Клиническая микробиология Кафедра микробиологии и вирусологии Ив. ГМА профессор, д. б. н. Кузнецов О. Ю. 2008 ©
Наиболее важной деятельностью микробиолога в медицине является изоляция и идентификация причинных агентов инфекционных болезней Эта большая область микробиологии называется клинической или диагностической микробиологией.
Главные задачи клинической микробиологии: § изоляция и идентификация инфекционных агентов; § демонстрация иммунологических ответов (антитела; кожная реактивность – кожные пробы у пациентов; § рациональный выбор антимикробной терапии на основе лабораторных тестов
Результаты лабораторных тестов зависят главным образом от: • качества образца • времени его забора • тщательности и правильности его взятия • профессиональности и опытности лабораторного персонала
Любой врач (сестра), те, кто имеет дело с инфекционным процессом, должны знать когда и как необходимо взять образец, что лабораторные исследования требуют, и как интерпретировать результаты. Обычно клинические лаборатории микробиологического профиля, обеспеченные хорошим современным оборудованием способны изолировать и определить антитибиотикорезистентность для большинства обнаруженных бактерий в течение 48 часов.
Недавние достижения в разработке быстрых диагностических методов сделали возможным идентификацию некоторых патогенов менее, чем за один день или несколько часов. В ряде случаев, диагностические методы, основанные на методах иммунологии и нуклеиновокислотных зондах уменьшают это время даже более, и во многих случаях патоген может быть положительно идентифицирован без предварительного культивирования микроорганизмов вообще.
Молекулярные методы также чрезвычайно важны при диагностике вирусных и протозойных инфекций. Эти заболевания типично сложно определять из-за сложности культивирования патогенного агента.
Клинический микробиолог работает в тесном контакте с врачом относительно диагноза и лечения инфекционных болезней. Наиболее важен самый начальный этап взаимодействия – изоляция патогенов из клинических образцов: • в зависимости от рода инфекции, собираемые материалы могут включать кровь, мочу, фекалии, мокроту, цереброспинальную жидкость или гной. • все взятые образцы должны быть тщательно помечены и сопровождены с соответствующим направлением.
Диагностические тесты при инфекционных болезнях подразделяются на четыре класса: • обнаружение инфекционного агента (бактериального, грибкового, вирусного, протозойного или гельминтического) в образцах, полученных от пациента; • обнаружение значимого антителообразования у пациента. Это часто требует обнаружения нарастания титра антител и, следовательно взятия 2 сывороточных образцов, взятых с интервалом в 10 -12 дней (реакция с парными сыворотками); • обнаружение значимой кожной реактивности – гиперчувствительности; • Обнаружение различий при клинических наблюдениях, которые подтвердили бы подозрения инфекционной болезни.
Особые требования предъявляются к микробиологическим клиническим образцам: • отбор с соблюдением правил асептики; • образец должен быть взят в разгар заболевания; • образец должен быть доставлен для анализа в течение двух часов; • если образец не анализируется немедленно, он обычно хранится на холоде для предотвращения его порчи.
Кровяные культуры Бактеремия означает присутствие бактерий в крови. Из-за экстремальной опасности бактеремии, быстрота и точность идентификации инфекционного агента(ов) является одной из наиболее важных обязанностей клинического микробиолога. Бактерии удаляются из кровеносного русла быстро, так что бактеремия встречается по статистике нечасто и, присутствие бактерий в крови обычно показывает на системную (генерализованную) инфекцию.
Наиболее обычные патогены, обнаруживаемые в крови: • Pseudomonas aeruginosa • кишечные бактерии, особенно Escherichia coli и Klebsiella pneumoniae и грамположительные кокки – Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes.
Классический тип кровяной инфекции – септицемия, в результате которой от очага инфекции через кровь инфекционный агент множественно разносится в различные ткани и образуются новые очаги инфекции. Для септицемии характерно наличие нескольких общих симптомов, обычно это - лихорадка и озноб с последующей потерей сознания. При многих заболеваниях культура крови обеспечивает прямой путь выделения и идентификации инфекционного агента.
Стандартная методика взятия культуры крови: • Отбор крови 10 мл асептически из вены с введением в питательную среду, содержащую антикоагулянт. • Из-за определенного количества кожного загрязнения невозможно полностью в процессе взятия добиться стерильного отбора крови, даже при оптимальных условиях контаминация может достигать 2 -3%. • Культуры инкубируются при 35ºС и проверяются ежедневно в течение 7 дней.
Уринокультуры Уринарные инфекции очень часты, и из-за того, что вызывающие их агенты часто идентичны или подобны бактериям нормальной микрофлоры (например E. coli) большая тщательность должна быть предпринята в бактериологическом анализе мочи. Поскольку моча поддерживает экстенсивный бактериальный рост при многих условиях. Очень большое разнообразие микробов наблюдается при уринарных инфекциях. В большинстве случаев, инфекция наступает как результат занесения микроорганизма в уретру извне.
Значимость микроорганизма в уренальной инфекции обычно результируется в количестве 105 или больше организмов на мл образца, поскольку при отсутствии инфекции контаминация мочи из внешних участков гениталий (почти невозможно этого избежать) результируется в менее чем 103 организмов на мл. Наиболее обычны: • Escherichia coli – 90% • другие микроорганизмы: Klebsiella, Enterobacter, Proteus, Pseudomonas и Streptococcus faecalis.
Из-за относительного высокого числа организмов обнаруживаемых среди значимых, прямое микроскопирование образцов мочи ценно и рекомендуется как часть основной процедуры. В последнее время используют высокочувствительный тест, который показывает очень малое количество АТФ концентрация пропорциональна клеточной биомассе.
Фекальные культуры 1. Правильный сбор и сохранение фекалий 2. Уменьшение времени между забором материала и определением возбудителя 3. Используются – разведение образца фекалий – обычно 1 г, высев на ДДС.
Цереброспинальная жидкость 1. микроскопия образца окрашенного по Граму и Цилю-Нильсену 2. могут быть внеклеточные грамотрицательные диплококки (менингококки) 3. Могут быть внеи внутриклеточные грамположительные диплококки (пневмококки) или небольшие палочки грамотрицательные (Haemophilus influenzae или колиформные организмы
Безопасность работы в клинической микробиологической лаборатории 1. Инфицированный материал доставляется в лабораторию только специальным персоналом. 2. Должны быть эффективные процедуры для уничтожения материала. 3. Работающий с патогенным материалом персонал должен привит. 4. Весь поступающий материал должен рассматриваться как потенциально опасный и обращение с ним должно быть соответствующим. 5. Все пипетки должны быть автоматическими, а пробирки иметь пробки. 6. С лабораторными животными должен работать только обученный персонал 7. Персонал обязан иметь спецодежду, прием воды и пищи в лаборатории строго запрещен.
Удачных зачетов! И остаться без хвостов!
Скачать презентацию Клиническая микробиология Кафедра микробиологии и вирусологии Ив ГМА
Клиническая микробиология.ppt