МОНОКЛОНАЛЬНЫЕ АНТИТЕЛА Докладчик Тесленко К Н 423 группа

МОНОКЛОНАЛЬНЫЕ АНТИТЕЛА Докладчик: Тесленко К. Н. 423 группа

Антитела. Основные свойства и функции. • Специфичность • Гетерогенность (физико-химический состав, авидность, афинность)

Антитела. Основные свойства и функции. Иммунология, Ярилин 2010

Получение антител по заказу Введение антигена в присутствии стимулятора иммунного ответа Накопление специфических антител Выделение антител из сыворотки в виде yглобулиновой фракции Получение антител различной специфичности

На современном этапе развития науки назрела необходимость получения антител с строго заданной специфичностью. Решение этой проблемы было предложено в 1975 г. Г. Кёлером и Ц. Мильштейном.

Нобелевская премия 1984 года “за открытие принципов получения моноклональных антител” Ц. Мильштейн Г. Кёлер

Гибридомная технология

Индукция слияния Hybridoma technologies for antibody production Masahiro Tomita & Kanta Tsumoto

Метаболическая селекция гибридов http: //www. biologyexams 4 u. com/2013/02/what-is-monoclonal-antibody-how-it-is. html

Метаболическая селекция гибридов Моноклональные антитела. Будчанов Ю. И.

www. acris-antibodies. com

Сравнительная характеристика Поликлональные антитела Моноклональные антитела Продукция Множество В лимфоцитов Единственный клон В лимфоцитов Связывание Различные эпитопы всех антигенов, участвующих в иммунизации Единственный эпитоп единственного антигена Характеристика антитела Различная специфичность, аффинитет, физико – химические свойства Идентичны Диапазон использования Ограничен Не ограничен Реакции перекрестного реагирования Часто Редко Получение Легко и быстро Времязатратное высокотехнологичное производство

Моноклональные антитела Диагностика • Реакция агглютинации • Реакция иммунофлуоресценции • Иммуноферментный анализ • Метод проточной цитометрии • Радиоиммуный анализ • Методы иммунохроматографии Терапия • Аутоиммунные заболевания • Онкология • Бронхиальная астма • Остеопороз

Моноклональные антитела – основа таргетной терапии в онкологии

Мк. АТ в терапии злокачественных опухолей • неконъюгированные: – связывающиеся с рецептором – связывающиеся с лигандом • конъюгированные: – с изотопом – с растительными или бактериальными токсинами или цитостатиками • анти-идиотипические антитела (вакцины) http: //adcreview. com/adc-university/adcs-101/how-do-antibody-drug-conjugates-work/

Способы воздействия на опухолевую клетку: Building better monoclonal antibody-based therapeutics George J. Weiner Nature Reviews Cancer 15,

Механизмы противоопухолевого действия Мк. АТ: • комплемент-зависимая цитотоксичность • антитело-зависимая клеточная цитотоксичность • индуцирование апоптоза • ингибирование сигнальной трансдукции • Аb 2 вакцины • фагоцитоз (только активированные макрофаги) • блокада рецепторов(антирецепторы) В. М. Моисеенко «МОНОКЛОНАЛЬНЫЕ АНТИТЕЛА В ЛЕЧЕНИИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ ОПУХОЛЕЙ» ПРАКТИЧЕСКАЯ ОНКОЛОГИЯ • Т. 4, № 3 – 2003

иммуногенность Monoclonal antibody therapies−a 'constant' threat to cancer Alan N. Houghton & David A. Scheinberg Nature Medicine 6, 373 - 374 (2000) doi: 10. 1038/74621

CARs - терапия Структура химерного антигенного рецептора (CAR). CAR состоит из внеклеточного домена (одноцепочечного вариабельного фрагмента антитела (sc. Fv)), соединенного с помощью цепей и трансмембранных доменов с цитоплазматической сигнальной областью. Гены, кодирующие sc. Fv, получены из В-клеток, продуцирующих антитела, специфичные к опухолевому антигену. CAR существует в виде димера, и распознавание опухоли происходит напрямую (без участия MHC). http: //biomolecula. ru/content/1847

Биспецифические антитела http: //epigeek. com/bispecific-antibodies-cancer-immunotherapy/

Blincyto® связывается одним своим Fab-фрагментом с молекулой CD 3 на мембране Т-лимфоцита, а другим – с молекулой CD 19 на поверхности лейкемической клетки. Его особенность – отсутствие Fc-фрагмента. То есть – это соединенные друг с другом два разных Fabфрагмента. Его разработали для пациентов с ОЛЛ, у которых после индукционной химиотерапии остались злокачественные клетки в костном мозге (резидуальные клетки). У таких пациентов высок риск рецидива заболевания, и лечить их дальше нечем. http: //slipups. ru/? p=2095

Плюсы Мк. АТ • Таргетность терапии • Низкая частота побочных эффектов • Возможность длительного лечения

Недостатки Мк. АТ v Биохимическая и биологическая нестабильность v Сложность фармакокинетики антител v Иммуногенность v Гетерогенность опухоли и специфичность антител www. jrheum. org

Гуманизация Evolution and Emergence of Therapeutic Monoclonal Antibodies Ian N. Foltz, Ph. D; Margaret Karow, Ph. D; Scott M. Wasserman, MD

Механизмы избегания опухолью действия Мк. АТ: Основа Механизм отсутствия терапевтического ответа Ориентация опухолевого антигена или рецептора Антиген/рецептор не выражен. Результат существующих мутаций и мутаций de novo Фармакокинетика Иммуногенность(высокая), период полураспада( короткий) Физические свойства опухоли Низкая сосудистая проницаемость, высокое интерстициальное давление Положение рецепторов на клетке Низкая насыщенность рецепторами, неэффективная блокада Сигнальный путь Неэффективная блокада сигнальных путей (их разветленость, наличие компенсаторных путей) Активация иммунитета Иммунная дисфункция Antibody therapy of cancer Andrew M. Scott, Jedd D. Wolchok & Lloyd J. Old Nature Reviews Cancer 12, 278 -287 (April 2012)

Обратная сторона таргетной терапии нарушение цитокинового каскада

Хронология основных достижений в иммунотерапии злокачественных заболеваний крови Pavan Bachireddy 1– 3, Ute E. Burkhardt 1, Mohini Rajasagi 1, 2, 4 and Catherine J. Wu 1– 3 Nature Reviews Cancer | AOP, published online 19 March 2015; doi: 10. 1038/nrc 3907

Моноклональные антитела в онкогематалогии Неконъюгированные • Ритуксимаб( мабтера) • Алемтузумаб (кэмпас) • Обинутузумаб (газива) • Офатумумаб( арзерра) Конъюгированные • Тозитумомаб (бексар) • Ибритумомаб(зевалин)

Целевые антигены при лимфоидных опухолях Анти-Ид Идиотип CD 19 ритуксимаб, Хью. Макс CD 20 эпратузумаб Lym-1, аполизумаб TCR CD 4/8 Хью. Макс. CD 4 CD 20 CD 3 CD 22 HLA-DR алемтузумаб лумиликсимаб галиксимаб B-кл CD 52 T-кл CD 25 CD 52 CD 23 CD 80 0 CD 4 00 CD 2 CD 37 Онтак Алемтузумаб

Ритуксимаб ( мабтера) • Химерное моноклональное антитело, имеющее вариабельный мышиный и константный человеческий регион, специфически связанное с антигеном CD 20 на В-лимфоцитах и инициирующее иммунологические реакции, которые опосредуют лизис Вклеток. • Применение: B-клеточные неходжкинские лимфомы http: //www. medlinks. ru/article. php? sid=59508

Экспрессия CD 20 при В-клеточной дифференцировке Кост. мозг Pluripotent stem cell Lymphoid stem cell Кровь, л/у Pre-B-cell Activated B Plasma -cell CD 20 Press. Semin Oncol 1999; 265(suppl 14): 58– 65

Механизм действия препарата Мабтера

Механизм действия: Ритуксимаб связывается с лимфоидными клетками тимуса, белой пульпы селезенки и большинством В -лимфоцитов периферической крови и лимфатических узлов. Drug Insight: the mechanism of action of rituximab in autoimmune disease—the immune complex decoy hypothesi Ronald P Taylor and Margaret A Lindorfer Nature Clinical Practice Rheumatology (2007) 3, 86 -95

Осложнения терапии ритуксимабом: • Инфузионные реакции • Синдром лизиса опухоли • Реакции со стороны слизистых оболочек и кожи • Инфекционные осложнения • Цитопения • Реактивация гепатита В • Сердечно – сосудистые реакции rlsnet. ru

Алемтузумаб(кэмпас) • Гуманизированное моноклональное антитело к антигену CD 52 • Применение: Хронический лимфолейкоз

Механизм действия: www. dovepress. com

Обинутузумаб(газива) • • • Обинутузумаб представляет собой рекомбинантное, гуманизированное, моноклональное антитело обладающее специфичностью к антигену CD 20, расположенного на зрелых Bлимфоцитах и их предшественниках. Благодаря модификации схемы гликозилирования Fc фрагмента обинутузумаб обладает повышенным сродством к FcγRIII рецепторам на поверхности эффекторных клеток иммунной системы, в частности натуральных киллеров, макрофагов и моноцитов, по сравнению с антителами, не прошедшими такую модификацию. Применение: хронический лимфолейкоз

Механизм действия Genentech's glyco-engineered antibody to succeed Rituxan Mark Ratner 1, Journal name: Nature Biotechnology Volume: 32, Pages: 6– 7 Year published: (2014) DOI:

Анти-CD 20 антитела: тип I и тип II Тип I - ритуксимаб Тип I I - обинутузумаб Апоптоз ADCC Тип II > Тип I Эффекторная клетка B клетка CDC Тип II < Тип I CDC, комплементзависимая цитотоксичность ADCС, антителозависимая клеточная цитотоксичность 40 Mössner E, et al. Blood 2010; 115: 4393 4402 АТ Комплемент CD 20 FcγRIIIa

Радиоиммунотерапия (РИТ) - это комбинированный метод лечения, который совмещает в себе возможности радиотерапии и иммунотерапии Принципы РИТ: ü Таргетность ü Локализация эффекта в опухоли ü Анти-опухолевые механизмы антител Juweid ME. J Nucl Med 2002; 43: 1507 -1529. Kaminski MS et al. Blood 2000; 96: 1259 -1266.

Препараты РИТ: Тозитумомаб(бексар) Ибритумомаб(зевалин)

Сравнительная характеристика Особенности Бексар Зевалин Антитело Мышиное анти-CD 20 Цель Зрелые В-лимфоциты Показания CD 20+ НХЛ рефрактерная к ритуксимабу Рецидивирующая, рефрактерная фолликулярная НХЛ Поглощение нормальными тканями ↑ в щитовидной железе ↑ в печени Радиоизотопное излучение Йод 131 гамма-лучи, испускаемые BEXXAR представляют потенциальную радиационную опасность, что может потребовать госпитализации для изоляции Иттрий 90 Выведение почками Почки, ЖКТ http: //www. lymphomation. org/compare-bexxar-zevalin. htm

Пауль Эрлих (1854 -1915)

Спасибо за внимание!