Методы исследования желез внутренней секреции
1. Наблюдение результатов полного или частичного удаления (экстрипация, или эктомия) эндокринной железы. • В результате такой операции возникает дефицит соответствующих гормонов и нарушаются регулируемые ими функции. Например, при удалении паращитовидных желез гормон паратирин, поддерживающий уровень кальция в крови, снижается, в результате чего повышается нервномышечная возбудимость и возникает судорожный припадок. • В ряде случаев операцию заменяют применением химических веществ, блокирующих функцию железы. Например, препарат аллоксан избирательно блокирует βклетки островкового аппарата поджелудочной железы, продуцирующие инсулин.
2. Введение экстрактов, полученных из эндокринных желез, а также химически чистых гормонов и гормональных препаратов. • Если препарат введен нормальным животным возникает эффект избыточного гормонального действия. • Если препарат введен животным, подвергнутым экстрипации соответствующей эндокринной железы, то состояние оперированного животного улучшается, т. е. имеет место результат замещения недостающего гормона.
3. Трансплантация (пересадка) эндокринных желез • У животного удаляют исследуемую железу и наблюдают развивающиеся изменения. Затем удаленную железу или аналогичную железу другого животного (донора) пересаживают в другой участок тела, обеспечивая сосудистую связь железы с организмом. Если после пересадки нарушенные функции нормализуются - изучаемая железа обладает внутренней секрецией. • Этот метод применяют и с целью создания избыточной продукции гормона; для этого интактному животномуреципиенту пересаживают несколько одноименных желез донора.
4. Метод эксплантации эндокринных желез • Эндокринные железы, кусочки их ткани помещают в питательную среду (in vitro), поддерживающую жизнедеятельность клеток. Исследуют содержание гормонов в питательной среде, по которому судят о качественной и количественной сторонах гормонообразования клетками железы, влиянии на них других гормонов и химических веществ. При инкубировании поджелудочной железы в среде с различной концентрацией глюкозы установлено, что повышение уровня глюкозы в среде активирует секрецию инсулина. Аналогично было установлено, что инсулин секретируется лишь при определенной концентрации кальция в среде.
5. Введение радиоактивной метки. • В организм вводят радиоактивный изотоп, необходимый для синтеза гормона, или меченый радиоактивной меткой гормон, а затем следят за их судьбой в организме, определяя радиоактивность различных органов и биологических жидкостей. Например, у людей для исследования функционального состояния щитовидной железы вводят радиоактивный 131 I, большая часть которого захватывается щитовидной железой для синтеза тироксина и трийодтиронина. При гиперфункции щитовидной железы накопление йода усиливается, при гипофункции наблюдается обратный эффект.
6. Ауторадиография • В организм животного вводят радиоактивные гормоны или радиоактивные вещества, которые затем включаются в молекулу гормона. Через определенный промежуток времени у животного берут кусочки тканей и приготовляют из них срезы, помещая их на фотопленку с эмульсией, чувствительной к излучению. После проявления участки пленки, подвергшиеся действию радиоактивного излучения, чернеют. Таким образом устанавливают распределение гормона в органе, субклеточных структурах. Например, с помощью этого метода было выявлено, что женский половой гормон эстрадиол поглощается не только половыми органами, но и областями мозга, контролирующими половое поведение.
7. Определение содержания гомонов и их метаболитов в биологических жидкостях. Используют: • биологические методы. Оценивают структурные, функциональные и биохимические изменения, происходящие у животных in vivo или же в тканях или клетках in vitro после добавления в питательную среду исследуемой биологической жидкости. Так, биологический метод определения окситоцина основан на способности этого гормона усиливать отдачу молока молочной железой лактирующей крысы in vivo или кусочками ее ткани in vitro.
• химические методы: измерение концентрации гормонов в плазме или сыворотке крови способами флюорометрии, спектрального анализа и др. • иммунологические методы основаны на образовании комплекса гормон (антиген) – специфическое антитело (антисыворотка). они включают: - радиоиммунологические методы, в которых принципы иммунологического анализа сочетаются с применением меченых радиоизотопами гормонов. - методы конкурентного связывания (вытеснение определяемым гормоном гормона, меченного радиоактивным изотопом).
• Определение содержания гормонов проводят, применяя нагрузочные тесты, так как уровень гормонов в покое и натощак не всегда в полной мере позволяет оценить функциональное состояние эндокринной железы. Например, при легких формах сахарного диабета содержание инсулина в крови может быть в пределах нормы, но после нагрузки глюкозой оно возрастает меньше, чем у здоровых людей. • Определяют гормоны и их метаболиты в моче, собранной за сутки или за определенную часть суток. Однако, неполноценная работа печени и почек может дать неправильное представление о функции эндокринной железы.
8. Метод флуоресцирующих антител. • Метод дает возможность устанавливать тонкую локализацию ряда гормонов. В основе метода лежит способность гормонов белкового или полипептидного происхождения выявлять видовую специфичность, т. е. действовать в качестве антигенов при введении в чужеродный организм. Например, после введения кролику гормона роста свиньи у кролика образуются антитела к нему. Антитела выделяют и соединяют с каким-либо флуоресцентным веществом, в результате получаются флуоресцирующие антитела. Если такими флуоресцирующими антителами обработать срез ткани свиньи, в котором содержится гормон роста, произойдет соединение антигена (гормона) и флуоресцирующего антитела с образование антиген-антитело. Комплекс флуоресцирует, поэтому дает возможность определить локализацию гормона. Таким методом было установлено, что инсулин образуется в βклетках островкового аппарата поджелудочной железы.
9. Определение концентрации рецепторов гормонов и их специфического связывания. • Специальные методы позволяют выделить отдельные рецепторы эстрадиола, прогестерона, инсулина и др. гормонов, находящихся как на мембранной, так и цитозольной или ядерной фракции клеток различных органов. Метод важен, поскольку даже высокое содержание гормона в крови недостаточно для реализации его эффекта, если рецептор малоактивен к этому гормону.
Скачать презентацию Методы исследования желез внутренней секреции 1 Наблюдение
Презентация_4_Методы исследования ЖВС.pptx