МИКРОФЛОРА ЛЕКАРСТВЕННЫХ РАСТЕНИЙ Микроорганизмы являются постоянными спутниками

МИКРОФЛОРА ЛЕКАРСТВЕННЫХ РАСТЕНИЙ

Микроорганизмы являются постоянными спутниками не только человека и животных, но и, в равной степени, высших растений, в том числе используемых в качестве лекарственного сырья.

n n n Микрорганизмы ведут активный образ жизни как на поверхности, так и внутри зеленых частей растений, их корней, семян, плодов. Микроорганизмы оказывают на растение как полезное действие, обеспечивая его минеральными, питательными и ростактивирующими веществами, так и вредное – вызывают заболевания растений. Растения также оказывают влияние на жизнедеятельность микроорганизмов.

Микроорганизмы: n n представители нормальной микрофлоры растений; фитопатогенные микроорганизмы возбудители инфекционных заболеваний растений.

Нормальная микрофлора растений: ь ь Ризосферными микроорганизмы эпифитными микроорганизмы

Зона почвы, находящаяся в контакте с корневой системой растений, носит название ризосферы, а микроорганизмы, развивающиеся в данной зоне, называются ризосферными. Условно различают два типа ризосферы: ближнюю и отдаленную.

n n Ближняя располагается непосредственно на поверхности корней и извлекается вместе с ними Отдаленная начинается на расстоянии нескольких миллиметров от корней и распространяется в радиусе 50 см от них. Количество микроорганизмов в ближней и отдаленной ризосфере различно: на поверхности корней их от 50 млн до 10 млрд, на расстоянии 15 см от корней до 5 млн в 1 г. почвы.

n n n Скопление микроорганизмов вблизи корней связано с выделением растениями питательных веществ, таких как янтарная, щавелевая, яблочная кислоты, углеводов, АМК, ферментов, витаминов и др. Микроорганизмы используют в качестве питательных веществ корневые волоски, эпидермис. В зоне корней улучшается структура почвы, влажность, р. Н.

Качественный и количественный состав микрофлоры ризосферы специфичен для каждого вида растений. Основная масса прикорневой микрофлоры представлена: ь неспороносными грамотрицательными бактериями рода Pseudomonas, ь микобактериями ь Грибами (базидиомицетами, реже фикомицетами, аскомицетами).

n n n Среди микроорганизмов рода Pseudomonas чаще определяются P. fluorescens, P. acidiobacter, P. asotobacter. P. fluorescens выделяет соединения, обладающие активностью в отношении фитопатогенных бактерий и потому играют значительную роль в защите растений. Но эти же микроорганизмы способны при определенных условиях вызывать загнивание корней.

n n Динамика численности ризосферных бактерий изменяется по периодам роста растений. В развитии ризосферы различают 2 максимума: первый приходится на период кущения; второй – на период цветения и плодоношения.

Грибы образуют симбиоз с корнями растений, в том числе и лекарственных, называемый микоризой. Микориза - это морфологически единое образование, состоящее из гриба и частей корневой системы растения. При этом гриб может быть симбионтом по отношению к растению-хозяину, или реже, хозяином для растения симбионта.

n n n Различают эктотрофные и эндотрофные микоризы. Эктотрофные это ассоциации, при которых гриб не проникает внутрь корней, а остается на их поверхности. Эндотрофные – мицелий гриба располагается в клетках коры корней растений.

Микориза особенно благоприятна для развития растений: n увеличивает поглощающую поверхность корней за счет разветвлений гиф гриба; n грибы своими ферментами разлагают богатые азотом органические соединения, обеспечивая растения аминокислотами, минеральными веществами и водой; n микоризные грибы снабжают растения ростовыми веществами.

Эпифитная микрофлора Эпифитной называется микрофлора, находящаяся на поверхности надземных частей растений. По качественному составу она довольно однообразна.

Типичными ее представителями являются: Xenthomonas herbicola aureum - грамотрицательные короткие подвижные палочки, образующие колонии золотистого цвета на МПА;

Pseudomonas fluorescens - полиморфные грамотрицательные палочки с полярными жгутиками, дающие флуоресценцию на МПА и МПБ. Реже встречаются споровые бактерии Bacillus mesentericus, Bacillus vulgatus, бесспоровые молочнокислые бактерии, E. coli, грибы плесневые и дрожжевые.

