Московский государственный университет имени М. В. Ломоносова

Московский государственный университет имени М. В. Ломоносова Факультет Фундаментальной Медицины Особенности восстановления фертильности и дефицита андрогенов у крыс с абдоминальным крипторхизмом на фоне терапии обогащёнными клеточными культурами. Курсовая работа студентки 603 гр. Каменской Ксении Андреевны Научный руководитель: Старший преподаватель кафедры урологии и андрологии ФФМ МГУ, к. м. н. Охоботов Дмитрий Александрович Работа выполнена на кафедре урологии и андрологии ФФМ МГУ Москва 2012

Актуальность темы l Частота относительной и абсолютной мужской инфертильности растёт и достигает среднем от 30 до 50 %. Так при анализе эякулята в фиксированной мужской популяции с 1973 по 1992 годы содержание сперматозоидов в эякуляте ежегодно снижалось на 2, 1%. l Показатели спермограммы за последние 50 лет снизились почти в 3 раза. Частота бесплодия в браке колеблется от 8 -29%. По оценке специалистов, в Европе бесплодны около 10% супружеских пар, в США - 8 -15%, в России от 8 до 17, 5% и в настоящее время нет тенденции к снижению. l Доля «мужского» фактора бесплодия в общей доле бесплодных браков составляет от 30 до 40 %

Задачи исследования l Оценить эффективность клеточной терапии в основных группах животных в сравнении с контрольной группой l Оценить изменения гормонального статуса у крыс с гипогонадизмом на фоне экспериментального лечения. l Определить возможности восстановления фертильности у крыс после экспериментальной терапии.

Моделирование экспериментального крипторхизма l Формирование двухстороннего абдоминального крипторхизма. l Операционный доступ осуществлялся путем послойного рассечения ножницами кожи и мышц передней брюшной стенки, по срединной и белой линиям живота на протяжении от мечевидного отростка до лобкового сочленения. Яичко с придатком и окружающей клетчаткой мобилизовалось и выводилось в операционную рану. Маркировочной нитью осуществлялась фиксация яичек за уздечку в области латеральных боковых каналов на расстоянии не менее 1, 5 -2, 0 см от края разреза. После повторения аналогичной фиксации яичка с другой стороны операционная рана зашивалась однорядными послойными обвивными швами. l Низведение яичек после двухстороннего крипторхизма. l Операционный доступ осуществлялся, как указано выше. После осуществления доступа яички подтягивались за клетчатку, послеоперационная спайка натягивалась и рассекалась ножницами, без наложения лигатуры, ввиду отсутствия в ней сосудов. Тупым путем восстанавливался канал в мошонку, как указано на рисунке № 2, и яичко за окружающую клетчатку низводилось в мошонку. Фиксации яичка в мошонке не производилось, так как натяжение тканей отсутствовало. Затем рана послойно наглухо ушивалась.

Рис. 1 Формирование фиксирующей спайки Рис. 2 Восстановление мошоночного канала

Материалы и методы Изначаль Низведение Параметры Сроки после низведения но яичек в мошонку Сутки 0 21 сутки 14 28 72 108 Исследование тестостерона, ЛГ и + + + - - ФСГ (нг/мл) Гистология ткани яичек - + + + - - Исследование индекса + + + - - сперматогенеза Исследование популяции клеток + + + - - Лейдига Оценка фертильности - - - + +

Результаты гистологического исследования яичек Гистологическая картина ткани семенников после 2 х семенников после 3 -х семенников после 4 -х недельной экспозиции брюшной полости.

Результаты гистологического исследования яичек l В группе А были выявлены следующие изменения*: в большинстве канальцев было выявлено запустевание, сопровождающееся критическим снижением количества сперматогоний 1 порядка. Отмечались признаки блокады сперматогенеза на ранних стадиях. l У животных группы Б* отмечен удовлетворительный сперматогенез в большинстве канальцев, с развитием сперматогенного эпителия до сперматозоидов. В этих группах отмечено наибольшее количество наступления беременностей у самок и наибольшее количество фертильных самцов. l В контрольной группе* отмечено, что практически все семенные канальцы не имеют признаков сперматогенеза, а животные инфертильны. Большинство канальцев в спавшемся состоянии, имеет место синдром «одних клеток Сертоли» . Иногда встречаются канальцы с сохранным сперматогенезом, но они являются редким исключением. l *методом иммуногистохимии с антителами к DAZL, DDX, Stella

Изменения гормонального профиля в исследуемых группах Низведение и Группа изначально 14 сут. 28 сут. Гормоны транспл-ция животных нгмл Тестостерон 5, 11+1, 08 2, 74+0, 7 4, 38+0, 7 4, 67+0, 9 Группа А ЛГ 6, 67+1, 3 7, 10+1, 2 4, 52+0, 6 4, 36+0, 6 ФСГ 4, 96+0, 6 5, 26+0, 6 3, 13+0, 46 3, 03+0, 6 Тестостерон 4, 25+0, 65 1, 78+0, 5 3, 67+1, 4 4, 57+0, 8 Группа Б ЛГ 3, 13+0, 46 3, 26+0, 7 2, 37+0, 7 2, 83+0, 7 ФСГ 4, 79+0, 8 4, 44+0, 53 2, 47+0, 2 2, 09+0, 2 Тестостерон 4, 92+0, 5 2, 39+0, 2 3, 21+0, 3 3, 36+0, 3 Группа контроля ЛГ 4, 46+0, 6 4, 84+0, 8 3, 22+0, 2 3, 42+0, 4 ФСГ 5, 04+0, 8 5, 46+0, 6 4, 05+0, 9 4, 32+0, 8

Восстановление фертильности При подсадке к самкам на 72 сутки после низведения яичек В группе А и Б фертильными были 66, 6 % самцов. При подсадке к самкам на 108 сутки фертильными в группе А были 100% самцов, в группе Б 66, 6% самцов.

Восстановление фертильности В группе А на 72 сутки отмечено появление потомства в 55, 5% случаев, причем количество живорожденных крысят варьировалось от 5 до 8, в среднем 4, 6 на 1 самку При контрольном исследовании фертильности (группа А) на 108 сутки отмечено появление потомства у 88, 8 % самок, причем среднее число крысят в 1 помете составило 7, 4 детеныша на 1 крысу.

Восстановление фертильности В группе Б у самок, помещенных к самцам на 72 сутки, через 24 -27 суток отмечено появление потомства в 33, 3 % случаев, количество живорожденных крысят было от 1 до 4, в среднем 0, 8 на 1 самку. При исследовании фертильности на 108 сутки отмечено появление потомства у 66, 6 % самок, причем среднее число крысят в 1 помете составило 2, 8 детеныша на 1 крысу.

l Выводы l 1. Терапия обогащенными клеточными культурами эффективна в отношении восстановления гормонпродуцирующей функции яичка после экспериментально индуцированного гипогонадизма. l 2. На фоне экспериментальной терапии обогащенными клеточными культурами происходит восстановление фертильности у бесплодных животных, в отличие от группы контроля. l 3. Терапия сперматогенными стволовыми клетками более эффективна в отношении восстановления репродуктивной и гормонпродуцирующей функций яичек по сравнению с терапией гемопоэтическими стволовыми клетками