Кафедра микробиологии вирусологии и иммунологии Каз НМУ Электронное

Кафедра микробиологии, вирусологии и иммунологии Каз. НМУ Электронное пособие на тему: Лабораторная диагностика урогенитального микоплазмоза Подготовлено: Профессором Акышбаевой К. С.

Классификация Сем. Mycoplasmataceae Класс Mollicutes ( «мягкокожие, нежнокожие» ) Род. Mycoplasma Вид. M. hominis M. genitalium U. urealyticum

• M. hominis, M. genitalium - уретриты, простатиты, пиелонефриты, эндокардиты, урогенитальный микоплазмоз беременных (привычное невынашивание беременности). • U. urealyticum- уретриты, • простатиты, хронические воспаления мочевыводящих путей.

• Наиболее выраженным патогенным потенциалом обладает M. genitalium (типичный паразит). • M. hominis является менее патогенной, но встречается значительно чаще при инфекционных процессах мочеполовой системы и чаще у женщин, чем у мужчин. • Уреаплазмы являются условно-патогенными микроорганизмами, способны вызвать ряд заболеваний, но в тоже время нередко их выявляют и у здоровых людей.

Микоплазмы- лишены КС и не способны синтезировать ее компоненты. Характеризуются: - полиморфизмом - кокковидные, ветвящиеся, крупные многоядерные формы, псевдомицелий - множественностью способов деления- бинарное деление, почкование и сегментация. - минимальной репродуцирующейся единицей (ЭТ- 0. 7 - 0. 2 мкм) Ø Содержат ДНК и РНК Ø Способны паразитировать (персистировать) на мембране эукариотической клетки

Резистентность: • Большинство микоплазм погибает при t-44 -55 ч/з 15 - минут. Чувствительны к дез. веществам, высушиванию Устойчивы ко многим лекарственным веществам

Факторы патогенности: • Адгезины- обуславливают взаимодействие с клетками хозяина (м. встраиваться в клеточные мембранымимикрия) • Эндотоксины, экзотоксины Гемолизины • Ферменты и продукты метаболизма (фосфолипаза А, аминопептидазы, нейраминидаза, РНК- аза, ДНК- аза, тимидинкиназы, эндопептидазы).

• Имеют антигены, общие с антигенами клеток хозяина (биологическая мимикрия микоплазм + развитие иммунопатологических процессов)

МИМИКРИЯ МИКОПЛАЗМ

Факторы вирулентности микоплазм – Микоплазмы не инвазируются, колонизируют на поверхности клеток с помощью специфических рецепторов – Разрушают клетки хозяина с помощью токсических продуктов метаболизма

Антигенная структура: Основные АГ- представлены липидами (фосфогликолипидами), полисахаридами и белками. Наиболее иммуногенныповерхностные АГ • Видовая и штаммовая АГ- специфичность. Имеют АГ общие с АГ клеток хозяина (биологическая мимикрия микоплазм развитие иммунопатологических процессов) +

Микоплазмы • с помощью специальной структуры адсорбируются на поверхности клеток хозяина и внедряются в нее. • Могут прикрепляться к сперматозоидам, к эритроцитам, фибробластам, макрофагам, эпителию трахеи. • На мембранах микоплазм могут располагаться вирусы (герпесвирусы, вирусы папилломы человека).

Микоплазмы • являются самыми маленькими самореплицирующимися формами жизни и способны вызывать инфекционный процесс, используя вторую стратегию паразитизма. • Микоплазмы вызывают локальное клеточное разрушение и хромосомные аберрации. • Они не только уклоняются от иммунной системы хозяина, но, благодаря использованию антигенной мимикрии, переключают ее на разрушение собственных органов и тканей. Разнообразные полиорганные проявления микоплазменной инфекции вызваны аутоиммунным характером их патогенеза. • Микоплазмы способствуют развитию и активизации инфекций, использующих ту же стратегию паразитизма, например, ВИЧинфекции

