Общий анализ крови. Причины изменения уровня лейкоцитов. Интерпретация лейкограммы. Шишканова С. В.
• Общий анализ крови (ОАК, СВС)-это профиль тестов, используемый для описания количества и качества клеточных элементов крови. • ОАК включает в себя определение СОЭ, уровня гемоглобина и гематокрита, эритроцитарных индексов, числа эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов, подсчёт лейкограммы.
При помощи ОАК можно диагностировать: • Анемию • Воспалительный процесс • Злокачественные опухоли кроветворной системы • Кровепаразитарные заболевания • Аллергические реакции
Показания для проведения исследования биоптатов костного мозга • Длительно существующая нейтропения • Стойкий нейтрофильный лейкоцитоз • Выраженный сдвиг влево в отсутствии воспаления • Необъяснимая тромбоцитопения • Стойкий тромбоцитоз • Длительная нерегенераторная анемия • Наличие атипичных клеток • Большое количество ядросодержащих эритроцитов в отсутствии анемии
Основные правила отбора крови для клинического исследования. • Около 70% лабораторных ошибок связаны с преаналитическим этапом (взятие, хранение и транспортировка образца) • Нарушение на любом из этих звеньев ведёт: неточным результатам анализа постановке ошибочного диагноза возникновению риска для здоровья животного!!!!
Взятие крови. Рекомедуется: • Проводить отбор крови натощак (не менее 1012 часов голодания) • Производить вакуумный или капельный отбор крови (в пробирку с антикоагулянтом) • Избегать использования игл-бабочек для отбора крови, с переливанием из шприца в пробирку (допустимо у щенков, котят, миниатюрных пород собак) • Отбирать кровь из ярёмной вены, в случае коллапса основных вен
• Присутствие даже небольших сгустков в пробе крови обесценивает любой подсчёт, делая образец непригодным для исследования! • Распределение клеток в крови становится неравномерным: тромбоциты, лейкоциты, гематокрит!
Выбор антикоагулянта. • Этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТА) -лучший антикоагулянт для сохранения клеточных элементов! • Принято использовать К 3 ЭДТА или К 2 ЭДТА • Исключение составляют птицы и пресмыкающиеся (гемолиз) для них, рекомендуется использовать гепарин или цитрат
Основные минусы использования гепарина. • Кровь с гепарином не подлежит хранению • Гепарин даёт голубой мутный фон в окрашенных мазках крови • Затруднён подсчёт лейкограммы в связи с плохим прокрашиванием лейкоцитов • Выражена агрегация тромбоцитов
Гепарин хороший антикоагулянт для: • Иммунологических тестов • Исследования функций нейтрофилов • Биохимических исследований
Пробирки для ОАК
Нарушение соотношения между кровью и антикоагулянтом Недостаток антикоагулянта Избыток антикоагулянта • Микросвёртывание • Нарушение морфологии клеток (сморщивание) • гематокрита образование сгустка
• Необходимый объём крови для клинического исследования 0, 25 -0, 5 мл • Максимальное хранение образца в холодильнике 24 часа ( в идеальном варианте не более 6 -8 часов)! • Приготовление мазков крови должно быть произведено в течение 1 -2 часов после забора крови! • При хранении пробы в холодильнике, перед началом анализа её необходимо прогреть в течение 30 мин
Лейкоциты (WBC)-белые клетки крови относятся к самому малочисленному классу клеток. Соотношение между различными видами лейкоцитов зависит от вида животных: • для плотоядных характерен нейтрофильный профиль крови • для жвачных лимфоцитарный
Референтные интервалы для лейкоцитов. Собаки 6, 0 -17, 0 х10⁹/л Кошки 5, 5 -19, 0 х10⁹/л
Подсчёт лейкоцитов. Существует два основных метода подсчёта лейкоцитов: • Ручной подсчёт (камера Горяева) • Автоматический (кондуктометрический метод) Подсчёт лейкоцитов в мазке крови-контроль качества определения.
