Кафедра микробиологии иммунологии и вирусологии ГБОУ ВПО Кем

Кафедра микробиологии, иммунологии и вирусологии ГБОУ ВПО Кем. ГМА Минздравсоцразвития России Гепатотропные вирусы

Вирусные гепатиты: определение n Это группа нозологически самостоятельных заболеваний печени, этиологическими агентами которых являются истинно гепатотропные вирусы (мишень – клетки печени)

Классификация гепатитов по механизму заражения Энтеральные (фекально-оральный механизм) Гепатиты А, Е n Парентеральные (контактный механизм) Гепатиты В, С, D, G, TTV, SEN n

Гепатоцитотропные вирусы Царство Vira ДНК — содержащие РНК – содержащие Семейство Picornaviridae Род Hepatovirus Семейство Hepadnaviridae вирус гепатита А (HAV -Hepatitis A virus) Род Orthohepadnavirus Семейство Flaviviridae Вирус гепатита В (HBV – Hepatitis B virus) Род Hepacivirus Вирус гепатита С (HСV -Hepatitis С virus) Вирус гепатита G (HGV -Hepatitis G virus) Семейство Calciviridae Вирус гепатита Е (HЕV -Hepatitis Е virus) Неклассифицированные Вирус гепатита D (HDV -Hepatitis D virus)

Вирус гепатита В Hepatitis B virus - HBV

Таксономия n n n Царство Vira Семейство Hepadnaviridae Род Orthohepadnavirus

HBV: морфология n n Оболочечный вирион d=42 нм Имеет сердцевину (core -ядро) и суперкапсид

HBV: морфология сердцевины n n n икосаэдральный капсид 180 капсомеров кольцевая частично двунитевая ДНК Неполная ДНК (1700 -2800 нуклеотидов) – это плюснить Полная ДНК (3200 нуклеотидов) – минус –нить Обратная транскриптаза и протеинкиназа

Вирусные антигены: HBs. Ag n n HBs. Ag (австралийский антиген)-поверхностный, обеспечивает прикрепление вируса к мембране гепатоцитов. Кодируется s-геном и прилежащих у нему коротких ДНКфрагментов, pre-S 1 и pre-S 2. Их экспрессия обуславливает 3 гликозилированных белка: HBs. Ag-S – (short-короткий) приходится 70% поверхностного белка HBs. Ag-M- (middle-средний) – 15% HBs. Ag-L – (long-длинный) – 15% HBs. Ag- протективный антиген, обнаруживают в крови

Вирусные антигены: HBc. Ag n n HBc. Ag- (core-ядро, сердцевина) это главный белок нуклеокапсида вириона. Кодируется С-геном. В кровь не синтезируется. Обнаруживается только в ядрах гепатоцитов

Вирусные антигены: HBe. Ag n n n HBe. Ag - (envelop-оболочка) – образуется в результате протеолиза HBc. Ag, встроенного в клеточные мембраны. Отличается от HBc. Ag по эпитопам. Не входит в состав вириона, а выделяется в кровь. Его содержание указывает на активность вирусной репликации

Происхождение HBе-Ag HBc-Ag прохождение через мембрану гепатоцита отщепление пептида выход его в кровь = HBe. Ag

Вирусные антигены: HBx. Ag n n HBx. Ag-неструктурный белок. Определяется в сыворотке крови и в печени при высоком уровне репликации Является трансактиватором клеточных онкогенов. Способствует развитию гепатоцеллюлярной карциномы

Вирусные антигены: HBVpol n n n HBVpol (полимераза) - полифункциональный фермент сердцевины вириона. Продукт работы p-гена. Обладает активностью ДНК-полимеразы, обратной транскриптазы и РНК-азы Играет ключевую роль в репликации вируса

HBV: антигены Название HBs Локализация в вирионе Химическая природа гликопросуперкапсид теин + липид Нахождение Иммуногенность мембрана гепатоцита, кровь + HBc капсид нуклеопротеин ядро гепатоцита + HBe – протеин кровь + HBx Мало изучен. Вероятно имеет отношение к раковой трансформации гепатоцитов –

Репликация HBV n n n Адсорбция на поверхности гепатоцита с помощью пре. S 1 или пре. S 2 Проникновение путем рецепторного эндоцитоза, раздевание и транспорт в ядро Неполная плюс-нить ДНК достраивается с помощью вирусной ДНК-полимеразы до полной В ядре клеточная РНК-полимераза на матрице ДНК синтезирует 2 вида РНК: и. РНК и прегеномную РНК и-РНК перемещается в цитоплазму и транслируется на рибосомах

Репликация HBV (продолжение) n n На прегеномной РНК с помощью вирусной РНК-зависимой ДНК полимеразы синтезируется полная минус –нить На полной минус-нити синтезируется неполная плюс-нить ДНК Сборка вируса Выход из клетки путем почкования

Интеграция генома HBV n n До момента достройки неполной плюс-нити ДНК до двунитевой процесс осуществляется как и продуктивном типе взаимодействия. Двойная нить ДНК встраивается в геном гепатоцита. Экспрессия всех генов вируса блокируется, за исключением s-гена, который активизируется за счет клеточных промоторов. В кровь в избытке синтезируется HBs. Ag

