Методы исследования липидов Жирные кислоты Короткие

Методы исследования липидов

Жирные кислоты Короткие: < 8 атомов углерода Средние: 8 – 12 атомов углерода Длинные: 12 – 20 атомов углерода Очень длинные: 20 – 36 атомов углерода Могут быть: • Насыщенные ж. к. • Ненасыщенные ж. к.

Некоторые природные насыщенные жирные кислоты Общая формула Сn. H 2 n. O 2. Температура кипения и плавления возрастает с увеличением длины цепи. Обозначение Тривиальное название Систематическое название Структура Темп пл. (C) Источник 12: 0 Лауриновая Додекановая CH 3(CH 2)10 COOH 44, 2 14: 0 Миристиновая Тетрадекановая CH 3(CH 2)12 COOH 53, 9 Молоко, мускатный орех, семена пальмы, кокосовое масло, мирт 16: 0 Пальмитиновая Гексадекановая CH 3(CH 2)14 COOH 63, 1 18: 0 Стеариновая Октадекановая CH 3(CH 2)16 COOH 69, 6 Преобладающие кты всех животных и растительных жиров 20: 0 Арахиновая Эйкозановая CH 3(CH 2)18 COOH 76, 5 Спермацетовый жир, корица, семена пальмы, кокосовое масло, лавровый лист Арахисовое масло

Некоторые природные ненасыщенные жирные кислоты (Общая формула С H O ) n 2 n 2 2 Обозначение Тривиальное название Систематическое название Структура Темп Пл. (С) 16: 1 D 9 Пальмитолеиновая 9 Гексадеценовая CH 3(CH 2)5 CH=CH (CH 2)7 COOH 0. 5 18: 1 D 9 Олеиновая 9 октадеценовая CH 3(CH 2)7 CH=CH (CH 2)7 COOH 13. 4 18: 2 D 9, 12 Линолевая CH 3(CH 2)4(CH=CHCH 2)2(CH 2)6 COOH 9 18: 3 D 9, 12, 15 Линоленовая 9, 12, 15 –окта декатриеновая CH 3 CH 2(CH=CHCH 2)3(CH 2)6 COOH 17 20: 4 D 5, 8, 11, 14 Арахидоновая 5, 8, 11, 14 эйкоза тетраеновая CH 3(CH 2)4(CH=CHCH 2)4(CH 2)2 COOH 49 20: 5 D 5, 8, 11, 14, 17 EPA 5, 8, 11, 14, 17 эйкоза CH 3 CH 2(CH=CHCH 2)5(CH 2)2 COOH пентаеновая 54 22: 6 D 4, 7, 10, 13, 16, 19 DHA 4, 7, 10, 13, 16, 19 докозагексаеновая 44 9, 12–окта декадиеновая CH 3 CH 2(CH=CHCH 2)6 CH 2 COOH

Распространение ненасыщенных жирных кислот Тривиальное название Пальмитолеиновая Тканевое распределение В каких продуктах содержится Минорный компонент тканей В жирах рыб и морских млекопитающих, семенах Олеиновая Преобладающий компонент многих тканей, включая белое в во мозга и миелини зированные окончания периф. нервов Животные и растительные жиры 60 70% ж. к. состава оливкового масла, пальмовое, рапсовое масла, орехи, свиное сало Линолевая Компонент большинства тканей Большинство растительных масел Линоленовая Компонент большинства тканей Некоторые растительные масла. Часто обнаруживается вместе с линолевой. Арахидоновая Преобладающий компонент большинства мембранных липидов Обнаруживается вместе с линолевой к той, особенно в арахисовом масле. Также мясо, печень, мозг. EPA Минорный компонент тканей животных Рыба DHA Преобладающий компонент мембранных липидов, фоторецепторов, серого вещества мозга, спермы Рыбий жир

Номенклатура жирных кислот

Изомерия жирных кислот Жирная кислота в цис конфигурации Жирная кислота в транс конфигурации

Карбоксильная группа Углеводородная цепь Стеариновая Олеиновая На участке, где находится двойная связь, молекула «согнута» и образует угол в 1200.

