Методы исследования в микробной экологии Выполнили: Оленькова Е. , Сергеева В. , Шмидт Т.
Потенциальные проблемы, возникающие при неконтролируемом внесении генетически модифицированных микроорганизмов (ГЕМОМ) в ОС вызвали широкие дебаты в научном обществе, вовлекая правительственные организации и поборников защиты окружающей среды. Первоначальные эксперименты показали, что ГЕМОМ быстро отмирают при внесении в природные ценозы, поскольку не способны конкурировать с существующими сообществами микроорганизмов.
Для облегчения выявления и более точного количественного учета бактерий и других микроорганизмов в естественных субстратах и в первую очередь в воде или почве используют различные флуоресцирующие красители. Методы флуоресцентной микроскопии применяют давно. Например, метод учета бактерий с помощью флуоресцеин- изотицианата, описанный в 1970 г. , используют до сих пор.
По характеру взаимодействия красителя с соответствующими структурами клетки красители могут объединены в две группы. Красители первой группы флуоресцируют, специфически связываясь с соответствующими компонентами клетки. Обычно это нуклеиновые кислоты или белки независимо от того, метаболически активна клетка или нет. Красители второй группы начинают флуоресцировать только после их метаболической модификации внутри клетки, т. е. с помощью красителей этой группы выявляют физиологически активные вещества.
Для выявления и учета живых активных клеток бактерий используют флуоресцентные красители FDA и SFDA. Принцип взаимодействия красителя FDA с клеткой заключается в том, что гидрофобный FDA проникает путем пассивной диффузии в живую клетку и подвергается там действию эстераз. В мертвых клетках FDA не аккумулируется, даже если экстеразы активны и продолжают работать, т. к. в мертвых клетках мембрана разрушается и флуоресцирующий краситель легко выводится из клетки.
Таким образом, FDA- специфический краситель для клеток с ненарушенными клеточными мембранами, обладающие эстеразной активностью.
Для определения живых клеток применяется так же краситель SFDA. Основной принцип работы этого красителя так же, как и у FDA. Нефлуоресцирующий SFDA при действии внутриклеточной эстеразы превращается во флуоресцирующий продукт- FDA.
Скачать презентацию Методы исследования в микробной экологии Выполнили Оленькова Е
Методы исследования в микробной экологии.pptx