Иммунологические механизмы персистенции HBV n n Терминальный белок HBV-полимераза угнетает экспрессию гена интерферона (IFN) в фибробластах, а также снижает чувствительность клеток к α-IFN Происходит прямое повреждение вирусом дендритных клеток II типа и макрофагов, которые в норме секретируют иммунорегуляторные цитокины – IL-12, IL-18 и α-IFN, которые оказывают воздействие на вирусную репликацию Снижается продукция EK γ-IFN IL-10, поэтому становится недостаточным контроль секреции коллагена в печени и усугубляются фиброзные процессы Так как EK сами подвергаются инфицированию HBV они не оказывают прямого цитолитического эффекта на инфицированные гепатоциты

Эпидемиология вирусного гепатита В Антропонозная инфекция n Источники -больные острой формой гепатита, -хронической формой гепатита, -вирусоносители Механизм передачи - контактный Вирус обнаруживается в следующих секретах: Сыворотка крови Сперма Вагинальный секрет Слюна, слезы Пот, моча, ликвор n

Пути передачи HBV-инфекции Естественные Пути Искусственные Прямой сексуальный контакт Парентеральное введение Вертикальный наркотиков Контактно-бытовой Гемотрансфузии Оперативное вмешательство

Типы HBV-инфекции 1. Продуктивный тип взаимодействия: типичная острая манифестная форма гепатита острая субклиническая форма гепатита фульминантный гепатит n 2. Интегративный тип взаимодействия: Хронический гепатит с активной репликацией и переходом в цирроз или гепатоклеточную карциному Носительство (присутствие в крови HBs. Ag и вирусной ДНК в печени). n n n

Гепатит В: патогенез при продуктивной инфекции Кровяное русло гепатоциты (ч/з 2 нед. после инфицирования) репликация экспрессия вирусных антигенов на мембране гепатоцитов иммуноопосредованный цитолиз (ЦТЛ), апоптоз, аутоиммунные процессы осложнения • цирроз печени • карцинома печени • Васкулиты, гломерулонефрит (ГНТ III тип)

Периоды при остром гепатите n n Инкубационный – 1 -6 месяцев. Продромальный (преджелтушный) – от 1 -5 недель. Желтушный – 1 -5 недель. Реконвалесценции – от 2 до 12 мес.

Гепатит В: основные направления диагностики 1. 2. 3. Выявление вирусных антигенов (биоптат, serum) – ИФА, РИА, РНГА Выявление иммуноглобулинов к вирусным антигенам (serum) – ИФА, РИА, РНГА Выявление ДНК вируса (плазма крови) – ПЦР, метод молекулярной гибридизации (ММГ)

Маркеры гепатита В

Гепатит В: диагностическое значение серологических маркеров Антигены Антитела HBs- HBe- HBs- HBc Ag Ag Ig -Ig. G HBc. Ig. M Варианты клинического течения инфекции + + – – + Острая фаза гепатита В (ранний период) + - – + – Острая фаза гепатита В (поздний период) - – + + – Острая фаза (реконвалесценция) + – - + – Носительство HBV (персистенция)

Специфическая профилактика гепатита В Генно-инженерная вакцина, содержащая HBs. Ag: n «Энджерикс В» n «Эувакс В» n «Эбер-биовак НВ» Схема вакцинации: n Плановая 0 -1 -6 n Экстренная 0 -1 -2 -12 n

Вирус гепатита С Hepatitis C virus - HCV

Актуальность HCV-инфекции n n n Инфицировано вирусом гепатита С 3% населения Земли (2008 г). Чаще заражаются молодые люди в возрасте 15 -29 лет Инфицирование в 50 -80% случаев ведет к хронизации и смертельным осложнениям (цирроз, рак печени).

Таксономия HCV n n Семейство Flaviviridae Род Hepacivirus

Морфология вириона HCV Мелкий, сложный вирион d=30 -38 нм n Капсид кубический состоит из белка С n Геном- линейная однонитевая плюс-РНК n На суперкапсиде гликопротеины Е 1 и Е 2 n Обладает интегральным белком P 7, выполняющего функцию ионного канала n 7 неструктурных белков (NS – nonstructural): NS 2, NS 3, NS 4 A, NS 4 B, NS 5 A, NS 5 B и F белок n

Вариабельность HCV Высокая частота мутаций, частые ошибки в репликации РНК из-за отсутствия коррекции ошибок Формирование геновидов и субтипов (квазивиды) 6 генотипов (1 а, 1 в, 2 а, 2 в, 2 с, 3 a) и около 100 субтипов Отличаются по тяжести заболеваний, интенсивности вирусемии, чувствительности к терапии

Эпидемиология гепатита С Антропоноз Источники: n -Больные острой формой -Больные хронической формой -Лица с бессимптомными формами -Лица с малосимптомными формами Механизм передачи: контактный

Пути передачи HCV Искусственные: -Парентеральное введение наркотиков -Медицинские манипуляции -Татуаж, ногтевой дизайн Естественные: -Половой -Вертикальный -Контактно-бытовой (маникюр, зубные щетки)

