Микрофлора воды Естественная Патогенная Сапрофиты псевдомонады микрококки серо-

Микрофлора воды Естественная Патогенная Сапрофиты (псевдомонады, микрококки, серо- и железобактерии, мицелиальные и дрожжеподобные грибы). Vibrio cholerae (возбудитель холеры), микроскопические водоросли, фаги и др. бактерии рода Shigella (возбудители дизентерии), Salmonella typhi (возбудитель брюшного тифа), энтеровирусы и др.

Использование микроорганизмов в диагностике загрязнения водных ресурсов Пробы для микробиологических анализов берут в тех точках и в те же сроки, которые намечены для гидробиологических исследований. Обязательным условием микробиологических анализов является соблюдение стерильности. Пробу воды отбирают в стерильные бутылки, предварительно вымытые хромовой смесью. Отобранная проба закрывается ватной пробкой с марлевой салфеткой, поверх накладывается салфетка из жесткой бумаги и завязывается ниткой. Проба воды зачерпывается бутылкой, погружаемой на глубину 5 -10 см. .

Методы микробиологической диагностики Прямые методы учета микроорганизмов Учет микроорганизмов с применением питательных сред

Прямые методы учета микроорганизмов Для фильтрации воды используют фильтры Зейтца или иной конструкции (мембранные фильтры с размерами пор 0, 35; 0, 23; 0, 40 мкм. ). Фильтрацию осуществляют под вакуумом. Перед фильтрацией в воду добавляют краситель для окрашивания клеток микроорганизмов (например, акридин-оранж -0, 4% и выдерживают 3 минуты до полного окрашивания). Объем фильтруемой воды может быть от 10 до 20 мл в зависимости от типа водоема. Мембранный фильтр извлекают из фильтрующего аппарата и подсушивают на фильтровальной бумаге под стеклянным колпаком, помещают в каплю иммерсионного масла на предметном стекле, прикрывают покровным стеклом и рассматривают в люминесцентном микроскопе с перемещением сетчатого микрометра. Подсчет ведут в 20 полях зрения. Расчет численности бактерий проводится по формуле: N=Kn/V, где N - число бактерий в 1 мл воды; K=S/S 1, , , где S - площадь фильтра, мкм 2, S 1 - площадь, на которой просчитываются клетки, мкм 2; n - среднее число бактерий в одном поле зрения; V - объем профильтрованной воды, мл.

Учет микроорганизмов с применением питательных сред Для выращивания микроорганизмов в лабораторных условиях используют питательные среды, которые должны содержать все необходимые компоненты для роста и развития клеток. По составу среды для культивирования делят на 2 группы: Естественные (натуральные) состоят из продуктов животного и растительного происхождения (овощные или фруктовые соки, животные ткани, разведенная кровь, молоко, отвары или экстракты, отходы пищевых производств и др. ) В лабораторной практике в качестве естественных сред используют МПБ, неохмеленное пивное сусло, дрожжевая и картофельная среды, почвенная вытяжка. Синтетические среды состоят только определенные, химически чистые соединения, взятые в точно указанных концентрациях. Полусинтетические среды содержат наряду с соединениями известной химической природы вещества неопределенного состава (на пример, МПБ с глюкозой и пептоном).

По назначению среды делят на: Элективные – обеспечивают преимущественное развитие одного вида или группы микроорганизмов. Применяют для выделения микроорганизмов из мест их естественного местообитания или для получения накопительных культур. Дифференциально-диагностические (индикаторные) позволяют достаточно быстро отличить одни виды микроорганизмов от других. Состав этих сред подбирают таким образом, чтобы он позволил четко выявить наиболее характерные свойства определенного вида (например р. Н-индикаторные среды).

По физическому состоянию среды делят на: Жидкие среды – широко применяют для выяснения физиолого-биохимических особенностей микроорганизмов, для накопления биомассы или продуктов обмена, а также поддержания и хранения многих микроорганизмов, плохо развивающихся на плотных средах. Плотные среды – используют для выделения чистых культур (получение изолированных колоний) в диагностических целях (установление морфологии колоний, особенностей роста и др. ), для хранения культур, количественного учета микроорганизмов, определения их антагонистических свойств и др. Сыпучие среды – применяют в промышленной микробиологии (разваренное пшено, отруби, кварцевый песок, пропитанные питательным раствором).

