Моноклональные антитела в типировании групп крови ЗОЛОТОЕ

Моноклональные антитела в типировании групп крови

ЗОЛОТОЕ ПРАВИЛО ЛАНДШТЕЙНЕРА В организме человека антиген группы крови (агглютиноген) и антитела к нему (агглютинины) никогда не существуют вместе.

А+ α = В+ β = О + α +β = А + β = В + α = Агглютинация Агглютинации не происходит

Группы крови по системе АВ 0 Оα β Аβ Вα АВ 0 (I) группа (III) группа (IV) группа

В настоящее время установлена хромосомная локализация более 20 изосерологических систем, объединяющих более 200 антигенов групп крови Основными системами совместимости крови человека являются системы АВО и Rh. В Казахстане применяются преимущественно поликлональные (происходящие из различных клонов антителообразующих клеток) реагенты: 1. Изогемагглютинирующие сыворотки АВО. 2. Универсальный анти – резус реагент. В связи с низкой активностью, нестандартностью и холодовым характером природных антител поликлональные диагностикумы уже давно вышли из употребления во всем мире. Их использование часто приводит к ошибкам в типировании групп крови.

В 1981 году для типирования групп крови были предложены моноклональные антитела, т. е. происходящие из одного клона клеток. Важным отличием моноклональных антител от поликлональных является их направленность против только одной антигенной детерминанты. Они принадлежат к одному классу иммуноглобулинов и могут быть получены в любых количествах. Моноклональные диагностикумы российского производства называются «Цоликлонами»

Ошибочные определения групп крови АВО (Е. Б. Жибурт 2000 г. ) Группа крови Поликлональные антитела (33 154 исследования) Моноклональные антитела (18 559 исследований) количество % O(I) 34 0, 10 8 0, 04 A(II) 17 0, 05 9 0, 05 B(III) 43 0, 13 14 0, 07 AB(IV) 28 0, 08 4 0, 02 Всего 122 0, 38 35 0, 01 Группа крови Поликлональные антитела (33 154 исследования) Моноклональные антитела (18 559 исследований) O(I) 34 8 A(II) 17 9 B(III) 43 14 AB(IV) 28 4 Всего 122 35

Преимущества цоликлонов • Производство цоликлонов происходит без использования крови человека; • Вирусобезопасность в отличии от изогемагглютинирующих сывороток; • Высокий и титр и активность; • Высокая специфичность и чувствительность позволяют типировать группы крови прямым методом; • Быстрота постановки реакции и удобство в применении; • Длительный срок хранения.

Методика типирования групп крови с использованием моноклональных антител имеет ряд отличительных особенностей в сравнении с типированием при помощи изогемагглютинирующих сывороток. Эти особенности связаны: 1. 2. С порядком раскапывания реагентов и интерпретацией результатов. С обязательной дифференциацией антигенов А 1 и А 2. Для определения разновидностей антигена А используются дополнительные реагенты анти - А 1 и анти - А слабый. За счет высокого титра и активности антител агглютинация наступает в течение первых секунд после смешивания на плоскости реагентов с кровью. Моноклональные антитела позволяют надежно определить группу крови новорожденных детей (особенно недоношенных).

Методика определения групп крови системы АВО при помощи моноклональных антител Реагенты: 1. Анти-А 2. Анти-В 3. Анти-АВ 4. Анти-А 1 5. Анти. Аслабый Для исследования используется цельная кровь, отмытые эритроциты, эритроциты в плазме, сыворотке или физиологическом растворе. Определение проводится в помещении, с хорошим освещением при температуре 15 -25°С. Определение групп крови системы АВО осуществляется в прямой реакции гемагглютинации взамен или параллельно с поликлональными (изогемагглютинирующими) сыворотками. ! Достаточно одной серией каждого реагента, если используется регент анти- АВ, являющийся дополнительным контролем достоверности определения групп крови АВО реагентами анти- А и анти- В.

Иванов И. И. Хирургия № 1, палата 3 Анти - А Анти - В Анти – АВ O(I) A (II) Порядок проведения исследования B (III) Физ. раствор AB (IV)

? СЛАБАЯ АГГЛЮТИНАЦИЯ ПОЗДНЯЯ АГГЛЮТИНАЦИЯ Слабая и поздняя агглютинация Выраженная агглютинация Анти - А ? Анти - В Анти – АВ A (II) ? Физ. раствор AB (IV) ?

Иванов И. И. Хирургия № 1, палата 3 A (II) AB (IV) A 2 (II) A 2 B (IV) Анти – А 1 Анти – А слабый

Основные причины ошибок. Технические: § ошибочный порядок расположения диагностикумов в штативе; § ошибочный порядок нанесения на планшет (слева направо анти- А, анти- В, анти- АВ ); § неправильное соотношение количества реагента и исследуемых эритроцитов; § несоблюдение времени; § невыполнение контрольной реакции с изотоническим раствором натрия хлорида; § использование недоброкачественных стандартов (с истекшим сроком, частично высохших, загрязненных); § использование загрязненных пипеток, палочек, планшетов; § неправильная запись результатов.

Ошибки связанные с аномальными свойствами тестируемых эритроцитов: • слабые формы антигена А (чаще) или В; • полиагглютинабельность, когда все реагенты вызывают одинаковую агглютинацию (необходимо провести повторное исследование отмытых эритроцитов в физиологическом растворе); • образование «монетных столбиков» может быть принято за агглютинацию (добавить 1 -2 капли физиологического раствора в исследуемые эритроциты); • смешанная агглютинация - «кровяная химера» , когда часть эритроцитов собраны в агглютинаты, а остальные остаются свободными (наблюдается у больных А, В и АВ групп в течение 1 -3 месяцев после трансфузий больших объемов эритроцитов крови группы О(I).

МОНОКЛОНАЛЬНЫЕ АНТИТЕЛА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РЕЗУС - ПРИНАДЛЕЖНОСТИ. Цоликлон анти- D Супер для определения резуспринадлежности абсолютно специфичен, а содержащиеся в нем антитела имеют высокий титр и активность. Специальные добавки обеспечивают стерильность препарата, его стабильность и повышенную активность в прямой реакции гемагглютинации на плоскости. Эти преимущества цоликлона анти- D Супер быстро заслужили высокую оценку среди трансфузиологов, акушеров – гинекологов и врачей неотложной помощи, которые получили возможность уверенного, быстрого и простого определения резус – принадлежности крови больного в любых условиях.

Система Резус Анти – D супер Rh(+) положительный Rh(-) отрицательный

Внедрение моноклональных диагностикумов (цоликлонов), наряду с повышенной ответственностью персонала и строгим выполнением инструкций, позволит нам выйти на уровень безопасности трансфузий компонентов крови, давно достигнутый развитыми странами.

Благодарю за внимание !