Некоторые аспекты применения экспресс тест-систем в диагностике

«Некоторые аспекты применения экспресс тест-систем в диагностике инфекционных, сердечно-сосудистых и других заболеваний» ООО «Меди-Линк» , г. Москва

ранняя диагностика беременности была обычным делом в Древнем Вавилоне 700 лет до н. э. Местная акушерка скручивала тампон из овечьей шерсти, пропитывала его соком определенного растения (название волшебной травы держали в строгой тайне) и вводила во влагалище пациентки на 3 дня, попросив воздержаться от секса. Извлеченный тампон опускали в раствор квасцов (минеральных солей): если жидкость краснела, значит, в семье действительно ожидалось пополнение. •

В свое время появление лакмусовых бумажек стало прорывом в технике определения кислотности: вместо неудобных тестов достаточно обмакнуть бумагу. Возможно, такой же прорыв осуществит разработка Джорджа Уайтсайдза, «бумажная лаборатория» , дешевый и простой способ проведения аналитических реакций, требующий для работы микроскопические количества вещества. Джордж Уайтсайдз известен многочисленными разработками в области нанотехнологии

Принцип метода иммунохроматографии (ИХА) n Образец (цельная кровь, сыворотка, плазма, моча, экстракт мазков или фекалий), нанесенный на подложку, движется по мембране и доходит до зон, где находятся специфически связывающиеся агенты (антитела или антигены). В этих зонах происходит специфическое связывание тестируемого белка (антигена), находящегося в образце со специфическими антителами к нему (конкретная информация – в инструкциях к каждому тесту).

Варианты иммунохроматографических тестов Существует два варианта тестов ИХА: Тест – кассеты Тест – полоски

Преимущества экспресс-тестов n n n n простая процедура анализа не требуют приборного оборудования индивидуальное тестирование время анализа от 5 до 15 минут доступная цена ~ 2 -3 $ за тест визуально читаемые результаты длительные сроки хранения при комнатной температуре использование для анализа не только образцов сыворотки или плазмы, но и цельной крови, а так же биологического материала мазков и смывов

Современный портфель экспресс-тестов для диагностики острых сосудистых катастроф на догоспитальном этапе

Итого: 332 (31, 3%)

Маркеры некроза миокарда Количество дней после развития ИМ Anderson, J. L. et al. J Am Coll Cardiol 2007; 50: e 1 -e 157

Тропонин I или Тропонин Т

Недостатки тропонина T 1) Двухфазный характер выделения в кровь тропонина T предполагает наличия фазы снижения (или как минимум фазы плато) концентрации маркера в крови при существующем остром инфаркте миокарда. 2) Большие разбросы времени максимального повышения и снижения концентрации тропонина T в крови до исходного значения говорят о меньшей достоверности поведения данного кардиомаркера при развитии острого коронарного синдрома. 3) Возврат концентрации тропонина T в крови к исходному уровню на 14 день, ограничивает применение этого маркера в диагностике реинфарктов в большей степени, чем тропонина I. 4) Повышение уровня в крови тропонина T при ХПН и возможность перекрестной реакции АТ к этому кардиомаркеру с белками скелетных мышц. Недостатки тропонина I 1) В плазме 90% тропонина I находится в связанном виде. 2) Нестандартизованность методов анализа тропонина I – диагноз ОИМ ставится на основании мониторирования уровня кардиомаркера в крови. Весьма сомнительно, что мониторирование уровня в крови тропонина I будет осуществляться различными лабораторными системами.

В отделении кардиореанимации ГКБ № 50 у больных с признаками инфаркта миокарда давностью не более 24 часа был проведен экспресстест на определение тропонина I, ACON. Все результаты были положительны. № Тn I Tn T Ас. Т, Ед/л ЛДГ, Ед/л 1 + + 279 2270 2 + + 30 677 3 + + 111 718 4 + + 169 2259 5 + - 60 572 6 + + 72 695 7 + + 30 677 8 + + 109 1257 9 + + 70 772 10 + + 40 1156 11 + - 87 478 12 + - 76 564 13 + + 60 890 14 + - 72 734 15 + + 80 1020

Тропонин I или T? Повышение уровня к 96 часам – Исходы к 30 дню после включения пациентов с высоким уровнем c. Tn. I и c. Tn. T 100% у c. Tn. I и c. Tn. T c. Tn. I Luscher, M. S. et al. Circulation 1997; 96: 2578 -2585 Copyright © 1997 American Heart Association

