Лабораторная диагностика новообразований (опухолеассоциированные маркёры) Т. Т. Радзивил
Канцерогенами, оказывающими инициирующее воздействие на нормоцит, могут быть: • факторы физической природы радиационное и ультрафиолетовое излучение; • химической природы ряд ароматических и линейных углеводородов (3, 4 бензпирен, хлороформ и др. ), некоторые металлы (мышьяк, никель, свинец и др. ); • биологической природы вирусы (ДНК содержащие вирусы папилломы человека, гепатитов В и С, Эпштейна Барр и др. , РНК содержащие вирусы клеточного лейкоза человека 1 и 2 типов, рака молочной железы мышей и др. ).
Иммортальность – способность опухолевой клетки к неограниченному числу удвоений.
Этапы диагностики онкологических заболеваний Параклиническое обследование: • Общий анализ крови; • Общий анализ мочи Клиническое обследование: • Осмотр • Сбор анамнеза Биохимический анализ крови: • оценка содержания общего белка и белковых • фракций • определение содержания глюкозы • определение уровня печеночных ферментов • (АЛТ, АСТ, щелочная фосфатаза) • оценка содержания мочевины Анализ содержания опухолевых маркёров Дополнительные тесты: • Рентген • КТ • УЗИ • Цитологическое исследование
Интерпретация обнаруживаемых при общем скрининге изменений биохимических констант Показатель Спектр мочевина увеличение содержания при нормальной концентрации креатинина свидетельствует об интенсивном распаде опухоли, а при повышенной его концентрации – о нарушении функции почек глюкоза увеличение содержания указывает на нарушение инсулярного аппарата, а снижение – на значительную утилизацию глюкозы опухолевыми клетками (например, при лимфосаркоме и некоторых быстро растущих опухолях у детей
Интерпретация обнаруживаемых при общем скрининге изменений биохимических констант Показатель общий белок и альбумин Спектр увеличение содержания (при снижении концентрации альбумина) – характерный признак миеломной болезни; снижение содержания обоих показателей обнаруживается у онкологических больных при поражении печени метастазами и в ряде других случаев как отражение общего действия опухоли на организм; гипопротеинемия и гипоальбуминемия – показатели общего действия опухоли на организм как следствие синтеза белка и усиленного его распада
Интерпретация обнаруживаемых при общем скрининге изменений биохимических констант Показатель Спектр белки острой фазы повышение уровня свидетельствует о сопутствующем воспалительном процессе либо о секреции опухолью специфических ростовых факторов креатинкиназа повышение общей активности имеет место у больных с опухолями желудочно кишечного тракта лактатдегидрогеназа общая активность фермента возрастает при различных онкологических заболеваниях, специфичность изоферментного спектра при тех или иных формах опухолей не выявлена
Опухолевые маркёры (ОМ) Это вещества, образуемые опухолевыми клетками и секретируемые в биологические жидкости, в которых они могут количественно определены неинвазивными методами Стокгольм, 5 ая Международная конференция по ОМ человека, 1988 г.