Насыщенные жирные кислоты Смесь насыщенных и ненасыщенных жирных кислот

Классификация липидов

Строение отдельных представителей триглицериды

Строение отдельных представителей холестерин

Методы исследования липидов • Экстракция липидов из тканей с помощью органических растворителей (метод Фолча, метод Блайя и Дайера); • Анализ липидного экстракта (разделение липидов на классы и анализ отдельных компонентов методами ТСХ (TCL), ВЭЖХ (HPLS), газовой хроматографии (GC), масс спектрометрии (MS), ЯМР (NMR)); • Качественное и количественное определение (цветные реакции с использованием специфических реагентов, LC MS –анализ, GC MS)

Тонкослойная хроматография на силикагеле Схема хроматографического разделения липидного экстракта с помощью одномерной тонкослойной хроматографии в системе растворителей: гексан: диэтиловый эфир: ледяная уксусная к-та (73: 23: 4). PL – фосфолипиды (на старте); MG – моноглицериды; C – холестерол; DG – диглицериды; FA – жирные кислоты; TG – триглицериды; CE – эфиры холестерина (на границе фронта растворителя); 0 – линия старта; Ф – линия фронта. Хроматографическое разделение липидного экстракта из митохондрий коры головного мозга крыс с помощью двумерной тонкослойной хроматографии: система I хлороформ: метанол: 28% аммиак (65: 25: 5), система II - хлороформ: ацетон: метанол: ледяная уксусная к-та: вода (50: 20: 10: 5). PI – фосфоинозитиды; РS – фосфатидилсерин; PС – фосфатидилхолин; PE – фосфатидилэтаноламин; Sph – сфингомиелин; FA – жирные кислоты; CL – кардиолипин; NL – нейтрильные липиды. Проявление в парах иода.

Разделение липидного экстракта с помощью ВЭЖХ Разделение липидов из печени крыс (0, 35 мг в 5 мкл растворителя) на колонке (100 х 5 мм) с силикагелем (Spherisorb ™ - 3 микрона), в сочетании с масс-селективным детектором. CE – эфиры холестерина, ТГ – триглицериды, C – холестерин, DG – диацилглицеролы; FA – свободные жирные кислоты; CER – цереброзиды, PG – фосфатидилглицерин; DPG – дифосфатидилглицерин, PE – фосфатидилэтаноламин, PI – фосфатидилинозитол, PC – фосфатидилхолин, SPH – сфингомиелин, MG – моноацилглицеролы; LPE – лизофосфатилэтаноламин, PS – фосфатидилсерин, LPC – лизофосфатидилхолин; PMME – фосфатидилмонометилэтаноламин; PDME – фосфатидилдиметилэтаноламин. .

Анализ метиловых эфиров жирных кислот с помощью GC–MS. Разделение липидного экстракта из жировой ткани мыши после 24 ч голодания. (A) Общая ионная хроматограмма с выделенным пиком на 16, 89 мин. (B) Масс спектр выделенного пика. (C) Результат поиска масс спектра в библиотеке Национального института стандартов и технологий (NIST). Пик на 16, 89 мин. является линоленовой кислотой.

Липидный состав плазмы крови человека Фракция липидов Показатель нормы Общие липиды 4, 6 10, 4 ммоль/л Фосфолипиды 1, 95 4, 9 ммоль/л Липидный фосфор 1, 97 4, 68 ммоль/л Нейтральные жиры 0 200 мг% Триглицериды 0, 565 1, 695 ммоль/л (в сыворотке) Свободные жирные кислоты 0, 3 0, 8 мкмоль/л Общий холестерин (существуют возраст ные нормы) 3, 9 6, 5 ммоль/л (унифициро ванный метод) Свободный холестерин 1, 04 2, 33 ммоль/л Эфиры холестерина 2, 33 3, 49 ммоль/л ЛПВП 1, 25 4, 25 г/л Ж ЛПНП М 2, 5 6, 5 г/л 3 4, 5 г/л

Строение липопротеинов наиболее важных белково липидных комплексов крови • Хиломикроны • Липопротеины очень низкой плотности (ЛПОНП) • Липопротеины низкой плотности (ЛПНП) • Липопротеины высокой плотности (ЛПВП)