О т стік аза стан ң ү Қ

О т стік аза стан ң ү Қ қ Мемлекеттік Фармацевтика Академиясы Южно-Казахстанская Государственная Фармацевтическая Академия СРИ Тема: Методы лабораторного исследования гемостаза. : Выполнила: Мынбаева Д. Группа: 601 -ТКБ Проверила: Карабасова Б. К

““ Методы лабораторного исследования гемостаза” 1. Скрининговые исследования 2. Исследование сосудисто-тромбоцитарного звена гемостаза

Лабораторные методы, используемые в исследовании гемостаза: • Клоттинговые: (ВСК, ПВ, АПТВ, ТВ …) • Хромогенные: (активность ATIII, PC, Pl) • Иммунологические: (количество отдельных факторов) • ПЦР: (ДНК-диагностика наследственных гемофилий и тромбофилий: аномалия Лейдена, гомоцистеинемия, дефицит AT) • Проточная цитофлуориметрия: (определение рецепторов тромбоцитов) • Нефелометрия: (исследование функции тромбоцитов по методу Born)

Клоттинговые методы: — основаны на определении времени образования, а также растворения сгустка в стандартных условиях; — определяется активность отдельных звеньев системы свертывания и фибринолиза.

Хромогенные методы: — это хромогенное (оптическое) определение хромогенных (окрашенных) веществ (нитроанилина) связанных с субстратами (белками) специфических реакций; — так определяется активность отдельных компонентов свертывающей, антитромбиновой или фибринолитической системы. Пример: Стрептокиназа + плазминоген** = плазмин + свободный нитроанилин**(желтая окраска)

Скрининговые тесты гемостаза: 1) Определение резистентности микрососудов: — манжеточная проба; -баночная проба; -проба щипка 2) Определение времени кровотечения: — по Дьюка; — по Айви; — по Шитиковой 3) Определение времени свертывания крови: — по Ли и Уайту

Манжеточная проба Выполнение: Создают венозный стаз путем дозированного сжатия плеча манжеткой тонометра (90 мм на 5 минут) и подсчитывают количество петехий в в верхней ладонной поверхности предплечья и локтевого сгиба. Клиническое значение: Положительная проба возможна при врожденной ломкости капиляров, тромбоцитопении, значительной тромбоцитопатии, гиповитаминозе С, болезни Виллебранда, приеме непрямых антикоагулянтов, гормональном сдвиге у женщин, ДВС-синдроме.

Время кровотечения — тест общего состояния сосудисто-тромбоцитарного звена гемостаза Выполнение: Определяют длительность кровотечения из микрососудов кожи после дозированного (3 мм) прокола ее ланцетом. Клиническое значение: Удлинение времени кровотечения возможна при значительной тромбоцитопении, тяжелых формах тромбоцитопатии (тробастения Гланцмана), болезни Виллебранда, приеме непрямых антикоагулянтов, гормональном сдвиге у женщин, ДВС-синдроме.

Оценка работы первичного гемостаза

Оценка работы первичного гемостаза Platelet Function аnalyzer-100 Прибор для количественной оценки гемостатической функции тромбоцитов

Определение количества тромбоцитов : (170 -350 х10/л) 1) В мазке по Фонио: не может быть рекомендован из-за малой точности. 2) Подсчет в камере Горяева после гемолиза эритроцитов оксалатом аммония. 3) С помощью автоматического счетчика в венозной крови, стабилизированной ЭДТА.

Исследование функции тромбоцитов Выполняется из венозной крови, стабилизированной цитратом натрия в соотношении 1/9; в течении 1 часа после забора крови. Богатая тромбоцитами плазма — отбирают после центрифугирования крови при 1000 оборотов /6 минут Бедная тромбоцитами плазма — отбирают после центрифугирования крови при 3000 оборотов/ 15 минут

Исследование функции тромбоцитов: РЕТРАКЦИЯ В ПЛАЗМЕ (богатой тромбоцитами) Пробирка полистироловая мерная: 2, 5 мл забуференного физ. раствора 0, 2 мл тромбина 0, 2 мл Ca Cl 2 (0, 277%) Добавить 0, 2 плазмы, богатой тромбоцитами Перемешать, вылить в пластиковый шприц на 5, 0 мл инкубировать 60 минут при 37 0 С Вынуть сгусток Замерить объем Расчет: Vост/ Vобщ . 100%

Исследование агрегации тромбоцитов • ТУРБИДИМЕТРИЧЕСКИЙ МЕТОД Борна — основан на регистрации изменений светопропускания богатой тромбоцитами плазмы после активации индукторами. • Индукторы агрегации — естественные или искуственные активаторы: • АДФ; • Адреналин; • Коллаген; • Ристоцетин и др.