Классификация онкомаркёров по их биологической функции Группа онкомаркеров Примеры Онкофетальные антигены Ферменты Гормоны Рецепторы Другие соединения РЭА, АФП, ХГЧ, CA 125, CA 15 3, CA 19 9, CA 72 кислая фосфатаза, нейронспецифическая энолаза (НСЕ), лактатдегидрогеназа (ЛДГ) АКТГ, кальцитонин, антидиуретический гормон, паратгормон, плацентарный лактоген, пролактин Прогестероновые, эстрогенные ферритин бета 2 микроглобулин иммуноглобулины
Идеальный опухолевый маркёр должен обладать следующими характерными чертами • Определяться только при злокачественных заболеваниях, отсутствовать у здоровых людей и при доброкачественных процессах • Определяться уже на самых ранних стадиях злокачественно процесса • Его концентрация должна коррелировать с размером опухоли, стадией заболевания, прогнозом
Идеальный опухолевый маркёр должен обладать следующими характерными чертами • Короткий период полужизни такой, чтобы маркёр быстро отражал эффективность лечения • Предоставляет адекватное время опережения для ранней диагностики и раннего лечения
Показания к проведению исследований на опухолевые маркёры • • • Раннее выявление опухолевого процесса (скрининг) Мониторинг течения заболевания Оценка эффективности проведённой терапии Прогнозирование течения некоторых опухолей Диагностика бессимптомного рака Выявление лиц с повышенным риском развития опухолей Мониторинг лиц из группы с «семейным раком» и обследование беременных женщин Формирование групп с высоким риском развития «профессионального» рака и мониторинг за пациентами таких групп Мониторинг лиц, подвергшихся воздействию ионизирующего излучения в дозах, превышающих предельно допустимые Обследование лиц, поживающих в зонах экологического неблагополучия и в зонах с повышенной опасностью радиационного воздействия
Факторы in vivo, влияющие на результаты анализа онкомаркеров • Условия подготовки сыворотки и хранения. Сыворотка должна быть отделена от эритроцитов в течение одного часа с момента забора крови. Сыворотку разлить по пластиковым пробиркам и быстро заморозить при температуре минус 20 градусов. Не допускается повторное замораживание! • Уровень онкомаркеров значительно изменяется при гемолизе и при иктеричной сыворотке. • Прием некоторых препаратов может вызывать завышенные результаты онкомаркеров. Например, прием изоптина, верапамила, витамина С, эстрадиола могут вызывать завышенные значения простаты специфического антигена (ПСА). Если больному вводился плацентарный альбумин, то можно ожидать повышенный уровень альфа – фетопротеина (АФП) в крови.
Факторы in vivo, влияющие на результаты анализа онкомаркеров • Человеческие антитела к мышиным иммуноглобулинам (гетерофильные антитела) образуются у пациентов, получавших мышиные иммуноглобулины при диагностической иммуносцинтиграфии или иммунотерапии. Наличие этих антител может обусловливать ложно положительные результаты • Онкомаркёры могут быть повышены у лиц с иммунодефицитами.
Принцип наборов реактивов для ИФА – «сэндвич» • на стенках лунок планшета адсорбировано МКА, «узнающее» свой антиген в анализируемой сыворотке пациента; • антиген привязывается к антителу на стенках лунок; • чтобы сделать антиген «видимым» , в лунки вносят второе МКА к этому же антигену, но помеченное ферментом; • при взаимодействии фермента со специфическим субстратом жидкость в лунках приобретает окраску, интенсивность которой прямо зависит от концентрации антигена, содержащегося в сыворотке; • планшет промывают после каждого этапа; • концентрацию антигена считывают с калибровочной кривой, которая строится в системе полулогарифмических координат, откладывая различные разведения калибровочных растворов против соответствующих значений оптической плотности.
Показания к применению иммуноферментных наборов в лечебных учреждениях 1. Дополнение к цитодиагностике В случае "сомнительного" или отрицательного ответа цитопатолога 2. Информация о природе опухоли при не выявленном первичном очаге 3. Оценка радикальности операции Уровень онкомаркёров в сыворотке крови снижается, если проведена радикальная операция и отсутствуют отдаленные метастазы 4. Ранняя диагностика рецидивов и метастазирования Повышение уровня онкомаркёра у радикально оперированных больных за 6 8 месяцев предсказывает появление рецидива или от даленных метастазов 5. Оценка эффективности лекарственного лечения Корреляция низкого уровня онкомаркёра с клиническими признаками эффективного лечения опухоли позволяет использовать его в качестве критерия для индивидуализации терапии
