Методы инактивации генов Выполнила студентка 3 курса ЕГФ, генетика Закиева Гульфия Ф.
Настоящий прорыв в области направленных мутаций был осуществлен благодаря использованию феномена гомологичной рекомбинации между небольшим участком экзогенной и клеточной ДНК. Данный метод получил название направленной инактивации гена или нокаут гена
Цель: Изучить методы инактивации генов Задачи: Ознакомиться с основами нокаутирования генов; Выделить особенности векторных конструкций; Ознакомиться с «программируемым нокаутом генов» ; Ознакомится с основными методами инактивации генов; Изучить механизм инактивации гена посредством ДНК-метилирования; Выяснить недостатки инактивации генов.
Нокаут гена – это молекулярногенетический метод, в ходе которого задуманные изменения вносятся в нуклеотидную последовательность изучаемого гена или его регуляторных элементов. Мышь – наиболее удобный объект
Стратегия получения линии нокаутированных мышей (Capecchi M. R. Altering the genome by homologous recombination, 1989)
Два типа векторов: замещающий (А); вставочный (Б) – и их механизмы интеграции в геном (Capecchi M. R. Altering the genome by homologous recombination, 1989)
«Программируемый нокаут генов» Схема использования тканеспецифичной Cre-lox. P рекомбинации для получения мышей с программируемым нокаутом гена (Tsien J. Z. , Chen D. F. , 1996)
Выключение антисмысловыми олигонуклеотидами Механизм инактивации гена посредством ДНКметилирования Основные методы инактивации генов Нокаутирование при помощи химерного белка P-Ph Метод РНК интерференции Инактивация молекулами РНК
Механизм инактивации генов посредством ДНК-метелирования В настоящее время принята гипотеза, что белок Me. Cp 2 (methylated-DNA binding protein 2) связывается с метилированной ДНК и включается в белковый комплекс, состоящий из гистоновых белков, деацетилазы и др. Этот белковый комплекс инициирует компактизацию хроматина, что не дает связаться факторам тракскрипции с промоторной областью и, следовательно, происходит инактивация гена