Агрегометр HELENA PACKS-4 • СПИСОК МЕТОДИК: • Агрегация с АДФ • Агрегация с эпинефрином • Агрегация с коллагеном • Агрегация с ристоцетином • Агрегация с арахидонатом • Активность фактора фон Виллебранда (по ристоцетин-кофакторной активности) • Хромогенное определение: • Антитромбина III • Плазминогена • Протеина С • Гепарина • Активности фактора VIII

AP 2110 Анализатор агрегации тромбоцитов предназначен для исследования in vitro агрегационных свойств тромбоцитов турбидиметрическим методом. Анализатор агрегации тромбоцитов АMS 600 Агрегометры

Агрегометр LA 230 ( » БИОЛА» Россия) Двухканальный анализатор агрегации тромбоцитов Прибор позволяет проводить в каждом канале исследования агрегации тромбоцитов методом светопропускания и определения среднего радиуса тромбоцитарных агрегатов. Агрегометр тромбоцитарный «CHRONOLOG CORP. » (США) Агрегометр 430 (одноканальный) Агрегометр 440 VS(двухканальный) Агрегометр 470 VS(четырехканальный) Оптический анализатор агрегации тромбоцитов служит для исследования агрегационных свойств тромбоцитов в плазме. Агрегометры

Оптическая агрегометрия используется для исследования процессов агрегации на плазме обогащенной тромбоцитами (PRP), а также для измерения агглютинации латексных частиц и для исследования изменения формы взвешенных частиц. Оптические агрегометры «Хроно-лог» с успехом используются во всем мире уже многие годы, начиная с 1967 г и являются «золотым» стандартом в оптической агрегометрии. Двойной инфра-красный луч и чувствительный фотодетекторный модуль используется для определения разницы в световом прохождении между плазмой обогащенной и обедненной тромбоцитами. Цельная кровь, разведенная кровь, плазма обогащенная тромбоцитами, отмытые тромбоциты, отмытые лейкоциты – все эти образцы могут быть измерены с помощью импедансной технологии. Корпорация «Хроно-лог» обладает патентом на применение этого метода.

Широкий спектр люминисцентных реакций (выброс АДФ, уровень ионизированного кальция, генерация супероксидов и др. ) может быть измерен при помощи ультра-чувствительной фотоумножительной трубки, которая испльзуется в люми-агрегометрах корпорации “Хроно-лог”. Люминисценция используется для детекции всех дефектов накопления и секреции. Этот метод также достаточно чувствительный для детекции гепарин-индуцированной тромбопении.

Тромбоэластограф Гематокоагулограф ГКГМ 4 -02 тромбоэластограф

ПРИМЕРЫ ГРАФИКОВ ОСНОВНЫЕ ИЗМЕРЯЕМЫЕ ПАРАМЕТРЫ CT (время коагуляции) — общая активность коагуляционной системы CFT (время образования сгустка) и a-угол (начальная скорость оборазования сгустка) – оценка функции тромбоцитов, действия фактора XIII, полимеризации фибрина, активности гепарина MA (или MCF) – качество сгустка, оценка его механических свойств LOT (время наступления фибринолиза) – оценка фибринолитической активности l-угол – скорость фибринолиза ро. ТЭГ » Анализатор гемостаза ро. ТЭГ » это современный 4 -х канальный компьютерный тромбоэластограф.

ИДЦ 2008 -2011 г. г. Автоматический коагулометр STA-R Evolution Roche Diagnostics, Франция

Гемостаз в ИДЦ

Спектр анализов лаборатории гематологии ИДЦ с учетом гомеостатических методов • Полный гематологический анализ • Миелограмма • Протромбиновое время и фибриноген • Коагулограмма стандартная • Ретикулоциты • Цитограмма (мазок из носа или глаза) • LE-клетки • Осмотическая резистентность эритроцитов • Ретракция плазменного сгустка • Агрегация тромбоцитов с АДФ • Агрегация тромбоцитов с ристоцетином • Агрегация тромбоцитов с арахидоновой кислотой • Агрегация тромбоцитов с коллагеном • Агрегация тромбоцитов с адреналином • Определение фактора Виллебранда • Активность фактора свертывания крови XII • Активность фактора свертывания крови • VIIIАктивность фактора свертывания крови IXАктивность фактора свертывания крови XI • Активность комплекса протеина С (скрининг) • Активность антитромбина III • Активность протеина С • Активность плазминогена • Активность альфа-2 -антиплазмина • АПТВ с люпус-чувствительным кефалином • Время кровотечения • Коррекционно-ингибиторная проба по АПТВ Коррекционно-ингибиторная проба по ПТИ • Определение групповой принадлежности по АВО • Определение резус-антигенов • Фибринолиз • Активность фактора свертывания крови II • Активность фактора свертывания крови VII • Активность фактора свертывания крови X • Активность фибриназы (фактор XIII) • Коагулограмма (тромбогенный риск) Протромбиновое время (с МНО) • Фибриноген • Активированное время рекальциф Активированное парциальное тро • Тромбиновое время • Растворимые фибрин-мономерные • Содержание Д-димера

— Диагностика тромбофилий — Диагностика гемофилий — Мониторинг противо-гемофилийной терапии для пациентов с наличием ингибитора фактора VIII — Мониторинг антикоагулянтной терапии, направленной на ингибирование тромбина и фактора Xa ( гепарин )TGA-анализ – универсальный метод оценки тромбогенного потенциала гемостаза

• CEVERON-ALPHA для 4 методов анализа: • — коагулометрия АЧТВ, ПВ, ТВ, Фибриноген, Протеин С, ВА, дефицит факторов свертывания, мутация Лейдена и другие. • — фотометрия С 1 -ингибитор, F VIII, Протеин С, АТ-III и другие. • — турбидиметрия Д-димер, ВА, С-реактивный белок и другие. • — флуориметрия кинетика образования эндогенного тромбина (для модификации Ceveron TGA) • Автомат CEVERON-ALPHA TGA позволяет проводить уникальный флуориметрический TGA-анализ • 360/430 нм • Длины волн фотометрического блока: 405, 570, 630 и 740 нм • Скорость проведения анализов на CEVERON-ALPHA до 70 образцов/час (ПВ) (Стационар на 300 -400 больных)

Спасибо за внимание!