«Расписание» для ИФА: • ОМ определяют перед началом лечения • Затем каждый месяц в течение 1 ого года • 1 раз в 2 месяца в течение 2 ого года наблюдения • 1 раз в 3 месяца на 3 ем году наблюдения • До 5 лет – 2 раза в год • После 5 лет – 1 раз в год
Наиболее информативные опухолевые маркёры для карцином основных локализаций Локализация карциномы Опухолевые маркеры Рак молочной железы CA 15 3, РЭА, пролактин, эстрадиол Рак вульвы SCC, РЭА Рак эндометрия CA 125, СA 19 9, SCC, СA 19 9 < 37 Е/мл РЭА Рак желудка Опухоли яичников CA 15 3 < 28 Е/мл РЭА 0 5 нг/мл РЭА, CA 19 9, CA 72 4 < 3 нг/мл CA 125, CA 19 9 бета. ХГЧ, АФП, эстрадиол Рак шейки матки Нормы SCC, РЭА CA 125< 35 Е/мл, бета. ХГЧ< 10 МЕ/мл АФП < 15 нг/мл
Наиболее информативные опухолевые маркёры для карцином основных локализаций Локализация карциномы Опухолевые маркеры Нормы Рак поджелудочной железы CA 242, CA 19 9 CA 242 Рак предстательной железы ПСА общий, ПСА свободный ПСА общ. < 3, 7 нг/мл Рак толстой кишки РЭА, CA 19 9 Рак лёгкого NSE, РЭА Рак щитовидной железы Тиреоглобулин, ТТГ, РЭА Кальцитонин Эндометриоз CA 125, CA 19 9, РЭА NSE< 12, 5 нг/мл
АФП ПСА СA 15 3 СEA CA 19 9 CA 125
Раковый эмбриональный антиген (РЭА) • Показания к применению: мониторинг развития коло ректальных карцином • Повышение РЭА наблюдается при: раке молочной железы, лёгкого, головы и шеи, при гепатитах, циррозе печени, при доброкачественных заболеваниях кишечника, язвенном колите, туберкулёзе, хроническом бронхите, АИЗ • Уровень РЭА повышен у курильщиков – норма у некурящих 0 5 нг/мл, у курильщиков – 10 нг/мл
Раковый эмбриональный антиген (РЭА) • • • Наиболее надёжный маркёр для мониторинга КРР и раннего выявления рецидива Значимым является увеличение уровня РЭА не менее, чем на 30% от предыдущего уровня Повышение уровня на 15 20%, но сохраняющееся в 3 х измерениях, также рассматривается как клинически значимое и требуется дальнейшее обследование пациента Сочетанное определение РЭА и СА 242 повышает чувствительность теста для выявления рецидивов Чем ↑ уровень РЭА до операции, тем меньше проживёт пациент!
Интерпретация полученных результатов Характер изменения уровня РЭА Клиническое значение Снижение до нормы через 1 Полное удаление опухолевой ткани 6 недель после операции Сохранение повышенной концентрации Дополнительное повышение концентрации Повторное повышение уровня после нормализации Наличие остаточной опу холевой ткани и /или метастазов Прогрессирование опухо левого процесса Вероятный рецидив и/или метастазы
СА 19 9 • Единственный официально рекомендованный маркёр для диагностики РПЖ • Нормальная концентрация – 37 Ед/мл • Высокие концентрации встречаются: остром и хроническом панкреатите, циррозе печени, холециститах • Снижение СА 19 9 на 20% по сравнению с базовым уровнем после 8 нед терапии – индикатор ответа на лечение и выживаемости, чем КТ
Альфа фетопротеин (АФП) Основные клинические применения: 1. Выявление и мониторинг первичной гепатоцеллюлярной карциномы 2. Мониторинг эффективности терапии При доброкачественных опухолях АФП редко превышает 100 нг/мл и практически никогда – 500 нг/мл
Интерпретация полученных результатов АФП Показания Патология Диагностика первичной карциномы печени Мониторинг пациентов во время или после проведения курсов терапии рака печени Мониторинг беременных женщин для выявления патологии плода Дифференциальная диагностика вирусного гепатита и рака печени врожденное поражение почек, атрезия желудочно кишечного тракта, дефекты развития нервной трубки /уродства/ анэнцефалия плода; антенатальная смерть плода при вирусном и хроническом гепатите частота значительного повышения уровня АФП мала /1 -2%/
Возрастные нормы концентрации простаты специфического антигена Возраст Меньше 40 лет 41 – 50 51 – 60 61 – 70 > 70 Концентрация (нг/мл) < 1, 3 < 2, 0 < 3, 0 < 4, 5
Причины повышенного уровня PSA в образце • пальпирование простаты и/или взятие биопсийного образца накануне или в день взятия образца • облучению предстательной железы • сексуальные "игры" накануне или в день взятия образца • введение гормональных и/или противовоспалительных препаратов.
