Методи генетичного аналізу на Drosophila melanogaster Великий практикум

Методи генетичного аналізу на Drosophila melanogaster Великий практикум 3. Соматичні мозаїки

Перші мозаїки у дрозофіли – гінандроморф и (Морган, 1914) Причини виникнення мозаїцизму: Мозаїк – органїзм, у якого клітини мають різний генотип Втрата хромосом и під час поділу Соматичний кросінговер Інсерційницй мутагенез

1. Визначити місце та характер активності гена: • Чи функція гена внутрішньоклітинна, чи він діє на віддалені клітини? Використання соматичних мозаїків у генетичному аналізі: 2. Вивчення функції летальних генів, оскіки гомозиготи гинуть у ембріональному періоді, а мозаїки — життєздатні

y + sn ♀ y sn +

Молекулярні інструменти –трансформація у дрозофіли 1982 — Дж. Рубін та А. Спрадлінг, вектор Р -елемент Ефективність трансформації близько 14%

Як включити рекомбіназу FLP ? Система FRT – FLP – рекомбіназа дріжджів (фліпаза), що викликає сайтспецифічну рекомбінацію FRT – сайт мішень Перевага – рекомбінацію можна «вмикати» у подрібний час та у визначеному місті

1. Хит-шоком (38 ˚ на 1 год). FLP під хіт-шоковим промотором Клони розподілятимуться по тканинах випадково

FRTFRTпромотор GFP- білок. Маркування GFP -білок зявиться, якщо спейсер видалено Клони в імагінальному диску крила

2. Бінарна GAL 4 – UAS система UAS — FLP промотор + специфічний драйвер GAL 4 ( активатор транскрипції дріжджів) – тканиноспецифічні клони

Маркування геном ww

Функц і ональний knock — out До 70 -80% м. РНК інактивується

w 1118 ; P{GD 3277}v 5469 ( UAS — sws — RNAi) 11257 cn 1 P{PZ}Sema-2 a 03021/ Cy. O ; ry 506 cn[1] P{ry[+t 7. 2]=PZ}Sema-2 a[03021]/Cy. O; ry[506] 1369 -GAL 4 — око, глія, ламіна repo — GAL 4 — глія NH 2 Dys. Act. Gal 4/ Cy. O – інактивовані довгі ізоформи дистрофіну Модифікатор: Драйвер: