Методы энтомологического анализа в лабораторной карантинной экспертизе
Лабораторная экспертиза подкарантинных материалов включает: -Проведение анализов (энтомологического, фитопатологического, вирусологического, бактериологического, фитогельминтологического и на сорняки; -Определение видовой принадлежности обнаруженных вредных организмов; -Заключение специалистов лаборатории о потенциальной опасности обнаруженных вредных организмов и карантинных мерах борьбы с ними. При этом, инспектор и специалисты лаборатории должны знать внешние признаки всех стадий развития вредных организмов. Заключение лаборатории выдается в течение 2 -3 дней; по живому растительному материалу (черенки, саженцы, луковицы, клубни и т. д. ) – не позднее следующего дня после получения образца; при провведении длительных сложных анализов (вирусологический, бактериологический, фитопатологический, гельминтологический, рентгенографический и др. ) максимальный срок задержки заключения – не более 1 мес. При сильной зараженности исследуемого материала его изъятие фиксируется в специальном акте. Специалисты лаборатории должны: Не оставлять без присмотра распакованные растения и высыпанные для анализа семена; Начатую экспертизу образца заканчивать до перерыва в работе; Не вскрывать одновременно несколько образцов; Материалы, анализируемые в последующие дни не вскрывать, хранить в шкафу, живые образцы хранить в прохладном месте.
Необходимое оборудование для проведения экспертизы: -Карманная лупа с 6 -10 -кратным увеличением; -Бинокулярная налобная лупа БЛ; -Глазная часовая лупа; -Лупа на штативе; -Бинокуляр МБС (мелкие семена просматривают при увеличении (х12, 5 или х25, затем на увеличении х50 или х87) -Микроскопы МБИ-1 и МБР-1 (для определения мелких насекомых и их частей); -Эмалированные кюветы 20 х25 или 30 х40 см (для поштучного просмотра больших образцов семян гороха, крестоцветных и др. ); -Листки плотной белой бумаги с загнутыми с трех сторон краями (для просмотра небольших образцов семян) после каждого просмотра каждого образца бумагу меняют; -Лотки из белой пластмассы (дезинфицируют после анализа каждого образца 96%-ным спиртом); -Разборные доски для определения качества семян непригодны для проведения экспертизы т. к. в щелях могут прятаться мелкие насекомые и произвести заражение последующих образцов. По окончании экспертизы остатки мусора сжигают, оборудование дезинфицируют спиртом. Все обнаруженные организмы помещают в отдельные пробирки, вкладывают внутрь этикетки из тонкой пергаментной бумаги, с надписями, сделанными тушью.
По истечении отчетного года и получении заключения ВНИИКР по годовому отчету, документы представляющие научную ценность, переводят в лабораторную коллекцию, остальные систематизируют по отрядам, семействам, родам и видам и сохраняют как фонд для пополнения коллекций других карантинных лабораторий, как материал для учебных занятий на семинарах повышения квалификации работников службы карантина растений.
Методы анализа по определению заселенности подкарантинных материалов вредителями Порядок проведения энтомологической экспертизы, методы анализа, особенности досмотра Энтомологический анализ задачи анализа: -Определение карантинного состояния импортируемых материалов (наличие насекомых, клещей), -Установление зараженности материалов карантинными и другими опасными вредителями. Энтомологический анализ проводят с использованием нескольких методов: - м-д поштучного просмотра (просеивания) - флотации - рентгенографии - макролюминисцентный м-д - биологический м-д.
Метод поштучного просмотра семян Применяют при анализе различных семян, зерна, крупы и др. Экспертизу небольших партий семян в бумажных пакетах проводит путем осмотра поверхности пакетов на наличие прогрызенных насекомыми отверстий. Поврежденные пакеты отделяют от остальных и семена из них просматривают в первую очередь. Вскрывают один из оставшихся пакетов, высыпают семена в кювету, лоток или лист бумаги равномерным слоем толщиной 1 -2 см. Семена с признаками повреждения и зараженности вредителями выделяют в пробирки. Всех обнаруженных насекомых, их части и экскременты выбирают тонким шпателем, смоченной тонкой кисточкой или иглой, помещают в пробирку и закрывают ватным тампоном. Семена в матерчатых мешочках или средние образцы массой 1 кг, высыпают в кювету и анализируют частями. Если при анализе найдены части тел насекомых, по которым нельзя установить их вид, то их разваривают в щелочи и изготавливают микропрепараты.
Метод просеивания семян Семена просеивают через набор почвенных сит: в верхней фракции остаются различные насекомые, более крупные чем семена, в средней – мелкие насекомые, в нижней – экскременты, отдельные части насекомых и клещи. Для выявления личинок в муке, крахмале, мелкой крупе, материал рассыпают тонким слоем (0, 5 см) на листе бумаги, приглаживают, выравнивают фанерой, картоном или стеклом. Затем просматривают.
Метод флотации Применяют при анализе злаковых, зернобобовых культур, орехов, косточек плодовых и др. Метод основан на том, что в чистой воде или растворе соли всплывают неполноценные семена, поврежденные и зараженные вредителями. Флотация облегчает обнаружение скрытноживущих вредителей (зерновки, долгоносики, ложнокороеды, толстоножки, семяеды, зерновая моль). Используют раствор поваренной соли или селитры различной концентрации. Для хлебных злаков (при обнаружении долгоносиков, зерновой моли) берут 570 -730 г селитры (Na. NO 3) на 1 л воды; температура раствора 150 С. Для гороха мелкосемянных сортов и др. мелкосемянных бобовых, зараженных зерновками, применяют 30%-ный р-р селитры, для крупносемянных – 50%-ный р-р. Для мелких семян используют чистую воду. Образец семян высыпают в сосуд с прямыми стенками, заполненный р-ром нужной концентрации (или водой), перемешивают, за тем быстро, не дав семенам набухнуть, извлекают ложкой или шпателем все всплывшие на поверхность семена и раскладывают для просушки на фильтровальную бумагу. Жидкость сливают, семена, опустившиеся на дно промывают проточной водой в этом же сосуде и раскладывают для просушки. Все всплывшие семена вскрывают, вредителей извлекают, определяют вид, стадию развития, состояние.
Метод рентгенографии Выявляют скрытое заражение семян декоративных, мальвовых (хлопчатника, кенафа и др. ), зернобобовых культур (фасоль, соя, маш) вредителями (зерновками, долгоносиками, гусеницами бабочек) с помощью рентгеновских аппаратов, работающих в мягких диапазонах и не дающих гамма-излучений. Исследуемые семена раскладывают в один слой в плоские коробочки. Под коробочки подкладывают незасвеченную рентгеновскую пленку, помещенную в светонепроницаемые конверты-кассеты из черной бумаги. После съемки коробки переносят на другой стол (не смещая семена), а конверты-кассеты с заснятой пленкой при темно-красном свете проявляют и фиксируют. Рентгенограммы исследуют при помощи лупы х6 или бинокуляра, тушью отмечают на них все семена, подлежащие изъятию из образца. На рентгенограммах при использовании негатоскопа хорошо видны семена, внутри которых находятся гусеницы, личинки, куколки, выгрызенные ими полости, заполненные экскрементами. Заселенные семена вскрывают, пинцетом извлекают вредителей и изучают как обычно.
Макролюминесцентный метод Применяют при анализе больших образцов семян (нут, маш, соя, фасоль и др. ) при слабой зараженности зерновками, а так же черенков и саженцев. Анализ черенков и саженцев позволяет выявить скрытое заражение прячущимися в трещинах коры восковых выделений кровяной тли, мучнистых червецов (воск ярко люминесцирует на фоне темной коры). При этом используют аналитическую ртутнокварцевую портативную лампу типа ЛЮМ или Л-84 с лампой ПРК-4 и светофильтром УФС-3, пропускающим только невидимые ультрафиолетовые лучи. В качестве источника ультрафиолетовых лучей используют люминесцентный осветитель ОИ-18 с набором светофильтров. Применяют совместно с бинокуляром. Работу проводят в затемненном помещении.
