Оңтүстік Қазақстан Южно-Казахстанская Мемлекеттік Фармацевтика Государственная Академиясы

Оңтүстік Қазақстан Южно-Казахстанская Мемлекеттік Фармацевтика Государственная Академиясы Фармацевтическая Академия СРИ Тема: Методы лабораторного исследования гемостаза. : Выполнила: Мынбаева Д. Группа: 601 -ТКБ Проверила: Карабасова Б. К

“Методы лабораторного исследования гемостаза” 1. Скрининговые исследования 2. Исследование сосудисто- тромбоцитарного звена гемостаза

Лабораторные методы, используемые в исследовании гемостаза: •

Клоттинговые методы: - основаны на определении времени образования, а также растворения сгустка в стандартных условиях; - определяется активность отдельных звеньев системы свертывания и фибринолиза.

Хромогенные методы: - это хромогенное (оптическое) определение хромогенных (окрашенных) веществ (нитроанилина) связанных с субстратами (белками) специфических реакций; - так определяется активность отдельных компонентов свертывающей, антитромбиновой или фибринолитической системы. Пример: Стрептокиназа + плазминоген** = плазмин + свободный

Скрининговые тесты гемостаза: 1) Определение резистентности микрососудов: - манжеточная проба; -баночная проба; -проба щипка 2) Определение времени кровотечения: - по Дьюка; - по Айви; - по Шитиковой 3) Определение времени свертывания крови: - по Ли и Уайту

Манжеточная проба Выполнение: Создают венозный стаз путем дозированного сжатия плеча манжеткой тонометра (90 мм на 5 минут) и подсчитывают количество петехий в в верхней ладонной поверхности предплечья и локтевого сгиба. Клиническое значение: Положительная проба возможна при врожденной ломкости капиляров, тромбоцитопении, значительной тромбоцитопатии, гиповитаминозе С, болезни Виллебранда, приеме непрямых антикоагулянтов, гормональном сдвиге у женщин, ДВС-синдроме.

Время кровотечения - тест общего состояния сосудисто- тромбоцитарного звена гемостаза Выполнение: Определяют длительность кровотечения из микрососудов кожи после дозированного (3 мм) прокола ее ланцетом. Клиническое значение: Удлинение времени кровотечения возможна при значительной тромбоцитопении, тяжелых формах тромбоцитопатии (тробастения Гланцмана), болезни Виллебранда, приеме непрямых антикоагулянтов, гормональном сдвиге у женщин, ДВС-синдроме.

Оценка работы первичного гемостаза

Оценка работы первичного гемостаза Прибор для количественной оценки гемостатической функции тромбоцитов Platelet Function аnalyzer-100

Определение количества 1) В мазке по Фонио: не может быть рекомендован из-за малой точности. 2) Подсчет в камере Горяева после гемолиза эритроцитов оксалатом аммония. 3) С помощью автоматического счетчика в венозной крови, стабилизированной ЭДТА.

Исследование функции тромбоцитов Выполняется из венозной крови, стабилизированной цитратом натрия в соотношении 1/9; в течении 1 часа после забора крови. Богатая тромбоцитами плазма - отбирают после центрифугирования крови при 1000 оборотов /6 минут Бедная тромбоцитами плазма - отбирают после центрифугирования крови при 3000 оборотов/ 15 минут

Исследование функции тромбоцитов:

Исследование агрегации тромбоцитов • ТУРБИДИМЕТРИЧЕСКИЙ МЕТОД Борна - основан на регистрации изменений светопропускания богатой тромбоцитами плазмы после активации индукторами. • Индукторы агрегации - естественные или искуственные активаторы: • АДФ; • Адреналин; • Коллаген; • Ристоцетин и др.

Агрегометр HELENA PACKS-4 • СПИСОК МЕТОДИК: • Агрегация с АДФ • Агрегация с эпинефрином • Агрегация с коллагеном • Агрегация с ристоцетином • Агрегация с арахидонатом • Активность фактора фон Виллебранда (по ристоцетин-кофакторной

Агрегометры AP 2110 Анализатор агрегации тромбоцитов предназначен для Анализатор агрегации исследования in vitro тромбоцитов АMS 600 агрегационных свойств тромбоцитов турбидиметрическим методом.

Агрегометры Агрегометр LA 230 Агрегометр тромбоцитарный ( " БИОЛА" Россия) "CHRONOLOG CORP. " (США) Двухканальный анализатор агрегации Агрегометр 430 (одноканальный) тромбоцитов Агрегометр 440 VS(двухканальный) Агрегометр 470 VS(четырехканальный) Прибор позволяет проводить в каждом Оптический анализатор агрегации канале исследования агрегации тромбоцитов служит для исследования тромбоцитов методом светопропускания и агрегационных свойств тромбоцитов в определения среднего радиуса плазме. тромбоцитарных агрегатов.