Многие эпифитные микроорганизмы образуют антимикробные вещества и являются антагонистами фитопатогенных бактерий, тем самым, предохраняют растения от заболеваний. Наряду с этим отмечается способность некоторых эпифитных бактерий поражать растения.

Фитопатогенные микроорганизмы Микроорганизмы, вызывающие инфекционные заболевания растений называются фитопатогенными. Инфекционные болезни растений бактериального происхождения — бактериозы. К бактериозам относятся различные виды гнилей, бактериальные мшистости, ожоги (некрозы), увядания, опухоли и др. К вирусным болезням относятся мозаичные болезни, желтуха, болезни увядания, карликовость, закукливание и другие. Различают также микофитозы, или грибковые болезни, например, фузариозы, аскохитозы, воловни и многие другие. К инфекционным болезням растений относят и актиномикозы, вызываемые актиномицетами.

n n Впервые на инфекционные заболевания растений указал Воронин в 1866 г. Бактериозы делятся на местные и общие.

Фитопатогенные бактерии относятся к родам: ь Erwinia, ь Pectobacterium, ь Pseudomonas, ь Xanthomonas, ь Rhizobium, ь Сorynebacterium, ь Agrobacterium и другие

Заражение растений происходит через: Ш инфицированные семена, Ш почву, Ш грунтовые и дождевые воды, Ш насекомых, Ш в некоторых случаях через воздух.

n Поражение растений фитопатогенными бактериями нарушает нормальный ход физиологических процессов и прежде всего фотосинтеза и дыхания, углеводный и белковый обмен, что приводит к снижению продуктивности растения и его неполноценности.

Фитопатогенные микроорганизмы сравнительно легко могут проникать в растения через естественные образования (чечевички, нектарники, желёзки, корневые волоски) и искусственные повреждения, даже ничтожные царапины. Некоторые микроорганизмы, способны вырабатывать ферменты, гидролизирующие кутикулу растений и облегчающие внедрение возбудителя.

n С момента заражения и до появления у растений признаков заболевания проходит инкубационный период, длительность которого зависит от температуры среды, влажности воздуха, солнечного света, наличия питательных веществ.

По совокупности анатомических и физиологических изменений определяют тип болезни растений: Камедетечения, смолотечения, слизетечения. Чаще всего вызываются бактериями рода Erwinia и грибами (класс Ascomycetes), в большинстве наблюдаются у лиственных и хвойных деревьев.

n Сухая и мокрая гниль. При этом размягчаются и разрушаются отдельные участки тканей и органов растения за счет жизнедеятельности бактерий (род Pectobacterium) и грибов (класс Ascomycetes и Fungi imperfecti).

n Мучнистая роса. На листьях и побегах возникает белый налет, который является следствием размножения грибов (класс Ascomycetes).

n Пожелтение, увядание, засыхание. При этих состояниях растения отстают в росте (карликовость), их листья имеют бледножелтую окраску, корни могут загнивать, разрушаться, и растения гибнут. Это заболевание чаще всего вызывается грибами (Fungi imperfecti), реже бактериями (род Corynebacterium), в ряде случаев заболевание носит неинфекционный характер.

n Чернь. На листьях и побегах появляется черная пленка вследствие развития сумчатых и несовершенных грибов или бактерий рода Erwinia.

n Ожог. На листьях, молодых побегах, цветах, плодах образуются водянистые пятна, которые темнеют, становятся коричневыми или черными. Пораженный лист отмирает, на плодах остаются темные пятна. Возбудителями ожога являются бактерии рода Erwinia.

n Пятнистость. Некоторые бактерии (род Pseudomonas), грибы (класс Ascomycetes и Fungi imperfecti), вызывают образование пятен разного цвета, формы, размеров на листьях, семенах и плодах.

n Опухоли. Местное увеличение объема стволов, ветвей, корневищ в виде наростов, вздутий, утолщений за счет гиперплазии клеток. Эти заболевания вызываются бактериями (род Agrobacterium), грибами и механическими повреждениями.

