Начала ферментативной кинетики II СТАЦИОНАРНАЯ КИНЕТИКА ТРЕХСТАДИЙНЫХ ФЕРМЕНТАТИВНЫХ

Начала ферментативной кинетики II СТАЦИОНАРНАЯ КИНЕТИКА ТРЕХСТАДИЙНЫХ ФЕРМЕНТАТИВНЫХ РЕАКЦИЙ

Метод Слэтера =k 2 Km 1/k 1[E]0 Ks Vmax

Трехстадийная реакция k 1 k 2 k-1 k-2 k 3

Условия квазистационарности По [ES] d[ES]/dt = k 1[E][S]+ k-2[EP] - (k-1+ k 2)[ES]= 0 По [EP] d[EP]/dt = k 2[ES] - (k-2+ k 3)[EP] = 0

Из условий квазистационарности получим [ES] = [(k-2+ k 3)/k 2][EP] (1) (2)

После подстановки (1) и (2) в уравнение материального баланса найдем

Скорость реакции где

Полученное уравнение применимо к ферментативным реакциям с любым числом промежуточных комплексов

всех допустимых комбинаций из n элементарных k, не содержащих k 1 K m’ = всех допустимых комбинаций из n элементарных k, содержащих k 1 всех элементарных k c положительными индексами, кроме k 1 V m’ = всех допустимых комбинаций (n – 1) элементарных k, не содержащих k 1 и k-1

n – число промежуточных комплексов или стадий. Число элементарных констант будет на 1 больше, поскольку всегда будет реакция распада комплекса на продукты

Допустимые комбинации констант скорости – все возможные, кроме приведенных ниже: k-2 k 3; k-3 k 4; k-4 k 5; k-5 k 6 … - нет k 2 k-2 k 3; k-4 k 5 k 4 … - нет

стадии необратимы (k-2 = 0), и реакция протекает в условиях быстро устанавливающегося равновесия (k-1<< k 2) где ЕА - ацилферментное промежуточное соединение, которое разлагается под действием воды, Р 1, Р 2 - продукты реакции, образованные на стадиях ацилирования и деацилирования

KS - константа равновесия стадии ацилирования. Чем больше отношение kkat/Km, тем выше специфичность субстрата

При наличии возможности влияния на стадию ацилирования трехстадийной ферментативной реакции с помощью селективного эффектора где индекс (*) указывает на величину, измеренную в присутствии эффектора

1/V 0 1/k 3[E]0 -1/Ks 1/[S]0