Наш друг ВЬЮН Misgurnus fossilis L Яйцеклетка

Наш друг ВЬЮН Misgurnus fossilis L.

Яйцеклетка, микропиле и сперматозоид вьюна

Кортикальная реакция, образование оболочки оплодотворения

Воспринимающий бугорок и воронка микропиле; выделение 2 -го полярного тельца

а –метафаза II мейоза; б, в – анафаза II мейоза и головка сперматозоида с «сиянием» ; г – телофаза II мейоза; д –отделение 2 -го полярного тельца, пузыревидный мужской и компактный женский пронуклеусы; е, ж – сближение и контакт пронуклеусов; з – метафаза 1 -го деления дробления

Раннее дробление зародышей вьюна

ГАСТРУЛА БЛАСТУЛА ОРГАНОГЕНЕЗ ВЫЛУПЛЕНИЕ 5 суток развития

Опыты с трансплантацией ядер зародышевых клеток в неоплодотворенные яйцеклетки вьюна Misgurnus fossilis L.

Схема преобразований в оплодотворенных и искусственно активированных яйцеклетках вьюна

СХЕМА ОПЫТОВ ПО ТРАНСПЛАНТАЦИИ ЯДЕР

Пересадка ядра через 5 -10 мин после активации: анафаза 2 мейоза, трансплантированное ядро, контакт т. ядра и пронуклеуса (30 мин после пересадки)

Пересадка ядра через 15 мин после активации, трехполюсный митоз (60 -70 мин после пересадки)

Пересаженное ядро на стадии профазы в цитоплазме реципиента (пересадка через 30 - 60 мин от момента активации (30 мин после пересадки)

Ядро пересажено в краевую зону бластодиска; аномальное дробление яйцеклетки с несколькими ядрами

Ядро пересажено в центр бластодиска через 30 -60 мин от момента активации: метафаза , анафаза и телофаза 1 -го деления дробления

Гистологический срез бластодермы интактной бластулы: видны клетки на разных стадиях митотического цикла; пмя – полиморфные ядра

Диссоциированные бластомеры-доноры: видны одно- , двух- и четырехядерные, а также «безъядерные» клетки

Развитие яйцеклеток-реципиентов при использовании в качестве доноров «безъядерных» и многоядерных бластомеров: деление митотических центров без цитотомии (доноры на стадии промета-, мета- и анафазы); несколько «маленьких» ядер (доноры на стадии ранней интерфазы, многоядерные бластомеры )

Бластомеры-доноры на оптимальной для пересадки фазе митотического цикла с чётко оконтуренным ядром на стадии поздней интерфазы или ранней профазы

Схема использования в качестве доноров ядер бластомеров на разных стадиях клеточного цикла: а – поздняя интерфаза-профаза (результат пересадки – нормальное развитие реципиента); б, в – анафаза, ранняя телофаза (деление митотических центров без цитотомии); г, д – поздняя телофаза , «многояднрный бластомер)

Клон генетически идентичных зародышей вьюна, полученных в результате пересадки ядер клеток бластулы в неоплодотворенные яйцеклетки

Цитоспектрофотометрический анализ экспериментальных зародышей: количество ДНК соответствует диплоидному набору хромосом

Другие экспериментальноэмбриологические исследования

Опыты с холодовым шоком: контакт трансплантированного диплоидного ядра бластулы и двух гаплоидных женских пронуклеусов, полученная в результате тетраплоидная личинка вьюна

Ксеногенные трансплантации ядер донор - гаструла травяной лягушки, реципиенты– неоплодотворенные яйцеклетки вьюна: нормальная и аномальная бластулы с «инвагинацией» (донорспецифическое влияние ядра); нормальное интерфазное ядро в цитоплазме яйцеклетки вьюна; различные хромосомные аномалии; дробление ядерно-цитоплазматических гибридов; попытка образования «бластоцеля»

1 – «вьюнио» (донор - бластула данио); 2 - «вьюшка» (донор – мезодерма гаструлы травяной лягушки); 3, 4 – «вьюнопус» ( донор – мезодерма гаструлы шпорцевой лягушки)

1, 2, 3, 4, 5 – «вьюшь» (донор -2 -хбластомерный зародыш мыши. 1, 2, 3 – целый бластомер, многополюсный митоз, интерфазные ядра в недробящихся яйцеклетках вьюна; 4, 5 – нормальное дробление, развитие до ст. гаструлы); 6, 7 – «вьюмен» (донор – буккальный эпителий человека, дробление до 2 – 4 -хклеточной стадии)

Окраска ядер зародышевых клеток вьюна флуоресцирующим витальным красителем Хёхст 33258

Схема опытов с криоконсервацией зародышевых клеток и последующей пересадкой их ядер в неоплодотворенные яйцеклетки вьюна

1, 2 – окрашенное Хёхстом ядро, пересаженное в яйцеклетку вьюна; ; 3, 4, 5, 6 – окрашенные Хёхстом клетки, замороженные с использованием различных криопротекторов (пропандиол, глицерин, диметилсульфоксид), после процедуры оттаивания

1 - ядро клетки гаструлы травяной лягушки, пережившее процедуру замораживанияоттаивания, в цитоплазме яйцеклетки вьюна. 2, 3 – диссоциированные клетки гаструлы полученного ядерноцитоплазматического гибрида. Отчетливое свечение ядер-потомков.