КУЛЬТИВИРОВАНИЕ МИКОПЛАЗМ • Факультативные анаэробы • Метаболизм ограничен в связи с отсутствием у них тех или иных ферментов → рост и размножение зависят от ростовой среды. Требовательны к условиям культивирования (сыворотка, осмотические стабилизаторы, витамины, НК, углеводы и др. ): - триптический перевар сердца КРС - перевар Хоттингера - пептон Мартена • среда Эдварда и др. Окраска по Романовскому-Гимзе

• Характерные колонии - «яичницы-глазуньи» . (уплотненный врастающий центр и нежные края) Ферментативные свойства: • Выявлено отсутствие некоторых необходимых ферментов и аминокислот. Протеолитическими свойствами не обладают

Инкубационный период составляет от 7 до 21 дня. • Пути передачи: - преимущественно половой и трансплацентарный (внутриутробное инфицирование плода и заражение новорожденных при прохождении через инфицированные микоплазмами родовые пути матери) - возможен непрямой путь заражения женщин, особенно девочек, через предметы домашнего обихода и медицинский инструментарий в случае несоблюдения правил его обеззараживания - микоплазмы могут попасть в верхние отделы генитального тракта (инфицирование цервикального канала, эндометрия, фаллопиевых труб) со сперматозоидами – носителями микоплазм.

M. genitalium, M. hominis, U. urealyticum • С этими видами микоплазм связаны воспалительные заболевания урогенитального тракта: - уретриты, циститы, гломеруло-, пиелонефриты, простатиты; - у женщин – вагиниты, сальпингиты, кольпиты, цервициты, эндометриты, а также невынашивание беременности. Считается, что микоплазмами инфицировано не менее 50% мужчин и женщин в возрасте от 30 до 50 лет. У гомосексуалистов M. genitalium обнаруживается чаще (30%), чем у гетеросексуальных мужчин (11%). • Существуют бессимптомные формы заболевания в виде носительства.

Инфекции, ассоциированные с урогенитальными микоплазмами • Значительно распространена смешанная микоплазменная инфекция при трихомонадных, гонококковых и хламидийных поражениях мочеполовых органов. • Эти возбудители могут быть причиной внутриутробных инфекций и врожденных аномалий (как правило, в сочетании с вирусами) в связи со способностью микоплазм (M. genitalium, M. hominis) воздействовать на хромосомы клеток.

ØМикоплазмы являются факторами ВИЧ-инфекции ко- Ø Служат ко-факторами при синдроме хронической усталости

Группы риска - женщины детородного возраста - лица с повышенной сексуальностью - лица с воспалительными заболеваниями гениталий - беременные - женщины с отягощенным акушерским анамнезом и бесплодием.

Лабораторная диагностика • Материал: слизь из влагалища, шейки матки, соскоб из уретры, моча, сперма. • Культуральная диагностика (посев на среды) • Серологический метод: РСК, РИФ, РПГА, ИФА • ПЦР

Основные методы лабораторной диагностики • Лабораторная диагностика микоплазмоза включает два основных метода: культуральный метод ПЦР

Культуральный метод • Большинство видов микоплазм растут медленно: - M. genitalium – более 3 недель - M. hominis – 48 – 72 ч - U. urealyticum – 24 ч, через 48 ч погибает приблизительно 90% клеток U. urealyticum, особенно в плохо забуференной среде.

Культуральный метод – Рост на средах с добавлением сывороток , т. к. нуждаются в холестероле – Рост при 35 -370 C аэробно или анаэробно - Колонии в виде яичницы-глазуньи

Колонии микоплазм

FКолонии микоплазм (фазово-контрастная микроскопия)

Культуральным методом • Исследуют: - центрифугат средней порции утренней мочи - соскобы со слизистой уретры, сводов влагалища, цервикального канала - материал, полученный при лапароскопии, амниоцентезе При простатите исследуют секрет предстательной железы, при бесплодии мужчин – сперму. • Достоинством культуральных методов является возможность получения ЧК для испытания ее чувствительности к АБ. • Недостатки методов – длительность исследования (в отношении M. genitalium), трудности выделения некоторых патогенных штаммов, наличие "некультивируемых микоплазм", не способных расти в отсутствие живых клеток.

