Направленная терапия рака Миненкова Ольга Sigma-tau Sp A

Скачать презентацию Направленная терапия рака Миненкова Ольга Sigma-tau Sp A

Targeted therapy.pptx

Количество слайдов: 42

Направленная терапия рака Миненкова Ольга, Sigma-tau, Sp. A Pomezia (Rome)

antigen binding site VL light chain VH VH CL CH 1 Y Y CH 2 heavy chain CL VL Fab (fragment having antigen binding site) hinge region CH 2 CH 3 Ig. G Fc (fragment that crystallizes)

Ig. G 1, Ig. G 2, Ig. G 3, Ig. G 4

Механизм действия антител 1. Блокировка сигнала деления раковой клетки 2. ADCC (antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity) 3. CDC (complement-dependent cytotoxicity) 4. Cтимулирование приобретенного иммунитета 5. Воздействие на микросреду опухоли 6. Продолжительность жизни антител

Блокировка сигнала деления раковой клетки Erb. B 2 Erb. B 3 Механизмы: 1. Ингибирование связывания лиганда/рецептора 2. Ингибирование димеризации рецептора 3. Интернализация рецептора Терапия EGFR: cetuximab (химерное антитело), panitumumab (человеческое от трансгенных мышей) gefitinib erlotinib Терапия HER 2/Erb. B 2: trastuzumab (гуманизированное) pertuzumab (гуманизированное) ado-trastusumab emtansine (ADC) lapatinib

Эффекторные функции Fc

Эффекторные функции Fc ADCC • Эффекторные функции сосредоточены в Fc домене • Терапевтические антитела в основном Ig. G 1 типа • Fc cвязывает рецепторы Fcg. RI, Fcg. RIII (ADCC) CDC

Технологии усиления ADCC 1. Модификация аминокислотной последовательности Fc: S 298 A, E 333 A и K 334 A F 243 L, R 292 P, Y 300 L, V 305 I и P 396 L S 239 D, A 330 L, I 332 E 2. Модификация олигосахарида Fc домена: N-ацетилглюкозамин фукоза

Yamane-Ohnuki et al. , 2004

Эффекторные функции Fc ADCC • Fc cвязывает C 1 q (CDC) • Регуляторные белки комплемента CD 35, CD 46, CD 55, CD 59 • Аминокислотные замены увеличивают сродство Fc домена к C 1 q и усиливают CDC • Получение гибридной тяжелой цепи G 1/G 3 CDC

Технология усиления CDC • Повышение CDC в опытах in vitro и на макаках • Сохранение ADCC на уровне Ig. G 1 • ADCC не зависела от присутствия фукозы

Эффекторные функции Fc. Изменение фармакокинетики антител Homeostasis Ig. G • После введения антитела циркулируют в крови около 2 недель • Гомеостаз антител зависит от рецептора Fc. Rn • Связывание c рецептором является р. Н-зависимым

Zalevsksky J et al. , 2010 Nat Biotechnology, 28(2): 157– 159 Время жизни– повышенная терапевтическая эффективность Бевацизумаб – гуманизированное анти-VEGF Ig. G 1 (Avastin, Genenech) M 428 L/N 434 S – повышенная аффинность к Fc. Rn (11 раз, p. H 6. 0) Aнти-VEGF Xtend-VEGF ФK на обезьянах 4 mg/kg Продление полужизни с 9. 7 до 31. 1 дней, 3. 2 -кратное продление Антитело используется для лечения рака прямой и толстой кишки, легких, молочной железы, почек. Цетуксимаб - гуманизированное anti-EGFR 1. 5 день 4. 7 дня 3. 1 -кратное продление для лечения рака прямой и толстой кишки, головы и шеи

на мышах На мышах m. Fc. Rn-/-, h. Fc. Rn+ От 3 до 12 дней, 4 -кратное продление 2. 9 до 13. 9 дней , 5 -кратное

Трансгенные мыши h. Fc. Rn Человеческий трастлантант опухоли SKOV-3 (25 -60 мм 3) 5 mg/kg every 10 days (p=0. 028) Эпидермоидная саркома A 431 (p=0. 005) Первый раз показана корреляция между ФK и противоопухолевой активностью антител при повышении аффинности к Fc. Rn.