Оптическая агрегометрия используется для исследования процессов агрегации на плазме обогащенной тромбоцитами (PRP), а также для измерения агглютинации латексных частиц и для исследования изменения формы взвешенных частиц. Оптические агрегометры «Хроно-лог» с успехом используются во всем мире уже многие годы, начиная с 1967 г и являются «золотым» стандартом в оптической агрегометрии. Двойной инфра-красный луч и чувствительный фотодетекторный модуль используется для определения разницы в световом прохождении между плазмой обогащенной и обедненной тромбоцитами. Цельная кровь, разведенная кровь, плазма обогащенная тромбоцитами, отмытые тромбоциты, отмытые лейкоциты – все эти образцы могут быть измерены с помощью импедансной технологии. Корпорация «Хроно-лог» обладает патентом на применение этого метода.

Широкий спектр люминисцентных реакций (выброс АДФ, уровень ионизированного кальция, генерация супероксидов и др. ) может быть измерен при помощи ультра-чувствительной фотоумножительной трубки, которая испльзуется в люми-агрегометрах корпорации “Хроно-лог”. Люминисценция используется для детекции всех дефектов накопления и секреции. Этот метод также достаточно чувствительный для детекции гепарин- индуцированной тромбопении.

Тромбоэластограф Гематокоагулограф ГКГМ 4 -02 тромбоэластограф

ро. ТЭГ " Анализатор гемостаза ро. ТЭГ " это современный 4 -х канальный компьютерный тромбоэластограф. ОСНОВНЫЕ ИЗМЕРЯЕМЫЕ ПАРАМЕТРЫ CT (время коагуляции) - общая активность коагуляционной системы CFT (время образования сгустка) и a-угол (начальная скорость оборазования сгустка) – оценка функции тромбоцитов, действия фактора XIII, полимеризации фибрина, активности гепарина MA (или MCF) – качество сгустка, оценка его механических свойств LOT (время наступления фибринолиза) – оценка фибринолитической активности l-угол – скорость фибринолиза ПРИМЕРЫ ГРАФИКОВ

ИДЦ 2008 -2011 г. г. Автоматический коагулометр STA-R Evolution Roche Diagnostics, Франция

Гемостаз в ИДЦ

Спектр анализов лаборатории гематологии ИДЦ с учетом гомеостатических методов • Полный гематологический анализ • Активность плазминогена • Миелограмма • Активность альфа-2 -антиплазмина • Протромбиновое время и фибриноген • АПТВ с люпус-чувствительным кефалином • Коагулограмма стандартная • Время кровотечения • Ретикулоциты • Коррекционно-ингибиторная проба по АПТВ • Цитограмма (мазок из носа или глаза) Коррекционно-ингибиторная проба по ПТИ • LE-клетки • Определение групповой принадлежности по • Осмотическая резистентность эритроцитов АВО • Ретракция плазменного сгустка • Определение резус-антигенов • Агрегация тромбоцитов с АДФ • Фибринолиз • Агрегация тромбоцитов с ристоцетином • Активность фактора свертывания крови II • Агрегация тромбоцитов с арахидоновой • Активность фактора свертывания крови V кислотой • Активность фактора свертывания крови VII • Агрегация тромбоцитов с коллагеном • Активность фактора свертывания крови X • Агрегация тромбоцитов с адреналином • Активность фибриназы (фактор XIII) • Определение фактора Виллебранда • Коагулограмма (тромбогенный риск) • Активность фактора свертывания крови XII Протромбиновое время (с МНО) • Активность фактора свертывания крови • Фибриноген • VIIIАктивность фактора свертывания крови • Активированное время рекальциф IXАктивность фактора свертывания крови XI Активированное парциальное тро • Активность комплекса протеина С (скрининг) • Тромбиновое время • Активность антитромбина III • Растворимые фибрин-мономерные • Активность протеина С • Содержание Д-димера

TGA-анализ – универсальный метод оценки тромбогенного потенциала гемостаза - Диагностика тромбофилий - Диагностика гемофилий - Мониторинг противо-гемофилийной терапии для пациентов с наличием ингибитора фактора VIII - Мониторинг антикоагулянтной терапии, направленной на ингибирование тромбина и фактора Xa (гепарин)

• CEVERON-ALPHA для 4 методов анализа: • - коагулометрия АЧТВ, ПВ, ТВ, Фибриноген, Протеин С, ВА, дефицит факторов свертывания, мутация Лейдена и другие. • - фотометрия С 1 -ингибитор, FVIII, Протеин С, АТ-III и другие. • - турбидиметрия Д-димер, ВА, С- реактивный белок и другие. • Автомат CEVERON- • - флуориметрия ALPHA TGA позволяет кинетика образования проводить уникальный эндогенного тромбина флуориметрический TGA- (для модификации Ceveron анализ TGA) • 360/430 нм • Длины волн фотометрического блока: 405, 570, 630 и 740 нм • Скорость проведения анализов на CEVERON- ALPHA до 70 образцов/час (ПВ) (Стационар на 300 -400 больных)

Спасибо за внимание!