Подсчёт лейкоцитов в мазке крови. • Используется увеличение 100 (объектив х10, окуляр х10) • Определяется общее количество лейкоцитов в поле зрения в окрашенном мазке ( желательно просмотреть не менее 3 -х полей) • Вычисляется среднее значение и полученный результат х125 (в мкл) • Можно использовать увеличение 200 , результат х500 (в мкл)
Недостатки метода. • Поле зрения у каждого микроскопа разное • Необходимо выводить коэффициент коррекции
Основные требования к подсчёту лейкоцитов в камере Горяева • Соблюдать соотношение между кровью и жидкостью Тюрка 1: 20, смесь необходимо выдерживать 20 мин для полного лизиса эритроцитов • Камера Горяева должна периодически обновляться • Нельзя работать на влажной камере • Перед работой на камере стёкло должно быть тщательно притёрто к камере до появления 2 -х радужных колец • При смещении стекла во время заполнения камеры, она должна быть перезаряжена • Необходимо использовать контрольные материалы (суспензия для подсчёта лейкоцитов) • Не хранить пробы крови при t >+28⁰, возможен лизис лейкоцитов • Перед подсчётом клеток необходимо выждать 1 мин для полного осаждения
Основные причины некорректного измерения уровня лейкоцитов кондуктометрическим методом. Ложное завышение Ложное занижение • Большое содержание в крови ядросодержащих эритроцитов и эритроцитов устойчивых к лизису • Наличие агрегатов тромбоцитов • Наличие криоглобулинов • Наличие парапротеинов • Плохое перемешивание образца крови • Длительное хранение пробы при комнатной температуре
Подсчёт лейкоцитов в случае большого количества ядросодержащих эритроцитов в крови. • Например : 45 x 10⁹/л общее подсчитанное количество лейкоцитов на анализаторе • 150 –это общее количество лейкоцитов и ядросодержащих, полученное при подсчёте лейкоцитарной формулы (из них 50 это ядросодержащие эритроциты) • 100 -количество лейкоцитов • Х-скорректированное число лейкоцитов
Основные лейкоцитные концепции. Оценка лейкоцитов включает в себя: • подсчёт общего количества лейкоцитов • дифференциальный подсчёт в % и абсолютных значениях • исследование морфологии лейкоцитов
Лейкограмма используется для: • Оценки состояния здоровья животного • Постановки дифференциального диагноза • Оценки реакции пациента на лечение • Предположительного прогноза • Оценки работы костного мозга Подсчёт лейкограммы без подсчёта общего количества лейкоцитов диагностического значения не имеет!!!
Лейкограмма всегда должна быть подсчитана как в %, так и в абсолютных значениях!!! • Собака, немецкая • Собака, йоркширский овчарка, кобель, терьер, кобель, Ворд, Джастин, 9 лет. 2 года. Количество лейкоцитов 4, 0 х10⁹/л (6, 0 -17, 0) 40 х10⁹/л (6, 0 -17, 0) Лимфоциты 70% (17 -30) Лимфоциты 7% (17 -30) Абсолютное значение лимфоцитов у обеих 2, 8 х10⁹/л (1, 02 -5, 1)!!! собак одинаковое
Как подсчитать абсолютные значения? • Количество клеток в % х общее количество лейкоцитов/100 • Например: общее количество лейкоцитов 47 х10⁹/л , моноцитов 7% А=7 х 47/100= 3, 29 х10⁹/л
Исследование окрашенного мазка крови. • В ветеринарии принят ручной подсчёт лейкограммы (на 100 или 200 клеток)! • Распределение клеток в мазке крови неравномерное: лейкоциты располагаются по краям клиновидного мазка, лимфоциты в центре!
Рекомендуемая схема для подсчёта лейкограммы.
Лейкопоэз. • Образуются лейкоциты в костном мозге из полипотентных стволовых клеток под влиянием интерлейкинов и колониестимулирующих факторов. • Число полипотентных стволовых клеток снижается у животных с возрастом.
Гранулоцитопоэза.
Лимфо, моно и тромбопоэз.
Схема выхода нейтрофилов из костного мозга.
Вопросы, которые необходимо задать себе при интерпретации лейкограммы. Есть ли здесь воспалительный процесс? Если есть, то можно ли оценить его тяжесть? Если воздействие глюкокортикоидов (стресс)? Есть ли влияние адреналина (возбуждение, волнение, страх)? • Есть ли некротические поражения тканей? • Есть ли системная токсемия? • •
Лейкоцитоз и нейтрофилия. • Характерны для воспалительных процессов • Продолжительность и тяжесть процесса, а также ответ костного мозга на поражение будет определять степень нейтрофилии и появление в крови незрелых форм (п/я нейтрофилы, метамиелоциты и миелоциты) • О выраженном сдвиге влево говорят при количестве палочкоядерных нейтрофилов >1, 0 х10⁹/л • Более низкие значения (0, 3 -1, 0 х10⁹/л) характерны для хронических воспалительных процессов и гранулематозных
Алгоритм действий при лейкоцитозе.