Igawa T et al. , 2010, Nature Biothecnology 28(11), 1203 Тоцилизумаб (TCZ) – гуманизированное Ig. G против IL-6 R, применяется для лечения умеренного и агрессивного ревматоидного артрита Стандартные методы– повышение аффинности к AG, усиление связывания с Fc. Rn His сканирование CDRs и нескольких framework позиций p. Ka около p. H 6 Поверхностный плазмонный резонанс для определения Нis мутаций, которые влияют На p. H взаимодействия с рецептром IL-6 R Tyr 27, Ser 31, Trp 35 в HC His Asp 28, Tyr 32, Arg 53 His, и His 55 Leu в LC 2 мутанта Tyr 27, Ser 31, Trp 35 в HC и Asp 28, Tyr 32, Arg 53 в LC PH 1 Tyr 27, Ser 31 в HC и Tyr 32, Arg 53, His 55 в LC PH 2

TCZ TCZ-Fc. Rn PH 1 PH 2 -Fc. Rn PH 2 AM-Fc. Rn PH 1, PH 2 имели аффинность выше, чем TCZ при p. H 7. 4, в 2. 3 и 2. 8 раз и при p. H 6. 0 – 3. 8 и 3. 7 раз ниже Отношения между аффинностями p. H 7. 4/p. H 6. 0 составляло 19 и 22 раза AM – аффинность в 100 раз выше, Fc. Rn N 434 A – 3 -4 -кратное усиление связывания Fc. Rn

На обезьянах внутривенно – 1 mg/kg Ab подкожно – 1 mg/kg IL-6, 3 -11 день AM – аффинность 52 p. M подкожно – 2 mg/kg Ab подкожно – 5 mg/kg IL-6, 5 -28 день TCZ 1 week PH 2 -Fc. Rn -4 weeks 75% recycled

Cтимулирование приобретенного иммунитета • Клетки опухоли после связывания с антителами подвергаются фагоцитозу, CDC, ADCC • Антигены захватываются эндоцитозом и процессируюся АРС, такими как DC • Антигены представляются на белках MHC II для CD 4+ Tклеток и на MHC I для CD 8+ Т-лимфоцитов. • Клинический ответ на Ритуксимаб наблюдается через 6 недель. • Клетки DC, загруженные опухолевыми клетками с антителами вызывают более сильный ответ CTL, чем DC нагруженные пептидами

Механизмы устойчивости к терапии антителами

Иммунотоксины (ADC)

Иммунотоксины (ADC) Антиген должен: 1. экспрессироваться на поверхности 2. экспрессироваться преимущественно на раковых клетках 3. интернализироваться после связывания с иммунотоксином 4. эффективно доставляться к лизосомам Антитело должно : 1. быть специфическим 2. высокоаффинным (Kd<10 n. M) 3. не иммуногенным (важно для повторных циклов иммунотерапии) 4. иметь оптимизированую ФК. . . . (медленный вывод из кровотока) 5. быть эффективными in vivo Линкер: 1. расщепляемый: - кислотно-лабильный - расщепляемый протеазами - дисульфидные мостики 2. нерасщепляемый Токсин: 1. Попадает в опухоль в малом количестве 0. 003 -0. 08% введеной дозы/грамм опухоли 2. Индекс цитотоксичности IC 50< 10 -9 M

Иммунотоксины (ADC)

Иммунотоксины (ADC) Конъюгация с лизином приводит к присоединению 0 -8 молекул токсина на легкой и тяжелой цепях в примерно в 20 позициях (40 лизинов на m. Ab). Конъюгация с цистеином приводит к присоединению 0 -8 молекул токсина. Сайт-специфическая конъюгация основана на двух инженеризованых цистеинах приводит к присоединению от 0 до 2 молекул токсина.

Иммунотоксины (ADC)

Противораковые вакцины Типы вакцин: Пептидные Вирусные Депротеизированная ДНК Опухолевые клетки Дендритные клетки Пептидные вакцины – эффектиность 2. 9% Rosenberg et al. , 2004, NIH Bethesda

Противораковые вакцины Вирусные вакцины – эффектиность 1. 9% Rosenberg et al. , 2004, NIH Bethesda

Противораковые вакцины 35 сообщений по клиническим испытаниям вакцин на 765 пациентах 3. 79% - объективный ответ

Иммунотерапия и терапия рака

Антитела и иммунотерапия рака

Воздействие на микросреду опухоли 1. TGF-b - производится Тreg и некоторыми опухолями - ингибирует цитотоксическкие лимфоциты - GC-1008 - Ig. G 4 против TGF-b - клинические испытания, фаза I, II для метастазирующей карциномы почек, меланомы, мезотелиомы 2. Ангиогенез/VEGF, VEGFR - Бевацизумаб (Авастин, Genentech) - предотвращает нормальное питание опухоли - Рамуцирумаб и IMC-18 F 1 – человеческие Ig. G 1 антитела, которые связывают VEGFR-2 и VEGFR-1 - IMC-3 G 3 связывает тромбоцитарный фактор роста PDGFR 3. Опухоль-ассоциированные фибробласты (CAF) - до 20 -50% клеток микросреды карциномы - производят белок активирующий фибробласты FAP - Сибротузумаб, гуманизированное антитело против FAP показало хорошие результаты в первой фазе клинических испытаний.