n n Язвы. Проявляются в виде углублений, что окруженных наплывом. Вызываются бактериями (род Erwinia), грибами, механическими повреждениями, низкой температурой. Мозаика листьев. На листьях появляются бледно окрашенные пятна, чередующиеся с нормально окрашенными участками. Вызываются вирусами.

n Ведьмины метлы. Образование побегов из спящих почек в результате развития бактерий (род Rhisobium), грибов (класс Ascomycetes) и вирусов.

n Деформация. Проявляется в изменении формы органов растения (искривление побегов, курчавость листьев, карликовость) вследствие поражения грибами (класс Ascomycetes и Fungi imperfecti), вирусами (семейство Reoviridae).

Известно более 200 вирусных болезней растений. Большинство вирусов относится к семейству Reoviridae, родам Phytoreovirus, Fijvirus. Растения заражаются вирусами при контакте с насекомыми, во время прививок, через почву, семена и прочее. Вирусные болезни наблюдаются у древесных, кустарниковых и травянистых растений.

У больных растений заметно отклоняются от нормы обменные процессы вплоть до качественных изменений клеточных структур, что приводит к нарушению химического состава тканей и снижению содержания действующих начал в лекарственных растениях. Использование их в качестве сырья в аптечных и заводских условиях становится невозможным.

Меры профилактики заключаются в дезинфекции семян и посадочного материала, дезинфекции почвы, опрыскивании растений химическими веществами, уничтожении растительных остатков, переносчиков возбудителей, удалении больных растений и изоляции здоровых.

Борьба с уже развившимися болезнями растений может быть 'подразделена на следующие категории: n n карантинные мероприятия, обеспечивающие охрану территории от завоза из других стран возбудителей болезней растений и осуществляемых специально организованной государственной службой карантина растений; физико-химические и биологические меры защиты, когда удаляют больные растения, изолируют здоровые, обрезают и удаляют больные части растений, уничтожают промежуточных хозяев и переносчиков болезней, собирают и уничтожают плодовые тела грибов, собирают и сжигают опавшие листья (хвою), дезинфицируют почву, производят лечение ран, обеззараживание семян, опрыскивание и опыление фунгицидами, вводят лечебные составы, используют миколитические бактерии или грибы -паразиты второго порядка, антибиотики (в том числе фитонциды) и др.

МИКРОФЛОРА РАСТИТЕЛЬНОГО ЛЕКАРСТВЕННОГО СЫРЬЯ

Лекарственное растительное сырье может обсеменяться микробами на всех этапах заготовки (сбор, первичная обработка, сушка, измельчение, упаковка) и хранения. При хранении сырья важно соблюдение санитарного режима в аптеках. Неблагоприятное действие оказывают: влажность, пыль, насекомые и другие факторы, повышающие микробное обсеменение и приводящие к порче лекарственного сырья.

Внешние проявления микробной порчи растительного сырья являются: ь изменение цвета и консистенции, ь загнивание, ь плесневение всего растения или его частей

Недоброкачественное сырье не только бесполезно, но и вредно больному человеку, так как при этом резко снижается содержание или полностью исчезают фармакологически активные вещества, сырье не оказывает необходимого влияния на патологический процесс, а имеющиеся микроорганизмы и продукты их обмена могут ухудшить его состояние.

n n Применительно к различным лекарственным растениям, видовой состав микроорганизмов будет разным. Это зависит от структуры и количества действующих начал, а также других веществ, подвергающихся ферментативному расщеплению в условиях хранения. Чаще всего портятся плоды, ягоды и корневища, богатые сахаристыми веществами. Более устойчивыми оказываются сухие листья, корни, кора.

n Состав микроорганизмов зависит от вида лекарственного сырья, его структуры и фармакологических свойств. Преобладают грибы (Mucor, Rhizopus, Peniciliiurn, Aspergillus, Fusarium, Candida, Aureobasidium, Alternaria и др), актиномицеты, спорообразующие виды бактерий (B. subtillis, B. mesatherium) а также неспоровые (Chromobacterium aurcmtiaciim, Phylomonas и др).

