Методы световой микроскопии Методы микротехники

Методы световой микроскопии Методы микротехники

Краткая история развития микроскопической техники и основные вехи цитологии • 1590 - 1609 – 1611 - создание микроскопа (братья Янсен, Кеплер, Галилей ) • 1665 - Роберт Гук усовершенствовал микроскоп, ввел термин «клетка» • 1674 -1700 работы Антони ван Левенгука с микроскопическими объектами (растения, простейшие, бактерии, животные) • 1675 -1679 - М. Мальпиги, Н. Грю создали учение о тканях • XVIII – накопление данных о строении живых организмов, работы К. Линннея (1707 -1778) • 1820 - Г. Гельригер ввел термин «протоплазма» , позднее Пуркинье • 1827 – Долланд улучшил качество линз микроскопа • 1831 – Р. Браун открыл клеточное ядро • 1838 -1839 - М. Шлейден, Т. Шванн объединили открытия и создали клеточную теорию

• 1855 – Р. Вирхов «любая клетка – от клетки» • 1857 – Колликкер описал митохондрии в мышечных клетках • 1866 – Геккель установил, что наследственная информация находится в ядре. Изучают деление клетки, описаны хромосомы • 1880 - 1883 – открыты пластиды • 1882 – Р. Кох использовал анилиновые красители для контрастирования препаратов • 1886 – открыты митохондрии • 1886 – открыт аппарат Гольджи • 1887 – 1900 – усовершенствование микроскопа и фиксации объектов (разрешающая способность микроскопов достигла максимума – 0, 2 мкм) • 1930 – Лебедев изобрел интерференционный микроскоп • 1931 – Р. Руденберг изобрел просвечивающий электроннный микроскоп • 1932 – М. Кноль, Э. Руска изобрели сканирующий электроннный микроскоп

Устройство микроскопа • Основание • Коробка с механизмом микрометрической фокусировки (3) • Столик 5, 6 Винты • Тубусодержатель • Рукоятка грубой фокусировки • Головка • Револьвер для объективов (20) • Тубус • Винт тубуса • Окуляр бинокулярной насадки • Конденсор • Ирисовая диафрагма • Кронштейн • Рукоятка конденсора • Откидная линза • окуляр

Разрешающая способность микроскопа – расстояние, на котором две рядом лежащие точки не сливаются Предел разрешения светового микроскопа 0, 2 мкм (задается волновой природой света)

Микроскопическая техника (микротехника) – совокупность приемов, используемых для получения микроскопических препаратов

Основные приемы микротехники 1. Фиксация 2. Хранение материалов 3. Окрашивание 4. Заливка материала в парафин 5. Изготовление срезов 6. Изготовление препаратов (временных или постоянных)

Фиксация – обработка материала жидкостью, в которой живой объект быстро погибает, но сохраняется прижизненная структура его клеток и тканей Группы фиксаторов • Спиртовые (спирт чистый или в смеси с уксусной, хромовой кислотой, хлороформом) – напр. фиксатор Карнуа • Хромовые (хромовая кислота в соединении с уксусной или формалином) – жидкость Флеминга • Формалиновые (в чистом виде или в соединении с уксусной, хромовой кислотами, со спиртами)

Приготовление срезов на микротоме после заливки тканей