Методы определения маркеров некроза миокарда Качественный (ACON, США, метод-иммунохроматографический) n n n c. Tn. I (>0, 5 нг/мл) МВ-КФК (>5 нг/мл) миоглобин (>50 нг/мл) Точка приложения: -Догоспитальный этап: приемное отделение, СМП, поликлиника Плюсы: -Быстрая диагностика пациента с «болью в груди» -Не требуется специального хранения и оборудования -Ответ «да-нет» -Возможно использование цельной крови/ сыворотки/ плазмы

ТРОМБОЭМБОЛИЯ ЛЕГОЧНОЙ АРТЕРИИ (ТЭЛА) Частота ТЭЛА у больных, умерших в различных стационарах А. Л. Верткин и соавт. , 2007

Факторы риска n n n n Возраст (старше 50 лет) Длительный постельный режим или отсутствие активности (длительный перелет в самолете, долгое путешествие на машине, в поезде) прием оральных контрацептивов или гормональной терапии Операции (особенно на тазовых органах) беременность и роды массивная травма ожоги рак инсульт инфаркт миокарда операции на сердце переломы бедренной кости или шейки бедра нарушение тромбообразования анамнез глубоких венозных тромбозов

Стандартные методы подтверждения ТЭЛА, ТГВ – доступны ли они Вентиляционноеперфузионная сцинитиграфия легких Дуплексное Допплеровское исследование сосудов ног КТ-ангиография

Качественный тест для определения Д-димера Точка приложения: -Приемное отделение, реанимационное отделение, - СМП, поликлиника Плюсы: -Быстрая диагностика пациента с подозрением на ТГВ, - легочную эмболию, ДВС- синдром - Не требуется специального хранения и оборудования - Ответ «да-нет» - Возможно использование цельной крови - Результаты исследования через 10 мин

В результате проведения упрощенного качественного теста для диагностики Д-димера компании «Clearview» была выявлена 100% чувствительность в 527 случаях исследования амбулаторных пациентов с подозрением на легочную тромбоэмболию Анализ Упрощенный качественный тест для диагностики Dдимера компании "Clearview" Чувствитель-ность Специфичность приведенное значение Набор STA Liatest D-Di компании "Diagnostica Stago" 47, 9% 100% (92, 5%-100%)* (43, 3%-52, 6%)* (98, 4%-100%)* 100% 48, 8% 100% (92, 5%-100%)* (44, 1%-53, 4%)* (98, 4%-100%)* 100% 47, 5% 100% (98, 2%-100%)* (92, 5%-100%)* Новый тест для диагностики D-димера компании "bio. Merieux Vidax" 100% (42, 7%-52, 3%)* * = 95% Доверительный Интервал

Экспресс-тесты для диагностики инфекционных заболеваний ВИЧ 1 & 2 Гепатит В Гепатит С Хламидиоз Сифилис Стрептококк А Туберкулез Хеликобактериоз

Алгоритм лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции I этап – скрининговые исследования на ИФА тест-системе с антигенами ВИЧ-1 и ВИЧ-2 Положительный результат II этап – референтное исследование на 2 -3 ИФА тест-системах Положительный результат IIIэтап – экспертное исследование методом иммуноблотинга Дополнительные методы экспертной диагностики ВИЧ - инфекции окончательный результат через две недели Метод ПЦР Молекулярная гибридизация

ОНКОМАРКЕРЫ ПРОСТАТ-СПЕЦИФИЧЕСКИЙ АНТИГЕН КАРЦИНОЭМБРИОНАЛЬНЫЙ АНТИГЕН АЛЬФА-ФЕТОПРОТЕИН СКРЫТАЯ КРОВЬ В КАЛЕ

Портативный иммунофлуоресцентный экспресс- анализатор Triage Meter Pro Диагностика: - инфаркта миокарда тромбоза глубоких вен, ТЭЛА ДВС-синдрома сердечной недостаточности почечной недостаточности(регистрация в МЗ РФ!) дифференциальная диагностика синдрома одышки - определение наличия в моче метаболитов ряда наркотических веществ

Экспресс-анализатор Triage® Meter Pro: три простых шага 1. Добавьте кровь в диагностическую панель 2. Вставьте панель в экспресс-анализатор Triage® Meter Pro 3. Прочитайте результаты

Пример отображения результатов на экране дисплея

Определение маркеров некроза миокарда Количественный – РОС диагностика (Triage® Cardiac Panel, производитель БИОСАЙТ, США Метод - иммунофлюоресцентный): n Тропонин I (0, 05 -30 нг/мл) n Миоглобин (5 -500 нг/мл)К n Креатинкиназа-МВ (1 -80 нг/мл) Точка приложения: Госпитальный этап Плюсы: Быстрая диагностика пациента с «болью в груди» Стратификация риска пациентов с ОКС Уменьшает время диагностики до 15 минут Комбинация маркеров помогает установить ранний и поздний ИМ Определение маркеров некроза миокарда в динамике