Санитарно – бактриологическое исследование в аптеках

n Лекарственные препараты, изготавливаемые в аптеках, могут обсеменяться микроорганизмами на всех этапах приготовления, хранения. Это может вызвать тяжелые заболевания у людей и привести к снижению лечебных свойств лекарственных препаратах, вплоть до их полной потери.

n n Порче подвергаются большинство лекарственных форм. Наиболее подвержены порче отвары, настои, микстуры, различные водные растворы и препараты для инъекций. Микроорганизмы встречаются как в жидких, так и в кристаллических субстанциях (тальк, крахмал, сахара). Микроорганизмы разрушают лекарственное растительное сырье. Наибольшей микробной порче подвержены части растений, в которых имеются сахара – плоды, ягоды.

Источники и пути загрязнения лекарств микробами n n n Загрязнение лекарственного растительного сырья. Загрязнение химических субстанций. Микрофлора воздуха. Качество обработки посуды. Руки аптечных работников. Некачественная дистиллированная вода.

пирогенность n n n Препараты, стерилизуемые в процессе приготовления, могут быть пирогенными. Пирогенная реакция организма человека возникает за счет убитых бактерий и продуктов их распада, содержащихся в лекарственном препарате. Пирогенами являются эндотоксины. Пирогены проходят через бактериальные фильтры, устойчивы к нагреванию, не инактивируются кипячением. Уничтожаются автоклавированием в течение 3 час. Пирогенная реакция характеризуется повышением температуры, вазомоторными расстройствами, в тяжелых случаях – шоковым состоянием. Все растворы для инъекций должны быть апирогенны.

Причинами пирогенности являются n n Загрязненная дистиллированная вода. Нарушение условий асептики и технологического процесса приготовлении лекарственных препаратов. Нарушение санитарного режима в помещениях аптек. Микроорганизмы, успевшие размножиться в инъекционной лекарственной форме, если между окончанием приготовления и началом стерилизации прошло более 1, 5 час.

Требования к изготовлению инъекционных растворов n n Растворы для инъекций перед стерилизацией должны содержать не более 30 микробных клеток в 1 мл. Дистиллированная вода не должна содержать кишечной палочки, а ОМЧ не должно превышать 15 клеток.

n В связи с этим особую важность приобретает систематический контроль за санитарным режимом в аптеках.

Бактериологическому контролю в аптеках подвергаются n n n n n Вода дистиллированная Инъекционные растворы до стерилизации Инъекционные растворы после стерилизации Глазные капли, приготовленные в асептических условиях на стерильных основах Нестерильные лекарственные препараты Аптечная посуда, резиновые пробки Аптечный инвентарь, оборудование, руки аптечных работников, санитарная одежда Воздух аптечных помещений

Отбор проб и исследование лекарственных препаратов n n Проводят работники бактериологических лабораторий не менее 2 раз в квартал. Пробы отбирают из неповрежденных, укупоренных и упакованных согласно нормативно-технической документации единиц лекарственных препаратов.

n n Дист. воду отбирают в стерильные флаконы в количестве 300 мл из бюретки, конец которой предварительно обжигают факелом. При неудовлетворительных анализах отбирают 500 мл воды из приемника. Инъекционные растворы в количестве 3 единиц отбирают во время или после приготовления, но не позднее 1. 5 час после приготовления. Глазные капли, настои, отвары забирают в количестве на менее 3 единиц в аптечной упаковке. Сухие лекарственные формы забирают в аптечной упаковке не менее 30 гр.

Методика исследования n n n Показатели: ОМЧ и количество дрожжевых и плесневых грибков. ОМЧ: по 1 мл лекарственной формы или воды вносят в две стерильные чашки Петри с МПА. Посевы инкубируют 18 -24 час в термостате и 24 час при комнатной температуре. Подсчитывают число выросших колоний и определяют среднее арифметическое из суммарного числа колоний.

