Лабораторная диагностика туберкулеза Н В Свечникова Врач бактериолог

Лабораторная диагностика туберкулеза Н. В. Свечникова Врач бактериолог БУЗ Орловской области ОПТД

Род Mycobacterium включает в настоящее время около 100 видов, как патогенных, так и непатогенных. Большинство из представителей этого рода относятся к сапрофитным микроорганизмам, и лишь незначительное их число имеет клиническое значение.

К патогенным видам относятся возбудители туберкулеза у человека и животных, а также возбудитель проказы. Остальные представители рода Mycobacterium относятся либо к так называемым атипичным микобактериям, либо являются сапрофитами, которые широко распространены в природе. Атипичные микобактерии, классифицируемые как нетуберкулезные, вызывают в организме людей и животных те или иные патологические изменения, и по биологическим качествам и клинической значимости занимают среднее место между типичными микобактериями туберкулеза и сапрофитными микобактериями.

Разделение клинически значимых микобактерий на комплексы: w комплекс M. tuberculosis - комплекс бактерий, вызывающих туберкулез (M. tuberculosis, M. bovis, M. microti, M. canetti) w комплекс M. avium (M. avium, M. intracellulare) w комплекс M. Fortuitum w комплекс M. terrae M. bovis BCG, M. africanum,

Микобактерии туберкулеза относятся к роду Mycobacterium. Характерной особенностью микроорганизмов, относящихся к этому роду, является наличие чрезвычайно устойчивой к внешним воздействиям гидрофобной клеточной стенки. Ее высокая гидрофобность в значительной степени обусловлена наличием остатков миколовых кислот в ее пептидогликолипидном слое.

Характерными особенностями микобактерий туберкулеза являются: w Способность к кислотоустойчивому окрашиванию (используется при специфической окраске диагностического материала при микроскопии) w Устойчивость к кислотам и щелочам (используется при селективной обработке диагностического материала с целью элиминации нетуберкулезной микрофлоры перед посевом) w Длительный цикл развития

Микобактерии туберкулеза обладают значительной устойчивостью к воздействию факторов окружающей среды холоду, теплу, влаге, свету. Однако некоторые виды физического и химического воздействия приводят к гибели микобактерий.

Образование аэрозоля при кашле, разговоре, пении.

На сегодняшний день микробиологические методы исследования являются основными в диагностике туберкулеза. Основными методами выявления возбудителя туберкулеза являются традиционные микробиологические методы микроскопия мазка и культуральные исследования (посев).

Бактериологическая диагностика ТБ у впервые выявленных больных (Орловская обл. , 2011 г. )

Характеристика микроскопического метода исследования

Микроскопические методы исследования играют очень важную роль в выявлении и диагностике туберкулеза: w Диагностика туберкулеза легких бактериоскопическим методом проста, достаточно эффективна, экономически выгодна, так как не требует особого оборудования и химических реактивов. w Преимуществом бактериоскопического метода исследования является также быстрота получения результата. w Данный метод позволяет в короткие сроки выявить наиболее эпидемически опасных больных туберкулезом.

Первичное выявление больных туберкулезом в РФ методом Циля-Нильсена осуществляется как в клиникодиагностических лабораториях общей лечебной сети, так и в учреждениях противотуберкулезной службы. Основная масса впервые заболевших туберкулезом выявляется по обращаемости, т. е. среди лиц, обратившихся за медицинской помощью из-за появившихся различных клинических симптомов. В связи с этим при наличии у больного кашля, выделения мокроты и лихорадочного состояния в течение 3 -х и более недель необходимо проведение микроскопического исследования мазка мокроты, окрашенного по методу Циля -Нильсена в клинико-диагностических лабораториях и больницах общего профиля.

Микроскопия КУМ Чувствительность 25 -65% случаев с посевом+ Специфичность > 98% Порог обнаружения 5 -10 x 103 КУМ/мл Кумулятивная отдача микроскопии мазка КУМ > 95 % 1 й мазок КУМ 80 -82 % 2 й мазок КУМ 10 -14 % 3 й мазок КУМ 5 -8 % Важно исследовать 3 образца!