Биологический метод Применяют при досмотрах грузов, лабораторной экспертизе на предмет наличия вредителей в невзрослой стадии развития, при которой невозможно определить вид насекомого. При обнаружении яйцекладок, живых куколок, личинок их доводят до взрослой стадии, поддающейся определению. Анализ саженцев и прививочного материала: посылку вскрывают, берут по одному черенку (саженцу), осматривают его поверхность с помощью лупы. Осмотр начинают с корневой системы. Остатки почвы счищают скальпелем в чашку Петри, просматривают под бинокуляром на наличие насекомых и клещей. На корневой шейке определяют (буровую муку, экскременты, колонии щитовок, капли камеди) при обнаружении пораженный участок вскрывают, извлекают вредителей. Вздутия, галлы, наросты разрезают скальпелем, просматривают под бинокуляром. Осматривают кору, места разветвления веток, пазухи под почками на наличие единичных щитовок, гусениц, личинок жуков и др. вредителей. При обнаружении щитовок или червецов их снимают, срезая вместе с кусочком коры. Всех вредителей собирают и фиксируют. Анализ клубней картофеля проводят на зараженность картофельной молью и др. Каждый клубень осматривают снаружи под лупой, делают поверхностные срезы или разрезают их. Поверхность среза от загнивания посыпают истолченным древесным углем. Ножи, скальпели дезинфицируют спиртом. Гусениц или куколок моли извлекают.
Биологический метод Анализ луковиц: при этом осматривают внутреннюю поверхность грузов, щели, оберточную бумагу. Небольшие образцы луковиц доставляют в лабораторию – осмотр ведут поштучно. Луковицы испытывают на прочность путем сдавливания на наличие ходов и полостей. Затем осматривают донце и шейку. При осмотре шейки отгибают сухие чешуйки (колонии зимующих тлей, мучнистых червецов). Трипсов обнаруживают путем снятия сухой чешуйки с луковицы и осмотром поверхности мякоти на наличие шероховатой светло-бурой или черной липкой корочки из экскрементов трипсов. Луковицы с внутренними полостями разрезают ножом или скальпелем пополам от шейки к донцу (личинки мух, клещи). Аналогично анализируют корневища цветочных культур, обращая внимание на почки, корни и остатки почвы. Анализ цитрусовых: на наличие средиземноморской плодовой мухи, большой мандариновой мухи, гусениц цитрусовой моли, гусениц огневок, на поверхности так же встречаются виды кокцид. При заражении личинками средиземноморской плодовой мухи на поверхности плодов сероватые мягкие, как бы промасленные участки, слегка вдавливающиеся при надавливании, или конусовидные бугорки с подсохшими и побуревшими вершинками в местах уколов яйцекладом, или круглые (диаметром 1, 5 мм) выходные отверстия личинок.
Биологический метод Анализ цитрусовых: при анализе плодов на внутреннюю зараженность личинками мухи скальпелем делают поверхностный срез кожуры на 2 -3 мм, при обнаружении хода плод разрезают пополам через подозрительный участок. Поверхность среза исследуют через лупу с х7 -10 -кратным увеличением. Анализ яблок, груш, айвы аналогичен анализу цитрусовых. Могут быть обнаружены: червецы, щитовки (калифорнийская), плодожорками, яблонной мухой, американской белой бабочкой. При повреждении плодов гусеницей американской белой бабочки на поверхности обнаруживается точка вгрызания гусеницы в плод в виде маленьких уколов. При этом скальпелем делают небольшой поверхностный срез кожицы, после того как откроется ход, плод разрезают вдоль хода для извлечения гусеницы. Гусеницы плодожорок полностью вгрызаются внутрь семян и их можно обнаружить лишь по экскрементам вблизи семян.
Скачать презентацию Методы энтомологического анализа в лабораторной карантинной экспертизе
практика 3.ppt