Взаимоотношение HCV с человеком

Основные механизмы персистенции вируса гепатита С n n n Антигенная вариабельность оболочечных белков, благодаря чему вирусные клоны уклоняются от нейтрализующих антител Сокращение внутриклеточного пула до уровня, не воспринимаемого Т-лимфоцитами Снижение экспрессии HLA на инфицированных клетках, что нарушает Т-зависимую элиминацию вируса Антиинтерфероновая активность вируса (NS 5) Внепеченочная резервация - в лимфоидной ткани

Иммунный ответ при хронизации заболевания n n n Слабый CD 8+ T-клеточный ответ на протеины HCV, что ведет к снижению синтеза γ-IFN Угнетение продукции α - INF и высокий уровень в сыворотке крови TNF-α, IL-1β, IL-6, IL-8 Высокий уровень в периферической крови CD 4+CD 25+ регуляторных Т-клеток, которые вносят вклад в патогенез аутоиммунных процессов

Гепатит С: общая характеристика заболевания n n n стёртое течение острого гепатита склонность к хронизации может сопровождаться: n n развитием цирроза развитием первичного рака печени

Гепатит С: лабораторная диагностика 1. 2. 3. Определение антител к HCV – ИФА. Выявление генома HCV в плазме крови – ПЦР Обнаружение HCVантигенов -ИФА

Диагностика вирусного гепатита С n n 1 этап (А) – Выявление РНК HCV в полимеразной цепной реакции. Сроки обнаружения РНК – через 7 -21 день после инфицирования. Обязательно определяют в ПЦР генотип и подтип вируса для определения стратегии лечения.

Диагностика вирусного гепатита С n n 1 этап (Б)-определение суммарных HCV-антител к C, NS 3, NS 4, NS 5 антигенам (HCV-total) с помощью ИФА. Сроки появления антител – 20 -150 дней после инфицирования 2 этап- дифференцированное определение антител к антигенам C, NS 3, NS 4, NS 5 с помощью ИФА или иммуноблотинга. n Обнаружение антител к 2 и более пептидам – положительный результат

Вирус гепатита Д Hepatitis D virus - HDV

Гепатит D: характеристика возбудителя • • • Мельчайший РНК-содержащий (1700 нуклеотидов), диаметр 36 нм одноцепочечная минус-РНК+ 2 -3 полипептида= HDAg Антиген HDV не экспрессируется на гепатоцитах, антитела не обладают протективным эффектом Лишен суперкапсида, поэтому нужен вирус-хелпер: HBV, от которого получает суперкапсид – HBs-Ag Оказывает прямое цитопатическое действие на гепатоцит (РНК HDV блокирует металлорганические промоторы клетки).

Гепатит D: общая характеристика заболевания Присоединение дельта-инфекции к гепатиту В: n развитие тяжёлых злокачественных форм болезни n развитие хронических форм болезни n раннее формирование цирроза печени

Гепатит D: лабораторная диагностика n Наибольшее диагностическое значение: n n выявление антигенов гепатита D n n анти. HDV-Ig. М и анти. HDV-Ig. G– ИФА. HDV (Ag) - ИФА выявление генома HDV – ПЦР

Исходы вирусных гепатитов

Вирусы G, TT

HGV (Hepatitis G virus) n n n Геном клонирован в 2 независимых лабораториях – Abbot и Genelabs (1960) Семейство Flaviviridae Род Hepacivirus

Морфология HGV n n n n Геном – это плюс РНК, состоящая из 2900 нуклеотидов Геном нестабилен в области кодирования структурных белков. Известно 5 генотипов вируса: GB-A, GB-B, GB-C. Имеет сердцевинный HGc. Ag (core) Имеет поверхностный HGenv. Ag (envelop) Ферменты вириона - протеиназа, геликаза, РНКзависимая РНК-полимераза Чаще развивается здоровое носительство

TTV (TT virus) n n Был открыт японскими учеными в 1997 году Семейство Circoviridae ? (Paracircoviridae).

Морфология TTV n n n Вирион диаметром 30 -50 нм Лишен липидной оболочки Капсид кубической симметрии из структурного белка VP 1 Геном- несегментированный циркулярный, однонитевая ДНК Генетически неоднороден: более 10 генотипов

Эпидемиология TTV-инфекции n n Вирусоносительство достигает 80% в Японии, Сингапуре, Саудовской Аравии Механизм: контактный или фекальнооральный ? Пути: через контаминированные кровью предметы, вертикальный, половой? Резервуар вируса: гепатоциты, лимфоидная ткань, костный мозг, покоящиеся мононуклеары

Основные принципы этиотропной терапии вирусных гепатитов n n Препараты интерферона: реаферон, роферон А, виферон, интрон А. Интерфероногены: циклоферон, амиксин, неовир Аналоги нуклеозидов: ламивудин, ацикловир, зидовудин, ганцикловир Иммуномодуляторы: непол, тимозин, полиоксидоний

Спасибо за внимание, уважаемые студенты!