Цель диагностики туберкулеза – своевременное выявление очага инфекции К основным задачам учреждений ОЛС относятся: • заподозрить туберкулез • качественно организовать сбор диагностического материала до начала лечения • организовать трехкратное исследование мокроты методом микроскопии в КДЛ • своевременно направить материал для культуральной диагностики в специализированное противотуберкулезное учреждение

Причины низкой чувствительности методов микроскопического исследования w 1. необоснованность назначения w 2. низкое качество диагностического материала w 3. плохая подготовка мазков мокроты w 4. ошибки в их окрашивании w 5. неисправный или плохого качества микроскоп

Качество диагностического материала w Результативность бактериоскопического исследования непосредственно зависит от качества диагностического материала, поэтому необходимо строго следить за тем, чтобы в лабораторию на исследование была доставлена мокрота, а не слюна w Материал в виде слюны следует выбраковывать на этапе сбора мокроты, слюна не должна поступать в лабораторию и подвергаться микроскопическому исследованию

ЗАВИСИМОСТЬ ПОЛОЖИТЕЛЬНОГО РЕЗУЛЬТАТА МИКРОСКОПИИ МАЗКА ОТ КАЧЕСТВА ИССЛЕДУЕМОГО ОБРАЗЦА Амбулаторная служба * Вид образца Слюна Всего % Положительные % 1125 32. 9 21 1. 8 Слизь 1707 49. 9 68 3. 5 583 17. 2 220 37. 7 Слизистогнойная L. POLLAK & R. URBANCZIK, Bol Inform Inst Nac Tuberc (Caracas) 2: 1969, 5 - 8

Сбор диагностического материала. Сбор мокроты для исследования на кислотоустойчивые микобактерии - весьма ответственный этап диагностической процедуры, от четкости проведения которого во многом зависит результат исследования.

Контейнеры для сбора мокроты

Режимы обследования w Существует несколько схем организации обследования пациента методом микроскопии при выявлении туберкулезной инфекции w Желательно собирать утреннюю порцию мокроты в течение трех дней последовательно

Подбор пациентов для обследования. Целесообразный подбор пациентов для обследования (при наличии у них симптомов, подозрительных в отношении туберкулезной инфекции) позволяет значительно повысить эффективность микроскопического исследования При правильном подборе групп подозреваемых на туберкулез для обследования методом микроскопии эффективность выявления в лаборатории составляет 5 -20%, то есть из 100 обследованных выявляется 5 -20 положительных по мазку пациентов

Группы пациентов, подлежащих обследованию в первую очередь: w С симптомами кашля более 3 -х недель w С субфебрильной температурой w В состоянии пониженного питания w Дети и подростки из групп риска по заболеванию туберкулезом (IV и VI группы диспансерного учета) w С рентгенологическими изменениями в легких ТОЛЬКО ПРИ НАЛИЧИЕ КАШЛЯ С МОКРОТОЙ!!! Это крайне важно с эпидемической точки зрения, так как больной с неустановленным диагнозом “туберкулез” наиболее контагиозен

Наличие туберкулеза легких с положительным мазком в зависимости от длительности кашля пациента Д. Р. НАГПОЛ и другие, ВОЗ/TБ/Информация для лаборантов / 68. 63 Длительность Кол-во человек кашля Количество случаев ТБ легких с положит. мазком < 14 дней 241 1 > 14 дней 381 43

Эффективность работы ОЛС в выявлении больных туберкулезом с бактериовыделением.

Из микробиологических методов диагностики основным остается диагностика туберкулеза с использованием стандартных питательных сред: 1. Ливеншнейна-Йенсена 2. Финн - 2

Учет результатов посева. Интенсивность роста обозначают по 3 -х балльной системе (1+) — 1 – 20 КОЕ (“скудное” бактериовыделение); (2+) — 21 – 100 КОЕ (“умеренное” бактериовыделение); (3+) — > 100 КОЕ (“обильное” бактериовыделение).

Непременным условием для бактериологической лаборатории является определения ЛЧ к стандартизированным препаратам первого ряда: H, R, E, S и второго ряда: K, Cap, OFL

Ускоренные методы лабораторной диагностики туберкулеза и лекарственной устойчивости ü Автоматическая система BACTEC MGIT 960 ü Анализатор Gene. Xpert ü ПЦР диагностика

Автоматизированная система BACTEC MGIT 960.

Анализатор Gene. Xpert

Благодарю за внимание!