Дифференциальный диагноз. • • Воспаление Кортикостероиды (стресс) Адреналин ( страх, нагрузка) лейкоз
Причины лейкоцитоза со сдвигом ядра влево. 1. Бактериальные инфекции (сепсис), в меньшей степени вирусные (FIP), грибковые и протозойные. 2. Некротические процессы (тромбоэмболия, панкреатит) 3. Химические воздействия 4. Аутоиммунные заболевания ( иммунная гемолитическая анемия, системная красная волчанка) 5. Токсины (эндо и экзотоксины) 6. Гемобластозы (ОМЛ, ХМЛ и хронические миелопролиферативные заболевания) 7. Опухоли различного происхождения (вследствие выработки цитокинов)
Прогноз К плохому прогнозу относят : • Собак с лейкоцитозом >60 х10⁹/л • Кошек с лейкоцитозом >30 х10⁹/л • Дегенеративный сдвиг влево • Токсические изменения в лейкоцитах • Лекопению/нейтропению • Лейкемоидную реакцию
Лейкемоидная реакция. Характеризуется выраженным лейкоцитозом (50, 0 -100, 0 х10⁹/л) и выраженным сдвигом ядра влево (до бластных клеток) Встречается при: • септических процессах (пиометра, перитонит, пневмония, пиоторакс, множественные абсцессы) • иммунной гемолитической анемии (IHA) • функциональных нарушениях в нейтрофилах Необходимо дифференцировать от ХМЛ!!!
Выраженный сдвиг ядра влево. Собака, сука, китайская хохлатая, Диагноз: пиометра
Токсические изменения в нейтрофилах. Вызваны нарушением их созревания в костном мозге, в результате токсических воздействий (бактериальные токсины) Различают: • базофилию и пенистость цитоплазмы нейтрофилов • наличие телец Дёле • появление гигантских нейтрофилов
• Нейтрофильную токсичность оценивают в крестах от + до ++++ • Тельца Дёле в крови кошек рассматривают, как вариант нормы • Пенистость цитоплазмы без базофилии диагностического значения не несёт • Гигантские нейтрофилы также встречаются при дисгранулопоэзе (ОМЛ, ХМЛ, миелодиспластический синдром, Fe. LV, FIV, панлейкопения)
Тельца Дёле , кровь кошки
Нейтрофильная токсичность Кровь, кошки. Диагноз: пиометра Кровь здоровой кошки.
Гиперсегментация нейтрофилов (сдвиг вправо) • • Гиперсегментация нейтрофилов-наличие в нейтрофилах ядер с 5 -тью и более долями Встречается при : Старении животных Хронических воспалительных процессах Стероидной терапии Гиперадренокортицизме Миелопролиферативных заболеваниях Дефекте абсорбции кобаламина у собак Дефиците фолатов у кошек In vitro , при позднем приготовлении мазков крови
Гиперсегментация нейтрофилов.
Нейтропения. • • • Явление достаточно редкое Причины: повышенное потребление нейтрофилов тканями (нейтропения потребления) дисгранулопоэз идиосинкразии на лекарственные препараты (цефалоспорины, триметоприм, фенилбутазон) эстроген (эндогенный и экзогенный) химиотерапевтические препараты вирусные инфекции (парвовирус) кровепаразитарные заболевания (эрлихиоз) наследственные расстройства (циклический гемопоэз серых колли, синдром Чедиака-Хигаси) миелофтиз (множественная миелома, лимфолейкоз, миелодиспластический синдром) первичная иммуноопосредованная нейтропения (системная красная волчанка)
Алгоритм действий при лейкопении.
Дисгранулопоэз. Характеризуется уменьшением клетокпредшественников или нарушением процесса созревания клеток Причины: • Гемобластозы • Вирус лейкоза кошек (Fe. LV) • Вирус иммунодефицита (FIV)
Нейтропения потребления. • Встречается при тяжёлых воспалительных процессах • Связана с гибелью большого количества лейкоцитов в очаге воспаления и истощением резерва костного мозга • Прогноз очень осторожный • В ОАК наблюдается лейкопения, выраженный сдвиг влево (дегенеративный)
Псевдонейтропения. • Встречается при шоке • Вызвана перемещением лейкоцитов из циркулирующего в краевой пул
Физиологическая лейкопения/нейтропения/лимфопения • Описана у бельгийских овчарок-тервуренов
Наследственные дефекты нейтрофилов. • Синдром Чедиака-Хигаси • Синдром серых колли (циклическая нейтропения) • Дефицит молекул адгезии ß₂ интегринов • Аномалия Пельгер-Хьюита
Синдром Чедиака-Хигаси.