Способы уплотнения сред Для уплотнения сред применяют агар-агар, желатину и кремнекислый гель. Агар-агар – полисахарид, получаемый из красных водорослей (Gracilaria, Gelidium, Ahnfeltia) произрастающих в Белом море, Тихом и Атлантическом океанах, путем вываривания в щелочной среде. Представляет собой смесь агарозы и агаропектина. В воде агар-агар образует гели, плавящиеся при 100°С и затвердевающие при 40 °С. Чаще всего агар добавляют к средам в количестве 2%. Желатина – это неполный гидролизат коллагена, получаемый при длительном вываривании костей, хрящей и сухожилий животных. Образуемый гель плавится при Т 23 -26 °С, поэтому ее в основном используют для выявления протеолитической способности микроорганизмов (тест на способность разжижать желатину). Кремнекислый гель (силикагель) используют для загущения синтетических сред (готовят смешиванием равных объемов HCl и жидкого стекла, после отвердения и промывки на него наносят соответствующую среду).

Количественный учет микроорганизмов на плотных питательных средах После посева воды на плотные питательные среды и последующей инкубации в термостате, проводят подсчет выросших колоний. При подсчете колоний предполагают, что каждая колония выросла из одной осевшей на среду клетки. Для удобства подсчета поверхность чашки делят на сектора карандашом по стеклу и ведут подсчет в каждом секторе, затем количество колоний суммируют. Количественный учет микроорганизмов на жидких питательных средах В пробирки с жидкой питательной средой вносят посевной материал определенного объема. После инкубации регистрируют наличие или отсутствие роста по определенным признакам (помутнению среды, образованию пленки или осадка и др. ), результаты обрабатывают статистически с помощью специальной таблицы и рассчитывают число клеток, содержащихся в 1 мл исследуемого субстрата.

Устройство для автоматического посева на чашку Петри по спирали Устройство для подсчета колоний

Индикационные микробиологические показатели состояния воды • Структура и количественный состав микробоценозов • Количество санитарно-показательных микроорганизмов • Физиологические показатели • Количество генно-модифицированных микроорганизмов

Для оценки структуры и количественного состава микробоценозов определяют эколого-трофические группы: органотрофов (МПА), олиготрофов (голодный агар), грибов (Сабуро), актиномицетов (КАА). К физиологическим показателям относят целлюлозоразрушающую способность, аммонификацию, денитрификацию, ферментативную активность и др. ) С позиции санитарной гидробиологии для оценки качества воды проводится определение микробного числа (количество микроорганизмов на МПА), а с целью определения ее санитарноэпидемиологической опасности определяют коли-индекс ( или колититр), которые служат показателем содержания в воде бактерий кишечной группы – коли-форм. В водопроводной воде согласно ГОСТу микробное число не должно превышать 100, коли-титр (наименьший объем воды (в мл), содержащий одну кишечную палочку) – не менее 300 мл, коли-индекс (число бактерий в 1 л воды) - не более 3. В чистых водоемах число сапрофитов может исчисляться десятками или сотнями, а в загрязненных и грязных водоемов этот показатель достигает сотен тысяч и миллионов.

Использование микроорганизмов в диагностике загрязнения атмосферного воздуха Применение микроорганизмов в оценке загрязнения атмосферного воздуха в основном используется в санитарно-гигиеническом контроле. Санитарную оценку воздуха помещений производят по следующим показателям: - общее количество бактерий (на МПА); - количество санитарно-показательных микроорганизмов (гемолитических стрептококков, гноеродных стафилококков); - количество спор плесневых грибов. Состав микрофлоры воздуха определяют седиментационным или аспирационным методами. Питательные среды помещают на путях движения воздуха, в местах со стоячим воздухом. Чашки оставляют открытыми в течение 5 -10 минут, затем закрывают и ставят в термостат для инкубации. По ГОСТ в воздухе нормируется содержание микроорганизмов: ОЧМ – не более 1500 клеток в 1 м 3, количество гемолитических стрептококков – не более 16 клеток в 1 м 3, гноеродных стафиллококов – не более 20 клеток в 1 м 3, количество спор плесневых грибов – не более 10 клеток в 1 м 3.