МЕТОД УЛЬТРАЗВУКОВОЙ ЦИТОЛИЗОМЕТРИИ Ультразвуковые методы нашли применение

МЕТОД УЛЬТРАЗВУКОВОЙ ЦИТОЛИЗОМЕТРИИ • Ультразвуковые методы нашли применение не только в клинической диагностике, но и в лабораторных исследованиях • В частности, в практике лабораторных исследований крови существует метод определения механической резистентности и эритроцитов. • Метод пригоден лишь для эритроцитов, так как внутренний объем этих клеток не разделен на отдельные компартаменты и их содержимое вытекает через любое повреждение клеточной мембраны. • Метод источен и позволяет, как правило, лишь подтвердить установленный диагноз.

Цитолиз — процесс разрушения клеток эукариот, выражающийся в виде их полного или частичного растворения под действием лизосомальных ферментов. Цитолиз может быть как частью нормальных физиологических процессов, например при эмбриогенезе, так и патологическим состоянием возникающим при повреждении клетки внешними факторами, например при воздействии на клетку антител. Метод ультразвуковых цитолизограмм представляет собой метод определения кинетических параметров ультразвуковой дезинтеграции клеток, находящихся в суспендированном состоянии. Очевидно, что разрушение клеток под действием ультразвука имеет вероятностный характер. Ультразвуковая цитолизометрия может быть успешно применена при диагностике ряда заболе ваний, а также для оценки изменений свойств клеточных мембран при консервировании, гемосорбции, гемодиализе и других манипуляциях с клетками в суспензии. .

• Некоторые клетки, суспендированные в водной среде и не имею щие прочной клеточной стенки, разрушаются под действием ультра звука уже при интенсивностях, используемых в терапии. • Пороги и скорость разрушения этих клеток зависят как от концентрации клеток в суспензии, температуры среды, частоты и интенсивности ультразвука, так и от прочности клеточных мембран • Разрушение клеток в ультразвуковом поле происходит только в том случае, если интенсивность ультразвука превышает значения, совпадающие для разбавленных суспензий, с порогами кавитации в воде. Зависимость времени разрушения клеток в ультразвуковом поле от их концентрации (интенсивность ультразвука 0, 4 Вт/см 2)

• Основную роль в процессах, ведущих к нарушению целостности клеточных мембран, играют не химические вещества, образующиеся под действием ультразвука, а механические силы, возникающие при кавитации • Такие силы, достаточные по величине для разрушения клеточных мембран, могут быть обусловлены микропотоками и ударными волнами вблизи пульсирующих или захлопывающихся пузырьков. • Разрушение клеток начинается не сразу после включения ультра звука и заканчивается не мгновенно после его выключения. • Скорость вытекания содержимого эритроцитов сквозь дефекты в мембранах после выключения ультразвука ограничена диффузией и вязким течением. • В обычных условиях внутриклеточные мембраны препятствуют вытеканию их содержимого через одиночные дефекты в цитоплазматической мембране. Однако под действием ультразвука внутри клеток возникают микротчения. Они разрушают компартментацию, перемешивают содержимое и обратимо снижают вязкость цитоплазмы. После этого ничто не препятствует вытеканию содержимого клеток крови через повреждения в цитоплазматических мембранах.

Средняя скорость ультразвуковою рассчитывается по формуле: разрушения клеток где С концентрация клеток в суспензии; k коэффициент, показывающий, какая часть акустической энергии преобразуется в энергию микропотоков и затрачивается на разру шение клеток; / расстояние от излучателя до той точки в объеме, где интенсив ность ультразвука уменьшается в результате акустических потерь (по глощения, рассеивания) до порога кавитации; / интенсивность ультразвука; /п интенсивность, соответствующая порогу кавитации; А коэффициент, характеризующий потери акустической энергии. Температуру можно не учитывать, если в опыте она не превышает 36 о. С

Принцип метода ультразвуковых цитолизограмм Регистрируя любым способом изменение концентрации клеток в суспензии в процессе воздействия ультразвуком, можно получить кривую, характеризующую распределение клеток по стойкости к ультразвуковому (механическому) воздействию ультразвуковую цитолизограмму 1 излучатель ультразвука; 2 фотоэлектрический коло риметр; 3 кювета с суспензией клеток; 4 регистратор

Концентрация клеток при которой динамика ультразвукового цитолизиса не зависит от плотности ультразвуковой энергии Тип клепок Плотность энергии ультразвука, Вт/см 3 0, 05 0, 06 0, 08 0, 09 Эритроциты 0, 65 0, 7 Лейкоциты 0, 35 0, 4 0, 55 Тромбоциты 0, 5 0, 6 0, 8 Во всех случаях для ультразвуковой цитолизометрии оптимальной является средняя плотность ультразвуковой энергии, равная 0, 05 Вт/см 3

Метод ультразвукового разрушения эритроцитов и других клеток значительно информативнее метода определения механической прочности эритроцитов, используемого в настоящее время в клинической практике, и способен его заменить, по крайней мере, в тех случаях, когда небольшое удорожание анализов оказывается несущественным по сравнению с ценностью получаемой информации.