МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ Федеральное государственное бюджетное образовательное

МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Челябинский государственный университет» (ФГБОУ ВО «Чел. ГУ» ) Биологический факультет Кафедра микробиологии, иммунологии и общей биологии ВЫПУСКНАЯ КВАЛИФИКАЦИОННАЯ РАБОТА По направлению подготовки 06. 03. 01 «Биология» , направленности «Микробиология» АКТИВНОСТЬ АНТИСЕПТИКОВ ПО ОТНОШЕНИЮ К БИОПЛЕНОЧНЫМ ФОРМАМ БАКТЕРИЙ, ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ РАН Выполнила: студентка Аминева Ильфия Маисовна академическая группа ББ 402, курс 4 очной формы обучения Научный руководитель: Хайдаршина Наиля Эмильевна Доцент кафедры микробиологии, иммунологии и общей биологии, канд. биол. наук, доцент Консультант: Андреева Светлана Владимировна Ассистент кафедры микробиологии, иммунологии и общей биологии Челябинск 2016

Актуальность работы Доказано, что бактерии способны формировать биопленки в условиях раневого дефекта, что способствует развитию воспаления и замедлению заживления ран. Одной из основных проблем развития раневых инфекций, является тот факт, что бактерии внутри биопленок становятся более устойчивыми к антибактериальным препаратам, поэтому весьма актуальным является поиск наиболее эффективных антисептических препаратов, направленных на подавление биопленок ран. 2

Практическая значимость Информация об активности антисептиков по отношению к биопленочным формам бактерий, выделенных из ран, может применяться для своевременной коррекции антибактериальной терапии раневых инфекций. 3

Цель: изучение активности антисептиков по отношению к биопленочным формам бактерий, выделенных из ран. Задачи: 1) Провести анализ активности антисептиков по отношению к микроорганизмам в составе мономикробных биопленок; 2)Проанализировать активность антисептиков по отношению к микроорганизмам в составе полимикробных биопленок. 4

Апробация работы: результаты дипломной работы были представлены на 40 -й студенческой конференции «Студент и научно-технический прогресс» . 5

Материалы и методы Исследования проводились в УЛМИ ФГБОУ ВО «Чел. ГУ» на базе бактериологической лаборатории МБУЗ ГКБ № 6 города Челябинска. Были исследованы микроорганизмы, выделенные из ран пациентов ожогового отделения. 6

Среди исследованных микроорганизмов 25 были выделены в монокультуре и относились к видам: v P. aeruginosa v S. aureus v A. baumannii и 7 ассоциаций микроорганизмов: v А. baumannii + P. aeruginosa v А. baumannii + S. aureus v P. aeruginosa + A. baumannii + K. pneumoniae v S. aureus + A. baumannii + P. aeruginosa v P. aeruginosa + P. fluorescens v S. aureus + E. faecalis v S. aureus + P. aeruginosa Для выращивания биопленок микроорганизмы in vitro смешивали в том же соотношении, в котором они были выделены из раны. 7

Исследованные антисептики 8

Пат. 2015146730 Россия, Способ оценки эффективности антимикробного воздействия антисептиков на бактерии, существующие в форме биопленки / С. В. Андреева, Л. И. Бахарева, А. Л. Бурмистрова //- № 2015146730, приоритет от 29. 10. 2015 г. 9

Этапы исследования Выращивание биопленок на 96 луночных пластиковых планшетах Определение активности антисептиков по отношению к биопленочным формам бактерий Учет результатов и построение графиков 10

Выращивание биопленок на 96 -луночных пластиковых планшетах Инкубация планшетов в термостате при 37 °С , 24, 48 ч. Взвесь бактерий в физиологичес ком растворе (5× 107 КОЕ/мл) Испытуемая культура микроорганизмов смешанная с МПБ в соотношении 1: 1 11

Схема титрования антисептика 12

Определение активности антисептиков по отношению к биопленочным формам бактерий После инкубации планшетовудаление жидкой фазы, содержащаяся в лунках в дезинфицирующий раствор Перенесение содержимого лунок с разведениями антисептика в планшеты с образовавшимися биопленками Инкубация планшетов в термостате при 37 °С, 24, 48 ч. 13

Высев содержимого лунок на агар Мюллер. Хингтон для определения бактерицидной активности антисептиков 14

Статистическая обработка результатов • Рассчитывали индекс активности антисептика (ИАА) как отношение рабочей концентрации препарата к его минимальной подавляющей концентрации. • Определяли средние геометрические значения ИАА с вычислением 95%-ных доверительных интервалов. • Препарат считали эффективным, если величина ИАА превышала минимальный уровень, равный 4, необходимый для эффективного воздействия на микрофлору 15

Результаты исследования 16

17

Активность антисептиков по отношению к микроорганизмам в составе полимикробных биопленок 18

Выводы 1. Высокую бактерицидную активность по отношению к мономикробным биопленкам проявлял «Бетадин» , а «Хлоргексидин» и «Мирамистин» оказались не активными; 2. По отношению к полимикробным биопленкам высокую бактерицидную активность проявлял «Бетадин» , а «Хлоргексидин» и «Мирамистин» оказались не активными. 19

СПАСИБО ЗА ВНИМАНИЕ! 20