Изменения содержание СА 125 в зависимости от фазы менструального цикла • увеличивается в фолликулярную фазу • выходит на плато в лютеиновую фазу • имеет пик во время менструации, а затем падает до уровня фолликулярной фазы • повышенный уровень маркёра отмечается в 1 триместре беременности, поэтому при обнаружении у женщин детородного возраста повышенного уровня СА 125 требуется исключить беременность • Нормальная концентрация – 35 Ед/мл
Антиген плоскоклеточной карциномы SCC • Применяется: • Для мониторинга течения РШМ • Оценки эффективности лечения РШМ, прогноза и доклинического выявления рецидивов • Нормальная концентрация – 1, 5 н/мл
Причины увеличения CA 125 • • • различные доброкачественные гинекологические опухоли воспалительные процессы, вовлекающие придатки в первом триместре беременности при различных аутоиммунных заболеваниях, гепатите, хроническом панкреатите и циррозе печени опухоли желудочно кишечного тракта, карцинома бронхов и карцинома молочной железы
CA 125 • • • Степень повышения концентрации ОМ не коррелирует с объёмом первичного узла: Высокий уровень ОМ может регистрироваться при маленькой опухоли, но со множеством мелких метастазов по брюшине, которые не обнаруживаются при УЗИ СА 125 позволяет обнаружить рецидив за 3 4 мес до его клинического проявления
Схема исследования уровня в крови после операции (рекомендации ВОЗ) ежемесячно в течение первого полугодия раз в 2 месяца в течение 2 х лет в последующие годы – 2 раза в год
Показания к применению определения CA 15 3 ( норма 28 Е/мл) 1. Дополнение к цитодиагностике • В случае "сомнительного" или отрицательного ответа цитопатолога. 2. Информация о природе опухоли при не выявленном первичном очаге. 3. Оценка радикальности операции. • Уровень СА 15 3 в сыворотке крови снижается, если проведена радикальная операция и отсутствуют отдаленные метастазы. 4. Ранняя диагностика рецидивов и метастазирования. • Повышение уровня СА 15 3 у радикально оперированных больных за 6 8 месяцев предсказывает появление рецидива или от даленных метастазов; 5. Оценка эффективности лекарственного лечения.
Показания для определения ХГЧ (N 5 МЕ/мл) • ХГЧ для мониторинга гермином яичка и яичника • определение эффективности проводимого лечения • определение сроков окончания лечения • подбор препарата для лечения • раннее выявление рецидивов заболевания
Панель онкомаркёров, используемая в поиске первичной опухоли при раке неизвестной первичной локализации Локализация первичной опухоли Онкомаркёры с повышенным уровнем Печень, поджелудочная железа Желудок, тонкая, толстая и прямая кишка АФП, РЭА, CA 19 9 Яичник, матка АФП, РЭА, CA 125, ХГЧ Молочная железа РЭА, CA 15 3 Предстательная железа РЭА, ПСА РЭА, CA 19 9
Классические типы профиля уровня ОМ • Быстрое снижение концентрации ОМ до нормального уровня после проведённой операции или других форм лечения свидетельствуют об успешности проводимого лечения • Отсутствие снижения уровня маркёра до нормального уровня после первой линии терапии может указывать на то, что лечение было неуспешно • Продолжительный низкий уровень маркёра свидетельствует о периоде ремиссии
Классические типы профиля уровня ОМ • Последовательное повышение уровня ОМ от базового уровня говорит о рецидиве заболевания. ОМ могут предупредить о рецидиве за 3 12 месяцев до того, как рецидив подтвердиться другими методами • Снижение уровня ОМ после периода повышения свидетельствует об ответе на вторую линию терапии • Повышение уровня ОМ после лечения может означать, что опухоль резистентна к используемым методам лечения и прогноз неблагоприятный, если нет возможности изменить схему лечения
Скачать презентацию Лабораторная диагностика новообразований (опухолеассоциированные маркёры) Т. Т. Радзивил
[Медкниги]Лабораторная диагностика новообразований (опухолеассоциированные маркеры).ppt