Определение Д-димера РОС - Количественный: Метод –иммунофлуоресцентный (антитела к к 3 B 6 Ддимеру) (Triage® D-dimer test, производитель БИОСАЙТ, США): n Коэффициент корреляции с методами ELISA составляет 92 -97%. n при подозрении на ТЭЛА, ТГВ, ДВС n Результат за 15 минут n Диапазон измерений: 100 – 5000 нг/мл n Верхняя граница нормы 400 нг/мл Точка приложения: стационар РОС, лаборатория Плюсы: Быстрая диагностика пациента с подозрением на ТЭЛА, ТГВ Клиническая эффективность сопоставима с центральной лабораторией Возможно использование цельной крови либо плазмы, обработанной ЭДТА Результат за 15 минут Определение д-димера в динамике Feied C. Pulmonary embolism. Available at: http: //www. emedicine. com/emerg/topic 490. htm. Accessed April 11, 2007. 2. Triage D-Dimer Test Package Insert, Revision B, May 2005. 3. Dempfle CE, Zips S, Ergul H, Heene DL. The Fibrin Assay Comparison Trial (FACT): evaluation of 23 quantitative D-dimer assays as basis for the development of D-dimer calibrators. Thromb Haemost. 2001; 85: 671 -678. 4. Stein PD, Hull RD, Patel KC, et al. D-dimer for the exclusion of acute venous thrombosis and pulmonary embolism: a systematic review. Ann Intern Med. 2004; 140: 589 -602. 5. Lee-Lewandrowski E, Van Cott EM. Evaluation of the Biosite Triage quantitative whole blood D-dimer assay and comparison with the bio. MÈrieux VIDAS® D-dimer exclusion test: validation and utility for use in the central laboratory and at the point of care. Point of Care. 2005; 4: 133 -137.

Экспресс-анализатор Триайдж Метер Про Определение BNP Количественный – РОС диагностика (Triage®, производитель БИОСАЙТ, США Метод - иммунофлюоресцентный): n Чувствительность теста - 95% Специфичность анализа – 98% (при концентрации 100 пг. /мл. ) n Достоверность отрицательного диагностического уровня (<100 пг. /мл. ) составляет 98% * Точка приложения: Госпитальный этап, поликлиника Плюсы: Быстрая диагностика СН – время измерения 15 минут Сортировка больных с одышкой на догоспитальном этапе (диф. диагноз) Стратификация риска острого коронарного синдрома, прогноза СН Использование маркера систолической и диастолической дисфункции желудочков сердца Ведение и оценка терапии у больных с ХСН *Maizel A. , Krishnaswamy P. Et al. “Rapid mearsurement of B-Type Natriyuretic Peptide In the Emergensis Diagnosis of Heart Failure” The New Journal of Medicine, 2002, Vol. 347, 161 -167 Maizel A. , Koon J. , Krishnaswamy P. , Kazanera N. “Utility of of B-natriyuretic Peptide is a rapid, point-of-care test for screening patients undergoing echocardiography to determine left ventriculare disfunction” American Heart Journal 2001, 141, 367 -374

Диагностические панели Быстрая объективная диагностика сердечной недостаточности и стратификация риска острого коронарного синдрома Определения уровня в крови В-натрийуретического пептида - маркера систолической и диастолической дисфункции желудочков сердца Быстрая дифференциальная диагностика синдрома одышки в течение небольшого промежутка времени Комплексное определение креатинкиназы-МВ, миоглобина, тропонина I, Внатрийуретического пептида и Д-димера Ранняя диагностика острого инфаркта миокарда одновременное измерение в крови уровня маркеров миоглобина, тропонина I, креатинкиназ-МВ Быстрое исследование пациентов с подозрениями на синдром диссеминированного внутрисосудистого свертывания, тромбоэмболию легочной артерии и тромбоз глубоких вен нижних конечностей Одновременная диагностика инфаркта миокарда и оценка риска сердечной недостаточности Определение наличия в моче метаболитов ряда наркотических средств количественное определение содержания в крови Д-димера Количественное определение Тропонина I, креатинкиназа-МВ, миоглобина, Внатрийуретического пептиада Спектр: до 10 показателей

Преимущества анализатора Triage Meter n Расширенное меню для проведения иммуноанализа n Мультимаркерные диагностические панели n Использование цельной крови для анализа n Результаты анализа через 15 минут n Возможность работа от батареи(портативность) n Три вида встроенного контроля n Встроенный принтер ( результаты выдаются в электронном и печатном виде) n Полная комплектация ( в отличие от других анализаторов) n Невысокая стоимость Верное решение для проведения быстрой диагностики непосредственно на месте оказания медицинской помощи !

Вопросы?