КУЛЬТУРАЛЬНЫЙ МЕТОД • • В практике нашли широкое применение готовые тест-системы для бактериологического исследования на микоплазмы и предназначены для выявления двух наиболее распространенных урогенитальных микоплазм: U. urealiticum и M. Hominis: - набор «Уро-тест» производства «Иммунотэкс» ; - тест-системы «MYCOFAST» и «MYCOSCREEN» компании «Eli. Tech» ; «AF Mycoplasma system» производства компании «Liofilchem» - тест-системы «Mycoplasma DUO» фирмы «BIO–RAD» (США), которые позволяют провести идентификацию микоплазм (Mycoplasma hominis и/или Ureaplasma urealyticum) и установить их титр. Помимо одновременного выявления двух микроорганизмов с определением титра тест-наборы параллельно позволяют определять чувствительность к антибиотикам. Инкубация проводится в термостате при 37 °C. Результаты анализа готовы через 24 и 48 ч.

ТРАНСПОРТНЫЕ СРЕДЫ • В случае отдаленности лаборатории оптимальным является забор биоматериала в специальные транспортные среды ( «Mycoplasma DUO» фирмы «BIO–RAD» , США), что увеличивает сроки хранения (при комнатной температуре) и доставки проб до 72 ч без снижения качества исследования.

ПЦР • При ПЦР использование мультипраймеров позволяет одномоментно выявлять ДНК наиболее значимых для диагностики урогенитальных микоплазм, что имеет большое преимущество перед другими методами. • Поскольку U. urealyticum являются УПМ, то в случае получения (+) результата качественной ПЦР целесообразно провести количественную ПЦР в режиме «Real-Time» для выработки тактики ведения пациента (особенно это касается женщин перед ЭКО). Количественную ПЦР следует применять также для оценки эффективности терапии.

• В случае выявления Mycoplasma hominis и/или Ureaplasma urealyticum методом ПЦР, этим больным повторно берут мазки из уретры и цервикального канала, тампоны помещаются во флакон со специальной транспортной средой из набора «Mycoplasma DUO» фирмы «BIO–RAD» (США).

ИФА и реакция прямой иммунофлуоресценции (ПИФ) • • имеют низкую специфичность и чувствительность (около 50– 70%). Выявление АТ к микоплазмам имеет ограниченное значение в диагностике микоплазмоза.

ПРИНЦИП ДИАГНОСТИКИ УРОГЕНИТАЛЬНОГО МИКОПЛАЗМОЗА Ureaplasma spp. и Mycoplasma hominis Культуральный метод с • количественным определением микоплазм • или ПЦР в реальном времени (количественное определение микоплазм) Концентрация микоплазм более 104 микробных тел в 1 мл или 1 г отделяемого может иметь диагностическое значение, особенно при наличии конкретного заболевания, такого как вульвовагинит, цервицит у женщин, уретрит у мужчин, в то время как более низкие концентрации не должны учитываться, поскольку в таких количествах микоплазмы (кроме патогенных видов) могут обнаруживаться у здоровых людей.

ПРИНЦИП ДИАГНОСТИКИ УРОГЕНИТАЛЬНОГО МИКОПЛАЗМОЗА Mycoplasma genitalium исключительно молекулярно-биологическими методами (ПЦР, ПЦР в реальном времени).

реакция транскрипционной амплификации • Весьма перспективна, в частности NASBA в реальном времени. • Недопустимо использование методов прямой иммунофлюоресценции (ПИФ) для выявления генитальных микоплазм.

Лечение и профилактика: • Вакцинопрофилактика не разработана. Для лечения применяют антибиотики тетрациклинового ряда, макролиды, фторхинолоны. • Профилактика урогенитальных микоплазмозов аналогична методам предупреждения прочих венерических заболеваний.