Синдром Чедиака-Хигаси • • Генетическое заболевание передаётся аутосомно-рецессивно Встречается у персидских кошек с дымчатоголубой шерстью и жёлто-зелёными глазами Проявляется: альбинизмом (кожи и глаз) рецедивирующими бактериальными инфекциями нейтропенией склонностью к кровотечениям
Синдром серых колли (циклическая нейтропения) • Аутосомно-рецессивное заболевание • Врожденная патология стволовых клеток • Характеризуется циклической нейтропенией (2 -4 дня ) с 11 -12 дневными интервалами • Щенки не доживают до 6 -ти мес. • Выжившие погибают в зрелом возрасте от системного амилоидоза
Дефицит молекул адгезии ß₂ интегринов • Аутосомно-рецессивное заболевание • Заключается в дефиците гликопротеиновой молекулы адгезии ß₂ интегрина на поверхности лейкоцитов • Проявляется выраженным нейтрофильным лейкоцитозом • Склонностью к бактериальным инфекциям
Аномалия Пельгер-Хьюита. • Наследственное аутосомно-доминантное заболевание, проявляющееся нарушением созревания нейтрофилов, встречается у собак и кошек • Характеризуется ядерной гипосегментацией • Все нейтрофилы похожи на палочкоядерные и метамиелоциты ( «вечный сдвиг влево» ) • !!!Хроматин у таких нейтрофилов более грубый, плотный, конденсированный характерный для зрелых клеток!!!Цитоплазма не изменена!!! • Нейтрофилы функционируют нормально, угрозы здоровью животного нет
Аномалия Пельгер-Хьюита
«Псевдо» аномалия Пельгер-Хьюита. • • приобретённая, встречается при: бактериальных инфекциях ВЛК начинающихся гемобластозах приёме некоторых лекарственных препаратов
Лимфопения Основные причины: • Стресс • Кортикостероиды (эндо и экзогенные) • Потеря лимфы (хилоторакс, энтеропатия, лимфангиоэктазия) • Поражение лимфоидной ткани вирусами
Вирусная лимфопения. Собаки • • Чума плотоядных Коронавирусный энтерит Инфекционный гепатит Парвовирусный энтерит Кошки • Панлейкопения • ВЛК (Fe. LV) • ВИК (FIV)
Лимфоцитоз • • • Абсолютный лимфоцитоз явление достаточно редкое Встречается : после вакцинации у молодых собак хронических воспалительных процессах под действием адреналина у кошек при гипоадренокортицизме (у животных в состоянии стресса) риккетсиозах гемобластозах ( ХЛЛ, ОЛЛ, лимфома)
Хронический лимфолейкоз (ХЛЛ) Собака, кобель, такса, Карлос, 4 года Количество лейкоцитов 73, 45 х10⁹/л
Реактивные лимфоциты (иммуноциты) Появляются в результате антигенной стимуляции. Крупные клетки, с менее плотным хроматином и базофильной цитоплазмой.
Моноцитоз. • • Моноцитоз возникает при повышенной потребности тканей в макрофагах. Функции макрофагов: удаление некротических продуктов распада инактивирование бактерий, грибов, паразитов, инородных тел удаление стареющих фагоцитов и аномальных эритроцитов разрушение неопластических клеток
Моноцитоз. • Моноцитоз сопровождает нейтрофилию • Выраженный моноцитоз встречается после выздоровления животных от заболеваний, сопровождающихся нейтропенией (парвовирус, химиотерапия) • Характерен для острых и хронических воспалительных процессов • Может вызываться глюкокортикоидами (собаки) • Необъяснимый моноцитоз может быть при остром монобластном лейкозе
• Понятия моноцитопения , эозинопения и базопения в ветеринарии не существует!
Эозинофилия. • паразитарные инфекции (дирофиляриоз, эрлихиоз, мигрирующие личинки) • аллергические реакции • кишечные заболевания с эозинофильной инфильтрацией • эозинофильные инфильтраты в лёгких • опухоли лимфоидной ткани • идиопатические эозинофилии • криптококкоз • ВЛК • эструс у сук • патологии тучных клеток • гиперэозинофильный синдром • семейная эозинофилия самоедских лаек • эозинофильный лейкоз
Эозинофилия. Кровь кошки
Семейная эозинофилия самоедских лаек. Характеризуется большим количеством гипосегментированных эозинофилов в крови, патологиями глаз и скелета.
Базофилия. • О базофилии говорят при более 3 -6% базофилов в крови • Характерна для паразитарных инфекций (дирофиляриоз) • Сопровождает эозинофилию • Встречается при реакциях гиперчувствительности, мастоцитоме. базофильном лейкозе •
Базофилия. Кровь собаки.
Заключение. • При оценке лейкограммы всегда необходимо обращать внимание на уровень лейкоцитов • Оценивать лейкограмму необходимо только в абсолютных числах • Помнить о влиянии стресса, стероидной терапии и адреналина на лейкограмму • Воспалительные процессы могут вызывать совершенно разные изменения в лейкограмме • Поверхностное, лёгкое и хроническое воспаление может не вызывать изменения лейкограммы • Не существует лабораторных тестов с 100% чувствительностью!!! • Иногда необходимо определять белки острой фазы воспаления и протеинограмму • ОАК требует мониторинга
Спасибо, за внимание!
Скачать презентацию Общий анализ крови Причины изменения уровня лейкоцитов Интерпретация
Общий анализ крови.ppt