Для выявления дрожжевых и плесневых грибков лекарственные формы и дист. воду в количестве 0, 5 мл засевают на на две чашки Петри со средой Сабуро. Посевы инкубируют при 20 -22 о С в течение 4 сут. n. П о n д Подсчитывают число выросших колоний и с определяют среднее арифметическое из ч суммарного числа колоний. и n т Полученный результат увеличивают вдвое для ы определения количества грибков в 1 мл лек. в а формы. n ю т

Нормативы предельно допустимого количества микроорганизмов в лек. формах n n n n Инъекционные растворы перед стерилизацией – не более 30, грибов не д. б. Инъекционные растворы после стерилизации – стерильны Глазные капли – стерильны Препараты для детей до 1 года – стерильны Дистилл. вода – не более 15. грибов не д. б. Препараты для местного применения (мази, капли в нос, гинекологические) – не более 100, в том числе не более 10 грибов. Пероральные препараты – не более 1000, в том числе не более 100 грибов. Препараты растительного происхождения – не более 1000 тыс. из них не более 1000 грибов.

Исследование аптечной посуды и оборудования n n Флаконы в количестве 3 штук одного объема укупоривают стерильными пробками и в лаборатории последовательно споласкивают 10 мл стерильного физ. р-ра. Резиновые пробки по 5 шт одного размера помещают в стерильные колбы и в лаборатории споласкивают 10 мл стерильного физ. р-ра. Пипетки не менее 3 шт одного объема последовательно споласкивают 10 мл стерильного физ. р-ра. Пробирки не менне 3 шт последовательно споласкивают 10 мл стерильного физ. р-ра.

В аптеках следующее оборудование подлежит исследованию: рабочие столы; тара для хранения пробок; водопроводный кран; дистиллятор и другое оборудование n

Взятие смывов n n n Производится с помощью стерильных увлажненных ватных тампонов. Смывы с крупного оборудования берутся с площади 100 см 2 с помощью проволочного трафарета. При взятии смывов с халатов и мягкого инвентаря протирается 4 поверхности площадью 25 см 2 каждая. Для взятии смывов с рук тампоном протирают ладонные поверхности, ногти, подногтевые пространства, проводя тампоном не менее 5 раз по каждому участку рук. В лаборатории в пробирки с тампонами добавляют 8 мл стерильного физ. р-ра.

показатели n n Количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных бактерий. Бактерии группы кишечной палочки.

n n n Для определения количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных бактерий по 1 мл смыва помещают в 2 чашки Петри и заливают 15 20 мл расплавленного и остуженного до температуры 45 – 50 о С. Посевы инкубируют в термостате 18 -24 час и 24 час при комнатной температуре. Подсчитывают колонии и их количество увеличивают в 10 раз для определения количества микроорганизмов в 10 мл смывной жидкости.

Для определения БГКП оставшуюся смывную жидкость засевают в 1 мл концентрированной глюкозо-пептонной среды и инкубируют в термостате сутки. Затем из пробирок проводят пересев на среду Эндо и посевы инкубируют сутки в термостате. n

Нормы n n Количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных бактерий не должно превышать 150 микроорганизмов в 10 мл смыва. БГКП должны отсутствовать.

Исследование воздуха n n Отбор проб воздуха проводится не раннее чем через 60 мин после влажной уборки на уровне рабочего стола при закрытых форточках и окнах. Используются 2 метода: 1. сидементационный (метод Коха); 2. аспирационный (метод Кротова). Определяется количество микроорганизмов 1 м 3. Показатели: ОМЧ (МПА), количество стафилококков (желточно-солевой агар) и грибов (среда Сабуро).

нормы Асептический блок: до начала работы ОМЧ – не более 500, стафилококков и грибов не должно быть в 250 л воздуха; после работы: ОМЧ – не более 1000, стафилококков и грибов не должно быть в 250 л воздуха; n

Фасовочная: до начала работы ОМЧ – не более 750, стафилококков и грибов не должно быть в 250 л воздуха; после работы: ОМЧ – не более 1000, стафилококков и грибов не должно быть в 250 л воздуха;

Моечная: во время работы ОМЧ – не более 1000, стафилококков не должно быть в 250 л воздуха, грибов до 12 в 250 л; Зал обслуживания: во время работы ОМЧ – не более 1500, до 100 стафилококков и до 20 грибов в 250 л воздуха.