • Проведение исследований параллельно несколькими специалистами, • Анализ полученных результатов до отправки организатору, • Подробный отчет о результатах исследований, с комментариями специалистов
Спасибо за внимание! e-mail: chvala@arriah. ru
Скачать презентацию Организация и проведение сличительных испытаний грипп птиц болезнь
db1ea2dbed937dce4b7c7565c568d806.ppt